Hsp90抑制剂新生霉素诱导HL-60细胞凋亡及其机制

目的研究Hsp90抑制剂新生霉素(novobiocin,NB)诱导HL-60细胞凋亡的作用,探讨该作用与线粒体凋亡途径的关系,并进一步研究NB对Hsp90客户蛋白(clientprotein)AKT和ERK2功能的影响。方法细胞用NB处理后,采用AO/EB染色后荧光显微镜观察凋亡形态,采用AnnexinV-FITC/PI双染后流式细胞仪检测细胞凋亡率,分光光度法检测Caspase-9和Caspase-3的活性,用蛋白免疫印迹法检测细胞色素C的含量,以及procaspase-3、p-AKT(Ser473)和p-ERK2的蛋白水平。结果NB能明显抑制HL-60细胞增殖,IC50是0.3546mmol.L-1;NB能促进细胞色素C释放入胞质,激活Caspase-3/9的活性,触发HL-60细胞凋亡;NB能抑制AKT和ERK的功能,使细胞内p-AKT(Ser473)和p-ERK2的蛋白含量减少。结论NB可通过线粒体途径诱导HL-60细胞凋亡,还可干扰Hsp90伴侣功能阻断增殖信号通路,抑制HL-60细胞生长。

HSP90C-端抑制剂新生霉素与HSP90N-端抑制剂联合应用对白血病细胞的作用

目的体外研究HSP90 C-端抑制剂新生霉素(novobio-cin,NB)与HSP90 N-端抑制剂格尔德霉素(Geldnamycin,GA)的联合应用对Bcr-Abl-的HL-60细胞和Bcr-Abl+的HL-60/Bcr-Abl细胞增殖抑制及诱导凋亡的作用及该作用与细胞色素C释放、Caspase-9/3活性的关系,并且研究序贯应用NB和GA对HL-60细胞的作用。方法细胞用NB和GA联合处理后,采用AO/EB和AnnexinV/PI双染检测细胞凋亡,分光光度法检测Caspase-9/3的活性,用蛋白免疫印迹法检测细胞色素C和procaspase-3的含量。用MTT法检测NB→GA和GA→NB序贯处理对HL-60细胞增殖的抑制作用。结果NB和GA合用抑制HL-60细胞增殖有单独相加的作用;NB和GA合用激活HL-60和HL-60/Bcr-Abl细胞中Caspase-3/9的活性程度高于单独使用NB或GA,协同触发细胞凋亡;预先用NB处理可增强HL-60细胞对GA的敏感性,相比之下,预先用GA处理不影响HL-60细胞对NB的敏感性。结论NB和GA合用可协同抑制白血病细胞生长,诱导细胞凋亡;NB可增强GA对HL-60细胞的抑制能力,而GA不影响NB对HL-60细胞的抑制作用。

基于改进的CoMFA方法研究新生霉素抑制剂的定量构效关系

为了改善药物开发过程中由于候选分子类药性差而导致药物开发失败的现状,通过克服比较分子场分析(CoMFA)自身描述符的局限性,对70个新生霉素小分子进行大量的描述符计算,每个小分子得到6 122个描述符,并对所得描述符进行筛选,将最终获得的4个关键描述符引入标准CoMFA模型中,以获得有助于判断目标小分子是否具有类药性的改进的CoMFA模型.结果显示,所得最优模型是同时添加了POS_05_-O-和极性可及面积(polar surface area,PSA)两个描述符的.通过对该改进的CoMFA模型进行统计分析,发现该模型的Q^2、R_(ncv)~2和R_(pre)~2均比标准CoMFA模型提高.所得模型的等高线图为分子改造提供了建议,并验证了模型的可靠性.分析POS_05_-O-和PSA描述符在70个小分子中的分布,发现有20个小分子既含有POS_05_-O-描述符,且PSA在90~110,占高活性分子的91%,表明这2个描述符的确有利于提高小分子活性,同时也有利于分子的口服生物利用度.

