人参多糖对新甲型H1N1流感病毒灭活疫苗的免疫增强作用

在流感灭活疫苗中添加佐剂可以提高疫苗的免疫原性,节约抗原用量。一些天然中草药多糖具有潜在的佐剂效应。本文探讨了人参多糖(ginseng polysaccharide,GPS)在新甲型H1N1流感病毒裂解型灭活疫苗中的佐剂效应。将不同剂量GPS与新甲型H1N1流感病毒灭活疫苗混合,共同免疫小鼠一次,通过检测免疫后在小鼠体内诱导产生的疫苗特异性IgM、IgG、IgG1和IgG2a抗体情况来评价GPS作为流感病毒灭活疫苗佐剂的免疫增强效果,并与不添加佐剂的疫苗和加有铝佐剂的疫苗的免疫效果作比较。结果显示,GPS与铝佐剂一样能显著提高和维持疫苗特异性IgG抗体滴度,同时提高IgM抗体水平,其中800μg GPS的佐剂效果最好。因此我们认为GPS可以作为流感病毒灭活疫苗的一种候选佐剂。

新甲型H1N1流感与中国甲型H1流感HA基因进化比较研究

目的比较新甲型H1N1流感与中国甲型H1亚型流感病毒HA基因的进化。方法用非度量多维尺度法分析下载自GenBank的中国人和猪甲型H1亚型流感HA序列及WHO北半球流感疫苗推荐株HA序列和新甲型H1N1流感HA序列,构建HA基因进化图谱。结果新甲型H1N1流感病毒HA基因与猪甲型H1亚型流感病毒的亲缘关系较近,而和中国人甲型H1亚型流感病毒及WHO近年推荐的疫苗株亲缘关系很远,并且新甲型H1N1流感病毒HA序列在进化上与中国猪甲型H1亚型流感病毒仍然存在一定距离。结论从基因层面上提示我国人群既往免疫和疫苗对新甲型H1N1流感可能不能提供有效保护,病毒有可能会在人群中流行。同时分析结果提示了尚无证据表明这次始于北美的新甲型H1N1流感来自中国。

猪流感病毒基因池中的新成员:新甲型H1N1流感病毒基因片段的存在及潜在威胁

新甲型H1N1流感病毒(2009pandemic H1N1virus,pdm/09)于2009年在人群中暴发以后,迅速在全球范围内传播,引起了21世纪的第一次流感大流行。pdm/09是由人的流感病毒、禽流感和猪流感病毒(swine influenza virus,SIV)经过重配后形成的病毒,它的基因片段已经进入了猪流感病毒当中并开始产生新的变异毒株,这些新的变异流感毒株在欧亚大陆、北美大陆及中国南部的各个地区被不断报道和发现,这表明猪源性pdm/09在人间流行后可返传给猪,成为猪流感病毒基因池中的固有组成,获得与SIV重组形成新的重配病毒的能力,并可能仍然具有感染人类的潜能。因此,必须关注新型重配病毒的进化:包括其在猪群中的生长适应、以及适应性感染人的进化过程。不仅如此,还必须加强对猪群及人群流感病毒的检测,了解重配病毒在人和猪两个种群中的进化过程。

新甲型H1N1流感和季节性流感临床快速诊断的研究

目的考核北京万泰生物药业有限公司生产的甲型流感病毒抗原检测试剂（斑点ELISA）的临床应用效果。方法选用BD公司的Directigen EZ Flu A＋B流感检测试荆作为对照试剂，并以实时荧光RT—PCR结果为标准，进行比对试验。结果万泰试剂对于64份新甲型H1N1流感病毒的检测敏感度达92．2％，对季节性流感患者的检测敏感度为91．1％。特异度为99．8％。作为对照，BD试剂检测新甲型流感病毒的敏感度为78．1％，明显低于万泰试剂（P=0．016）。结论万泰斑点ELISA试剂对于新甲型H1N1流感和季节性流感的检测灵敏度都超过90％，同时具有很好的特异度，显示了其在临床使用中的巨大潜力。

