小拟南芥高盐胁迫诱导cDNA文库的构建与测序分析

以新疆小拟南芥为材料,分离了小拟南芥经500mmol/L NaCl胁迫处理的幼苗总RNA,采用改良的SMARTcDNA合成方法合成第一链cDNA,采用LD PCR的方法合成第二链cDNA,经BP反应重组到入门载体pDONR207上,构建了小拟南芥高盐胁迫的入门cDNA文库。文库插入片段平均大小为1.1kb,阳性克隆率为94%。文库经随机挑选克隆测序,生物信息学分析初步获得了10个有功能的基因,其中包含各种酶如水解酶、氧化还原酶等;功能蛋白如离子运输通道蛋白、胁迫诱导蛋白,细胞色素蛋白及激素受体蛋白基因等。可以利用入门文库构建各种目的cDNA文库,本研究为将来从小拟南芥中筛选耐盐基因奠定了基础。