新生霉素抑制HL-60／Bcr-Abl细胞增殖与阻断Hsp90伴侣功能的关系

目的研究新生霉素(novobiocin,NB)对HL-60/Bcr-Abl细胞的作用,并探讨该作用是否与Bcr-Abl水平和热休克蛋白90(Hsp90)分子伴侣的功能有关。方法用蛋白免疫印迹法检测Bcr-Abl的含量,采用免疫共沉淀的方法研究Hsp90分子伴侣的功能。先将Bcr-Abl与其分子伴侣共沉淀下来,然后用免疫印迹法检测沉淀物中与Bcr-Abl结合的Hsp90和Hsp70含量变化。应用蛋白酶体抑制剂ALLnL研究Bcr-Abl降解的途径。结果NB能降低HL-60/Bcr-Abl细胞中Bcr-Abl的蛋白水平,NB使Bcr-Abl与Hsp90和Hsp70的结合减少,促进蛋白酶体降解Bcr-Abl蛋白,ALLnL处理后NP-40insoluble部分Bcr-Abl蛋白水平提高。结论该研究证明NB通过干扰Hsp90伴侣功能,减少Bcr-Abl与Hsp90和辅伴侣的结合,从而促进蛋白酶体降解Bcr-Abl蛋白,最终抑制HL-60/Bcr-Abl细胞增殖。

新生霉素对STI571耐药K562/G01细胞的作用

目的研究热休克蛋白90(Hsp90)抑制剂新生霉素(novobiocin,NB)对STI571耐药K562/G01细胞生长的抑制作用,并研究NB和STI571联合应用对STI571敏感和耐药细胞的作用,并进一步探讨该作用与Bcr-Abl蛋白水平和Bcr-Abl激酶水平的关系。方法用MTT法检测NB对K562和K562/G01细胞生长的抑制作用,用金氏公式评价药物合用体外是否有协同作用,用蛋白免疫印迹法检测Bcr-Abl蛋白水平和p-Tyrosine水平。结果NB能抑制K562和K562/G01细胞增殖,IC50分别是0.4353mmol.L-1和0.3490mmol.L-1;NB和STI571联合应用对STI571敏感和耐药细胞均有协同作用;NB能使K562和K562/G01细胞内Bcr-Abl和p-Tyrosine蛋白含量减少。结论NB通过减少Bcr-Abl和p-Tyrosine蛋白含量,抑制STI571耐药细胞K562/G01的增殖,NB和STI571有协同效应。

新生霉素衍生物FM-Nov17抑制慢粒白血病细胞增殖与其诱导DNA损伤的关系

目的研究新生霉素衍生物FM-Nov17抑制K562和K562/G01细胞增殖的作用与其诱导DNA损伤的关系。方法 3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)及羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂(CFSE)染色法检测FM-Nov17对K562及K562/G01细胞增殖的影响;流式细胞光度术检测FM-Nov17诱导K562及K562/G01细胞DNA损伤、细胞周期阻滞和细胞凋亡;Western blot探讨FM-Nov17对DNA损伤、细胞周期和细胞凋亡调控通路相关蛋白表达的影响。结果 FM-Nov17在体外可明显抑制K562和K562/G01细胞增殖,半数抑制率(IC50)分别为(58.28±0.31)和(62.36±0.14)μmol/L,并减少K562及K562/G01细胞的增殖分裂代数;FM-Nov17能诱导细胞DNA损伤和阻滞细胞于G2/M期,并增加细胞凋亡率,呈剂量依赖关系;FM-Nov17能增加γ-H2AX、ATM、P53的磷酸化水平以及Parp和Caspase 3的切割,减少CDC25A和CDC25C的表达。结论FM-Nov17通过诱导DNA的损伤,阻滞细胞于G2/M期,激活线粒体凋亡通路,诱导细胞的凋亡,抑制K562和K562/G01细胞的增殖。

新生霉素对人肝癌细胞的抑制作用

目的 研究新生霉素 (NOVO)对人肝癌细胞的抗癌及其对临床常用抗癌药的调节作用。方法 采用抗癌药敏感试验 (MTT法 ) ,测定NOVO和 5种临床常用抗癌药单独应用对手术切除的原发性肝癌病人的肝癌细胞的抑制作用 ,同时测定NOVO和此 5种抗癌药联合应用的抑制作用。结果 NOVO对人肝癌细胞有抗癌作用 ,与 5种抗癌药联合应用对肝癌细胞的抑制率在低、中、高浓度均高于 5种抗癌药单独应用 ,差异均有显著性 ,P <0 .0 5。结论 结果表明NOVO对人肝癌细胞有较强的抗癌作用 ,并对诸如MMC、5 FU、DDP、CTX、ADM等有加强作用 ;