新甲型H1N1流感病毒分子生物学研究进展

甲型流感是由甲型流感病毒引起，可致人或其他动物宿主发生不同程度呼吸道症状的疾病。2009年3月新甲型H1N1流感突然在墨西哥暴发，由于疫情迅速扩散，世界卫生组织（WHO）于2009～06—11将流感流行级别调整为最高级六级，即宣布新甲型H1N1流感发生全球流行。现病毒已传播至212个国家和地区，并处于继续扩散的状态，由于感染人数巨大，目前世卫组织已无法统计罹患人数，仅统计报告确诊死亡人数（至2010—02—19死亡15921人）。

儿童新甲型(H1N1)流感疫苗接种后远期疫苗活化Th1/Th2细胞因子分泌水平分析

目的检测儿童新甲型(H1N1)流感疫苗接种后其远期疫苗活化Th1/Th2细胞因子分泌水平的变化情况。方法选取本院2009年12月~2010年1月收治的自愿接受新甲型H1N1流感疫苗接种的31名健康儿童,取3 ml外周血分离淋巴细胞,分别设新甲型H1N1流感疫苗刺激组(实验组)和正常细胞组(对照组),进行细胞培养后,采用流式CBA法及ELISA法检测Th细胞因子分泌水平。结果流式CBA技术检查显示,试验组的TNF-α、IL-10水平明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。ELISA方法检测显示,两组的TNF-α、IL-4水平比较,差异无统计学意义(P>0.05);实验组的IL-10水平显著低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。对照组和实验组流式CBA方法检测的IL-10水平明显高于ELISA方法检测结果 ,差异有统计学意义(P<0.05),且两种方法检测结果的相关性具有统计学意义,分别得到回归方程Y=206.59+0.082X和Y=136.70+0.168X。结论新甲流疫苗再次刺激未能很好地活化Th1及Th2细胞,即未产生较好的Th1型细胞免疫反应和较好的体液免疫,提示新甲流疫苗特异性免疫记忆功能欠佳;流式CBA方法与传统ELISA方法检测细胞因子均具有较高的灵敏度且具有相同的结果规律。

儿童新甲型流感疫苗远期特异性CD8^+记忆T细胞的表型特征

目的:探讨儿童新甲型(H1N1)流感疫苗接种后远期外周血疫苗特异性CD8^+记忆T细胞的特征。方法:选择31例于2009年12月~2010年1月接种甲型H1N1流感疫苗的3~6岁儿童,抽取外周静脉血5 ml,分离淋巴细胞加入甲型H1N1流感疫苗进行培养,并设对照组,用流式细胞仪检测细胞表面分子的表达,同时以CCK-8法检测细胞增殖,计算细胞增殖指数。结果:外周血PBMC中CD8^+T细胞在实验组和对照组分别是13.41%与9.41%,P>0.05。CD8^+初始T细胞在两组的比例均高达80%上;CD8^+记忆T细胞在两组占17%~19%;记忆T细胞分中央型和效应型记忆T细胞,两个亚群检测结果:CCR7和CD62L单阳性记忆T细胞亚群在实验组占比明显低于对照组的占比,P<0.05。应用CCK-8法检测疫苗刺激后抗原特异性增殖,检测结果见细胞增殖指数大于0.8的仅为51.16%,大于1.0在本研究中没有。结论:31例儿童外周血PBMC中CD8^+T细胞占比少,初始T细胞CD45R+均较高,具有抗原再刺激后再应答的基础;甲型H1N1流感疫苗可以诱导抗原特异性记忆CD8^+T细胞的产生,但数量不多,其中大多数为中央型记忆CD8^+T细胞;细胞增殖指数结果表明疫苗特异性细胞增殖不佳;提示对该疫苗的远期疫苗特异性CD8^+T细胞免疫记忆不理想。

江苏省2009年3岁以上自然人群新甲型H1N1流感血清流行病学调查

目的了解江苏省2009年3岁以上自然人群新甲型H1N1流感抗体水平及流行趋势。方法利用微量半加敏血凝抑制（HI）方法检测江苏省不同时间（2008年11月和2009年7、8、11月）人群新甲型H1N1流感抗体，比较不同时间、人群及地区的新甲型H1N1流感保护性抗体阳性率和抗体几何平均滴度（GMTs）。结果在新甲型H1N1流感输入江苏地区后第一个流行季节内，2009年7、8、11月人群H1保护性抗体阳性率依次为3．46％、7．59％和16．94％，表现出随时间推移而呈总体增长趋势（P=0．000），不同时间点的性别间保护性抗体阳性率的差异无统计学意义（P〉0．05）；除2009年11月外，不同性别间的抗体GMT差异均无统计学意义。同一时间点不同年龄组间、同一年龄组的不同时间点间，HI保护性抗体阳性率、抗体GMT水平比较的差异均有统计学意义（P〈0．05）。HI保护性抗体阳性率和抗体GMT存在地区差异（P〈0．05）。结论在2009年8月后江苏地区12～17岁人群成为新甲型H1N1流感暴发的主要人群，至2009年11月该人群总体新甲型H1N1流感保护性抗体阳性率仍较低，该病在全省的流行仍将持续一段时间。

季节性流行性感冒疫苗对儿童新甲型H1N1流感保护效果的病例对照研究

目的评价季节性流行性感冒疫苗（流感疫苗）对儿童新甲型H1N1流感保护效果。方法选择2013年2-6月期间6-59月龄的实验室确诊流感病例为病例组，在儿童预防接种信息系统中随机选择健康儿童为对照组，进行1：1匹配的病例对照研究．采用条件Logistic回归计算保护效果。结果本研究共纳入1250对研究对象。2013年2～6月流感疫苗对6—59月龄儿童的保护效果为57．7％（95％CI：46．6％-66．4％），对36～59月龄儿童的保护效果优于6—35月龄儿童．完全免疫的保护效果优于部分免疫。仅研究年度免疫与两个年度均免疫的儿童的保护效果差异无统计学意义。结论流感疫苗对儿童新甲型H1N1流感具有中等的保护效果，建议儿童每年及时进行全程免疫。

2009~2013年无锡地区新甲型H1N1流感病毒基因变异分析

目的了解2009～2013年无锡地区新甲型H1N1流感病毒血凝素（HA）和神经氨酸酶（NA）的基因变异情况。方法选取2009～2013年哨点医院分离的新甲型H1N1流感病毒，进行HA和NA核苷酸序列测定，用Bioedit和MEGA version4．0分析软件进行基因种系进化特性分析。结果无锡地区2009～2013年种型H1N1流感病毒HA基因序列的同源性为98．9％～99．5％；氨基酸序列分析显示，无锡地区分离株第203位与国内、国际代表株比较发生氨基酸替换：S→T；第83位和321位与国内代表株相同，而与国际代表株不同，分别为S→P、V→I。NA基因序列与国内、国际代表株同源性为99．2％～99．8％；第87位和349位与国内代表株相同，而与国际代表株不同，分别为R→Q、D→G。结论通过对HA和NA基因序列的比对分析，2009-2013年无锡地区新甲型H1N1流感病毒流行株基因序列与国内、国际代表株高度同源。表明该地区近期不会发生新甲型H1N1流感大流行。