新生霉素抑制K562细胞增殖与阻断Hsp90伴侣功能的关系

目的研究新生霉素(novobiocin,NB)对K562细胞的作用,并探讨该作用是否与热休克蛋白90(Heat shock protein90,Hsp90)分子伴侣的功能有关。方法用蛋白免疫印迹法检测Bcr-Abl的含量,采用免疫共沉淀的方法研究Hsp90分子伴侣的功能。先将Bcr-Abl与其分子伴侣共沉淀下来,然后用免疫印迹法检测沉淀物中与Bcr-Abl结合的Hsp90和Hsp70含量变化。结果NB能降低K562细胞中Bcr-Abl的蛋白水平,使Bcr-Abl与Hsp90和Hsp70的结合减少。结论本研究首次证明干扰Hsp90伴侣功能,减少Bcr-Abl与Hsp90和辅伴侣的结合与NB抑制慢性粒细胞白血病(chronic myelogenous Leukemia,CML)相关。

新生霉素诱导前列腺癌PC-3细胞自噬的研究

目的:通过体外细胞实验,观察新生霉素是否抑制了前列腺癌PC-3细胞的增殖,并在分子水平和形态学上证实新生霉素通过细胞自噬抑制了前列腺癌PC-3细胞的增殖。为新生霉素应用于去势抵抗性前列腺癌(castration-resistant prostate cancer,CRPC)的临床治疗提供理论和实验依据。方法:设置对照组和不同浓度的新生霉素实验组,作用前列腺癌PC-3细胞24小时后,利用MTT法测定对照组和不同浓度实验组的增殖率,并计算出新生霉素的半抑制率。透射电镜观察对照组及实验组细胞内的自噬体。利用免疫荧光技术,在荧光显微镜下观察对照组和不同浓度实验组发生细胞自噬时的自噬标志性蛋白LC-3Ⅱ和自噬底物蛋白p62的不同。利用RT-PCR在mRNA水平上检测对照组和不同浓度实验组的自噬相关基因LC-3Ⅱ、Beclin-1的表达。结果:MTT结果示新生霉素能使PC-3细胞的增殖明显受到抑制(F=569.26,P=0.000),其抑制率随着药物浓度的增加而增加,根据公式计算出其IC50=1.52mmol/L。透射电镜观察可见实验组PC-3细胞质内自噬体和自噬溶酶体数量较对照组多,且随着浓度的增加自噬体数量增加。自噬体在细胞中的分布通过绿色荧光FITC标记的自噬特异性蛋白LC-3Ⅱ在荧光显微镜下清晰显示,在细胞膜附近有绿色荧光呈散点状分布,随着实验组新生霉素浓度的增加荧光强度增加。而绿色荧光FITC标记的自噬底物蛋白p62在荧光显微镜下的强度随着药物浓度的增加而降低。RT-PCR在mRNA水平上检测到随着药物浓度的增加自噬相关基因LC-3Ⅱ、Beclin-1的表达量升高。结论:在体外细胞实验中,新生霉素能够在一定浓度范围内呈浓度依赖性的抑制PC-3细胞增殖。新生霉素能在mRNA水平上增强Beclin-1、LC-3Ⅱ的表达。新生霉素可能是通过诱导细胞自噬性死亡来抑制前列癌PC-3细胞的增殖。

Hsp90抑制剂新生霉素诱导K562细胞凋亡的机制

目的研究Hsp90抑制剂新生霉素（novobiocin，NB）诱导K562细胞凋亡的作用，探讨该作用与线粒体凋亡途径的关系，并进一步研究NB对Hsp90客户蛋白（client protein）AKT和ERK功能的影响。方法细胞用NB处理后，采用AO／EB双染后检测细胞凋亡，分光光度法检测Caspase-9和Caspase-3的活性，用蛋白免疫印迹法检测细胞色素C的含量，以及procaspase-3、p-AKT和p-ERK的蛋白水平。结果NB能显著抑制K562细胞增殖，IC50是0．4353mM；NB能促进细胞色素C释放入胞浆，激活caspase-3／9的活性，触发K562细胞凋亡；NB能抑制AKT和ERK的功能，使细胞内p-AKT和p-ERK的蛋白含量减少。结论NB可通过线粒体途径诱导K562细胞凋亡，还可干扰Hsp90伴侣功能阻断增殖信号通路，抑制K562细胞生长。

新生霉素与格尔德霉素的联合及序贯应用对K562细胞的作用

目的研究Hsp90C-端抑制剂新生霉素（NB）与Hsp90N-端抑制剂格尔德霉素（GA）的联合应用对K562细胞增殖的抑制作用及诱导凋亡的作用，该作用与细胞色素C释放、Caspase-9和Caspase-3活性的关系，并且研究序贯应用NB和GA对K562细胞的作用。方法细胞用NB和GA联合处理后，采用AO／EB双染检测细胞凋亡，分光光度法检测Caspase-9和Caspase-3的活性，用蛋白免疫印迹法检测细胞色素C和procaspase-3的含量。用MTT法检测NB→GA和GA→NB序贯处理对K562细胞增殖的抑制作用。结果NB和GA合用抑制K562细胞增殖有单独相加的作用；NB和GA合用激活caspase-3／9的活性程度高于单独使用NB或GA，协同触发K562细胞凋亡；预先用NB处理可增强K562细胞对GA的敏感性，相比之下，预先用GA处理不影响K562细胞对NB的敏感性。结论NB和GA合用可协同抑制K562细胞生长，诱导凋亡；NB可增强GA对K562细胞的抑制能力，而GA不影响NB对K562细胞的抑制作用。

新生霉素抑制拓扑异构酶Ⅱ对多瘤病毒DNA合成的影响

本文报告了Ⅱ型拓扑异构酶抑制剂——新生霉素对多瘤病毒DNA合成的抑制作用,发现新生霉素对细胞和病毒DNA的体外合成具有不同的抑制曲线。新生霉素在复制过程中抑制复制中间物转变成成熟的病毒DNA分子的过程,同时影响病毒DNA分子的负超螺旋密度。本文结果提示Ⅱ型拓扑异构酶是病毒DNA复制末期所必须的酶。

新生霉素通过诱导DNA损伤抑制慢粒白血病细胞增殖

目的研究新生霉素(novobiocin,Nov)在体外抑制慢粒白血病(CML)细胞增殖作用与诱导DNA损伤的关系。方法MTT及羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂(CFSE)染色法检测Nov对CML细胞增殖的影响;流式细胞术检测CML细胞反应性氧自由基(ROS)含量、DNA损伤数量、细胞周期阻滞情况和细胞凋亡的比例;Western blot探讨Nov对DNA损伤、细胞周期和细胞凋亡调控通路相关蛋白表达的影响。结果 Nov明显抑制CML细胞增殖,半数抑制率(IC50)分别为(232.50±0.22)μmol·L-1和(237.10±0.13)μmol·L-1,减少CML细胞的增殖分裂代数;Nov增加细胞ROS水平,诱导细胞阻滞在G2/M期并增加凋亡率,呈剂量依赖关系;Nov增加H2AX、ATM、P53的磷酸化水平以及Parp和Caspase-3的切割,而减少CDC25A和CDC25C的表达。结论Nov通过激活ROS产生,诱导CML细胞DNA的损伤和线粒体途径激活的细胞凋亡。

新生霉素抑制血管生成及其与长春新碱的协同作用

目的 研究新生霉素的抑制血管生成作用及其机制。方法 以鸡胚尿囊膜模型测定对血管生成的作用 ,并分别用MTT法、明胶酶谱法等观察新生霉素对于内皮细胞和肺癌PG细胞的影响。结果 新生霉素 2 0 0 μg egg对鸡胚尿囊膜血管生成的抑制率为 68 7% ,且呈浓度依赖性抑制内皮细胞的增殖、运动、MMP 2分泌以及管腔的形成 ;新生霉素和长春新碱对血管生成及PG细胞的增殖均有明显的协同作用。结论 本研究首次确定新生霉素具有抑制血管生成活性 。