新甲型H1N1流感病毒及疫情分析

新甲型H1N1流感疫情正在从北美洲向全球逐步蔓延,引起了全世界的关注。本文介绍了此次新甲型H1N1流感的流行概况及特点,分析了病毒的遗传学特征,并尝试性地对新甲型H1N1流感的国际流行态势及对我国的影响进行了初步评估。初步分析认为,新甲型H1N1流感病毒极有可能引发一次全球范围的流感大流行,但其对人类健康造成的危害程度会比1918、1957和1968年3次流感要低;在中国不可避免地会出现一些散发病例甚至小规模的局部暴发流行,但近期造成大规模暴发流行的可能性较小。

2009年深圳新甲型H1N1流感病毒分离鉴定及分离株特征分析

目的比较新甲型H1N1流感病毒对MDCK细胞和鸡胚的敏感性差异,了解病毒分离株特征,为疫苗制备和开展实验室常规监测等奠定基础。方法用MDCK细胞和鸡胚进行流感病毒分离[1],收获病毒后提取病毒RNA,逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增,阳性扩增产物纯化后测序,测序结果使用Clustal和MEGA4.1软件进行比较分析,通过与NCBI数据库中不同时间和地区的流感病毒H1N1株同源比对后,绘制种系发生树。结果从334份患者呼吸道标本中,用MDCK细胞分离法分离出134株新甲型H1N1病毒,分离率为40.12%,用鸡胚分离法分离出150株新甲型H1N1病毒,分离率为44.91%;所测10株新甲型H1N1毒株HA1区的344个氨基酸,与2009年新甲型H1N1国际代表株A/California/07/2009相比,只有少数位点发生氨基酸替换,并且这些位点都不在抗原决定簇上;种系发生树显示,10株新甲型H1N1和国际代表株同源性较大,形成一簇,与A/Swine/guangxi/13/2006较为接近。结论新甲型H1N1病毒对MDCK细胞和鸡胚的敏感性相差不大;新甲型H1N1病毒未发生变异,短期内不会产生新变种。

2010年广州市越秀区居民新甲型H1N1流感病毒血清抗体调查

目的了解广州市越秀区居民各年龄段人群新甲型H1N1流感病毒抗体水平,为完善新甲型H1N1流感疫情防控措施提供科学依据。方法采取多阶段分层随机抽样方法抽取研究对象309人,进行血清标本采集和问卷调查,应用红细胞血凝抑制(HI)方法检测新甲型H1N1流感病毒抗体。结果人群新甲型H1N1流感病毒抗体阳性率为20.06%,0～岁组、6～岁组、10～岁组、16～岁组、25～岁组和60岁以上组的新甲型H1N1流感病毒抗体阳性率分别为18.84%、33.33%、46.67%、30.00%、6.67%和5.00%。6～24岁组的新甲型H1N1流感病毒抗体阳性率较高,为35.00%,无症状抗体阳性率达10.43%。抗体阳性率在性别上差异无统计学意义(P>0.05)。结论广州市越秀区居民新甲型H1N1流感病毒感染状况各年龄段不同,青少年抗体阳性率较高,老年人抗体阳性率相对较低。

2013～2014年中国湖北省新甲型H1N1流感病毒鸡胚适应性突变分析

为了解湖北省流感监测网络中新甲型H1N1流感病毒鸡胚适应性突变的情况,本研究对3株湖北省新甲型H1N1流感病毒鸡胚株和对应细胞株进行HA、NA和MP蛋白进化树和基因进化速率分析,氨基酸突变位点、鸡胚适应性突变位点和三维建模分析。鸡胚株和对应细胞株在进化树分布和基因进化速率上的差异均呈现NA>HA>MP的特点,在3株鸡胚株中发现4个鸡胚适应性突变位点:HA蛋白为Q223R和V527I,NA蛋白为M19I和H275Y,其中Q223R突变会造成抗原表位Sb和Ca2相邻间的结构变化,H275Y为典型的神经氨酸酶耐药突变位点。结果表明鸡胚适应性突变会在湖北省流感监测网络的流感病毒鸡胚分离工作中发生,这些突变可能影响疫苗候选株的筛选和疫苗有效性,因此需加强流感监测网络中鸡胚适应性突变的监测工作。

新甲型H1N1流感病毒小鼠致死模型的建立

建立新甲型H1N1流感病毒小鼠致死模型,为研究致病性、宿主适应性以及疫苗保护性提供动物模型,并寻找病毒在适应宿主过程中影响毒力和适应性的关键位点。将新甲型H1N1流感病毒A/四川/SWL1/2009 H1N1在小鼠中连续传15代,各代次毒株均在MDCK细胞上增殖后进行测序,根据序列分析结果选择6个传代毒株感染小鼠,连续监测14 d体重和死亡情况;并对第14代和15代病毒在噬斑实验纯化后克隆和测序分析。原代病毒不致死BABL/C小鼠,经动物体内连续传代适应宿主动物后,其毒力增强,具体表现为所选的6个传代毒株中第7、11、15代毒株可以100%致死试验小鼠;分析这6个传代毒株的全基因组表明这些毒株的部分氨基酸位点发生突变。新甲型H1N1流感病毒经小鼠体内连续传代后,建立了小鼠致死模型,病毒毒力增强可能与某些氨基酸位点的改变有关。

2009-2017年河北省廊坊市新甲型H1N1流感病毒基因进化分析

目的了解2009-2017年河北省廊坊市新甲型H1N1流感流行态势,分析H1N1血凝素(hemagglutinin,HA)和神经氨酰酶(neuraminidase,NA)基因变异情况及其遗传进化特征。方法选定2009-2017年河北省廊坊市分离的甲型H1N1流感毒14株,使经核酸提取和PCR扩增测序HA和NA基因,采用MEGA version 6.0进行对比分析,采用N-J法构建新甲型H1N1流感病毒HA、NA基因进化树。结果廊坊市2009-2017年新甲型H1N1流感病毒HA基因序列同源性为97.2%~100.0%,NA基因序列同源性为97.7%~100.0%,HA和NA抗原决定簇、受体结合位点、糖基化位点均未发生变异。随着时间的推移,NA和HA突变位点均呈增多趋势,表明毒株逐年发生变异。结论 2009-2017年河北省廊坊市新甲型H1N1流感病毒HA和NA基因与国内、国际代表株高度同源,但其编码蛋白氨基酸的序列逐年发生变异,并出现不同程度的变异增强现象,因此应进一步加强对流感的监测。

2017—2018年北京市东城区新甲型H1N1流感病毒HA基因特征研究

目的了解2017年4月1日—2018年3月31日期间北京市东城区新甲型H1N1流感病毒流行特征,并分析细胞株和鸡胚株血凝素(HA)基因遗传变异情况。方法收集2017年4月1日—2018年3月31日期间北京市东城区流感数据,分析新甲型H1N1流感的流行特征;用实时荧光PCR(RT-PCR)方法对选取的7株新甲型H1N1细胞分离株和其相对应的7株鸡胚株进行HA基因序列扩增并测序,用DNASTAR 5.0和MEGA 6.0软件对测序结果进行系统进化树和遗传特征分析。结果2017年4月1日—2018年3月31日期间在北京市东城区共检测样本1780份,新甲型H1N1阳性99份,阳性率是5.56%,细胞分离出新甲型H1N1为51株,鸡胚株为15株。测序成功的13株毒株与世界卫生组织(WHO)推荐的北半球疫苗株A/Michigan/45/2015(甲型/密歇根/45/2015)在系统进化树上位于同一大分支上,同源性较高。其核苷酸同源性为98.96%~100.00%,氨基酸同源性为97.92%~100.00%。其中S74R、P137S、S164T、S183P、T185N、T216K、I267T共7个氨基酸位点(包含抗原决定簇位点)发生改变,决定流感毒力的D222位点和二硫键未发生改变。结论目前北京市东城区新甲型H1N1流感病毒与疫苗株匹配性较高,但是其HA序列中氨基酸位点变异仍存在,要长期从分子水平进行监测,预防新甲型H1N1流感发生大流行。