新生霉素衍生物FM-NOV17抑制Her2^+乳腺癌细胞的作用及其机制

目的研究新生霉素衍生物FM-NOV17对乳腺癌Skbr3细胞的作用,并探讨该作用是否与其干扰热休克蛋白90(Hsp90)分子伴侣的功能从而促进Her2降解有关。方法用蛋白免疫印迹法检测Her2的含量,采用免疫共沉淀的方法研究FM-NOV17对乳腺癌细胞Hsp90分子伴侣功能的影响。用免疫共沉淀的方法将Her2与其分子伴侣复合物沉淀下来,用免疫印迹法检测沉淀物中与Her2结合的Hsp90和辅伴侣Hsp70含量的变化。结果 FM-NOV17能降低乳腺癌细胞Skbr3中Her2的蛋白水平,FM-NOV17使Her2与Hsp90和Hsp70的结合减少,降低Her2蛋白水平,诱导细胞周期阻滞和凋亡。结论 FM-NOV17通过干扰Hsp90伴侣功能,减少Her2与Hsp90和辅伴侣的结合,降低Her2蛋白量,最终抑制乳腺癌细胞增殖。

新生霉素对沙门氏菌检测的影响

新生霉素对沙门氏菌检测的影响杨玲，姜焱，文其乙，焦新安，刘秀梵，张如宽扬州大学农学院动物医学系（２２５００９江苏扬州）沙门氏菌病是一种重要的人畜共患病，也是当今世界上引起食物中毒频率最高的食源性疾病之一。由于沙门菌污染食品而爆发食物中毒的经常可见。据...

新生霉素的抗肿瘤及对临床常用化疗药的调节作用

新生霉素的抗肿瘤及对临床常用化疗药的调节作用陆云飞林进令邱庆明因新生霉素对肿瘤联合化疗可能有重要作用［１，２］，但目前国内外关于新生霉素对人类肿瘤有无抵抗作用以及对临床常用化疗药的调节作用的报道较少。因此，表１新生霉素与７种抗癌药对肝癌、胃癌和乳腺癌...

新生霉素抑制TRPV1表达并改变辣椒素膜间转运的研究

目的探讨新生霉素(novobiocin,NOVO)对肠黏膜辣椒素转运的调控作用。方法体外Ussing chamber技术评价不同浓度NOVO刺激下辣椒素在不同肠黏膜透过量的差异。不同剂量NOVO对成年大鼠灌胃后测定各肠段瞬时受体电位香草酸亚型1(transient receptor potential vanilloid 1,TRPV1)表达量。最后用LC-MS/MS技术检测NOVO对大鼠po辣椒素体内药动学参数的影响。结果体外结果显示,5~50μmol·L^(-1)NOVO浓度依赖性地抑制辣椒素肠黏膜的透过,产生的抑制效果与TRPV1抑制剂钌红相当。体内结果示,NOVO预处理显著减少大鼠各肠段TRPV1的mRNA和蛋白表达。此外,NOVO降低po辣椒素的C_(max)和AUC,但是对t_(max)无影响。然而,100~200μmol·L^(-1)NOVO未表现出相似的作用,对肠黏膜透过率、肠段TRPV1表达和体内药动学参数无抑制作用。结论NOVO可能通过抑制肠黏膜中TRPV1表达而减弱辣椒素经肠黏膜转运的能力,可能是1种新发现的TRPV1抑制剂。

复方鱼肝油氧化锌软膏治疗新生儿尿布皮炎的疗效观察

观察复方鱼肝油氧化锌软膏治疗新生儿尿布皮炎的临床效果。将68例发生尿布皮炎的住院新生儿随机分为观察组和对照组各34例。两组患儿均在大小便后以婴儿柔湿巾清洁臀部,观察组以消毒棉签涂复方鱼肝油氧化锌软膏于患处,对照组患处涂红霉素软膏。比较两组临床疗效及皮炎消退时间。两组疗效比较,观察组的累积有效率和治愈率优于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。复方鱼肝油氧化锌软膏治疗新生儿尿布皮炎可有效缩短病程,疗效显著。

新生儿表皮葡萄球菌败血症12例临床分析

新生儿败血症中大肠杆菌和金黄色葡萄球菌曾是重要的致病菌,近年来表皮葡萄球菌的致病性受到人们的重视,在新生儿败血症中成为一个重要的病原。本文总结1992年1月至1993年6月一年半中我科收住新生儿败血症共28例,其中表皮葡萄球菌败血症12例,占全部病例的42％,现将12例新生儿表皮葡萄球菌败血症做一分析: 临床资料 1.收集1992年1月～1993年6月在本科收住的临床表现符合新生儿败血症者28例。