儿童新甲型(H1N1)流感疫苗接种后远期抗体水平分析

[目的]检测儿童接种新甲型H1N1流感疫苗后远期血清抗体水平,评价其体液免疫持久性。[方法]用ELISA法对2009年12月—2010年1月新甲型H1N1流感疫苗接种儿童进行新甲型H1N1流感抗体检测。[结果]2013年12月21日采集样本,32名儿童血清新甲型H1N1流感抗体平均水平仅为69.75 ng/L,阳性保护率为15.63%,男女性别间及7~8、9~10岁年龄组间抗体阳性率差异均无统计学意义(P>0.05)。[结论]新甲型H1N1流感疫苗远期体液免疫保护较差,7~10岁儿童如需取得较好抗体保护,需再次接种。

2018-2019年度驻马店市新甲型H1N1流感病毒HA分子特征

目的了解2018-2019年度驻马店市新甲型H1N1流感病毒的流行和HA基因进化特征、抗原及受体结合位点等变异情况。方法选取2018-2019年度驻马店市分离的6株新甲型H1N1流感病毒株,提取病毒核酸后对HA基因进行测序,利用生物信息学软件MEGA 6.0分析HA基因上基因序列特征及变化情况进行分析。结果驻马店市新甲型H1N1流行株与WHO参考株的HA基因序列差异较小,与A/California/07/2009参考株核苷酸和氨基酸同源性分别为96.30%~96.80%、96.20%~96.50%,与同期疫苗株A/Brisbane/02/2018核苷酸和氨基酸同源性分别为98.80%~99.20%、98.40%~98.70%。驻马店市流行株在HA基因抗原决定簇上有6处氨基酸变异,分别在Ca区的S203T,Cb区的S74R,Sa区的S162N、K163Q、S164T,Sb区的S185T;在受体结合部位130环H138Y、220环D222N、220环Q223R发生氨基酸位点的变异。结论2018-2019年度驻马店市新甲型H1N1流行株与WHO推荐疫苗株具有高度同源性。HA基因抗原决定簇和受体结合部位等关键的氨基酸位点发生变异,应加强监测及时发现变异毒株,为流感防控提供科学的依据。

2009-2010年濮阳市新甲型H1N1流感病毒检测分析

目的在国家流感网络实验室平台框架下,通过对濮阳市2009-2010年流感感染人群流感病毒核酸的实验室检测,了解新甲型H1N1及其它流感病毒在濮阳市感染人群中病毒型别的构成,密切关注新甲型H1N1流感病毒变异情况,及时对病毒变异等重要情况进行分析,向国家流感中心提供重要检测数据,为甲型H1N1流感防控提供科学依据。方法按照《甲型H1N1流感病毒RT-PCR检测技术标准操作规程》,使用Real-time RT-PCT和RT-PCR对病例鼻咽拭子标本进行甲型H1N1和季节性H1、H3和A、B型流感病毒核酸检测。结果 2009年5月-2010年12月共检测流感样病例标本776份,流感病毒核酸阳性386份,阳性率为49.74%。386份阳性标本中新甲型H1N1流感病毒核酸阳性226份,占流感病例阳性标本的比例为58.55%。2009年9月12日检出首例新甲型H1N1流感病毒核酸阳性病例,此后甲型H1N1流感病毒核酸阳性率持续上升,2009年11月份达到高峰,为73.11%,12月份后开始下降,2010年3月份后再未检出流感病毒核酸阳性病例。对125份流感病毒核酸阳性标本进行病毒分离,总体病毒分离阳性率较低,只有18.40%。结论 2009年秋季至2010年春季是本次流感大流行的高发季节,新甲型H1N1流感病毒为这波流感大流行的优势毒株。但季节性流感病毒也同时存在。