山茱萸新苷对糖尿病肾病模型小鼠的保护作用及机制

目的探讨山茱萸新苷对糖尿病肾病(DN)模型小鼠的保护作用及潜在机制。方法将雄性KK-Ay小鼠以高脂高糖饲料喂养2周复制DN小鼠模型。将造模成功的小鼠随机分为模型组、氨基胍组(阳性对照,100 mg/kg)、山茱萸新苷组(100 mg/kg),另取雄性C57BL/6J小鼠作为正常组,每组6只。各药物组小鼠灌胃相应药液,正常组和模型组小鼠灌胃等体积生理盐水,每天1次,连续8周。检测各组小鼠空腹血糖(FBG)、24 h尿蛋白,血清白细胞介素12(IL-12)、IL-10、尿素氮(BUN)、肌酐(Scr)水平,观察其肾组织病理损伤、纤维化改变和肾小球微观结构,检测其肾皮质中晚期糖基化终末产物受体(RAGE)、Ⅳ型胶原(COL-Ⅳ)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)蛋白的表达情况。结果与正常组比较,模型组小鼠肾皮质可见明显的炎症细胞浸润和纤维化改变,肾小球系膜增生严重且基底膜有大量不规则块状暗色致密物沉积;其FBG、24 h尿蛋白水平,血清IL-12、BUN、Scr水平,肾皮质RAGE、COL-Ⅳ、i NOS蛋白的表达量均显著升高,血清IL-10水平显著降低(P<0.01)。与模型组比较,各药物组小鼠肾脏病理损伤、纤维化改变及肾小球微观结构均有明显改善,上述各定量指标均普遍好转(P<0.05或P<0.01)。结论山茱萸新苷对DN模型小鼠具有一定的保护作用,可抑制炎症反应,降低尿蛋白水平,缓解肾脏纤维化;上述作用可能与抑制晚期糖基终末产物/RAGE信号通路有关。

獐牙菜苦苷、灵仙新苷组分配伍对RA模型大鼠血清学指标及踝关节COX-2的影响

目的探讨獐牙菜苦苷、灵仙新苷组分配伍对类风湿关节炎(Rheumatoid arthritis,RA)模型大鼠血清学指标及踝关节COX-2的影响。方法选取SPF级SD大鼠5~6周龄36只,雌雄各半。除空白组外,均采用II型胶原诱导法复制(Collagen induced arthritis,CIA)大鼠模型。将造模成功的30只大鼠按随机数字表法分为模型组、阳性药(正清风痛宁)组、獐牙菜苦苷组、灵仙新苷组、獐牙菜苦苷配伍灵仙新苷组(以下简称“獐-灵配伍组”),每组6只。给药组分别给予相应药液灌胃,模型组和空白组给予等量生理盐水灌胃,连续灌胃10 d。实验中对各组大鼠进行一般状态观察记录、关节炎评分(AI),苏木素-伊红(HE)染色法观察大鼠踝关节组织病理变化;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测大鼠血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、类风湿因子(RF)、C反应蛋白(CRP)、抗环瓜氨酸肽抗体(anti-CCP Ab)及前列腺素E2(PGE2)含量;免疫组织化学法(Immunohistochemistry)及蛋白免疫印迹法(Western blot)检测大鼠踝关节环氧化酶-2(COX-2)蛋白表达;实时荧光定量聚合酶链式反应法(Real-time PCR)检测大鼠踝关节COX-2基因表达。结果与空白组比较,模型组大鼠一般状态较差,大鼠左后足趾AI评分及血清中TNF-α、IL-1β、RF、CRP、anti-CCP Ab、PGE2含量显著高于其他组(P<0.05或P<0.01);踝关节组织结构严重破坏,COX-2蛋白及基因表达显著上调(P<0.01)。与模型组比较,各给药组大鼠一般状态呈不同程度好转;AI评分明显降低(P<0.01),血清中TNF-α、IL-1β、RF、CRP、anti-CCP、PGE2含量明显降低(P<0.05或P<0.01),其中獐-灵配伍组抑制TNF-α、RF、CRP、anti-CCP、PGE2作用最为突出;獐牙菜苦苷在抑制IL-1β作用最突出。踝关节组织病理状态均有不同程度改善;IHC及WB检测结果显示獐-灵配伍组降低踝关节COX-2蛋白表达水平最为显著(P<0.01);PCR检测结果显示獐牙菜苦苷组降低踝关节COX-2基因表达最为显著(P<0.01)。结论獐牙菜苦苷、灵仙新苷及其配伍对RA模型大鼠能起到良好的治疗作用,其中獐-灵配伍组的治疗效果明显优于各单体给药组;獐牙菜苦苷与灵仙新苷具有明显的协同增效作用,其作用机制可能是通过降低炎性细胞因子的分泌,抑制COX-2蛋白活性而发挥作用。

灵仙新苷对脑缺血再灌注损伤大鼠脑组织氧化应激和炎症反应的调控及神经细胞凋亡的影响

目的研究灵仙新苷对脑缺血再灌注损伤大鼠脑组织氧化应激反应、神经细胞凋亡以及炎症因子的作用。方法45只大鼠分成对照组、模型组(脑缺血再灌注损伤大鼠)、灵仙新苷低剂量组(8 mg/kg)、灵仙新苷中剂量组(16 mg/kg)、灵仙新苷高剂量组(32 mg/kg),每组9只。治疗5 d后,对大鼠进行神经功能评分,TTC染色法检测脑梗死体积,TUNEL法检测细胞凋亡,Western blot检测脑组织中切割型胱天蛋白酶-3(cleaved-cysteine aspartic acid specific protease-3,C-Caspase-3)、切割型胱天蛋白酶-9(cleaved-cysteine aspartic acid specific protease-9,C-Caspase-9)、核因子κB p65(nuclear factor-κB p65,NF-κB p65)蛋白水平,二硝基苯肼法检测乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)水平,硫代巴比妥酸法检测丙二醛(malondialdehyde,MDA)水平,黄嘌呤氧化法检测超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)水平,比色法检测谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)水平,ELISA法检测白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)含量。结果与对照组比较,模型组大鼠神经功能评分升高(P<0.05),脑梗死体积增加(P<0.05),细胞凋亡指数和C-Caspase-3、C-Caspase-9蛋白水平升高(P<0.05),LDH、MDA水平升高(P<0.05),SOD、GSH-Px水平降低(P<0.05),IL-1β、TNF-α含量升高(P<0.05),NF-κB p65蛋白表达水平升高(P<0.05)。与模型组比较,灵仙新苷低、中、高剂量组大鼠神经功能评分依次降低(P<0.05),脑梗死体积依次减少(P<0.05),细胞凋亡指数和C-Caspase-3、C-Caspase-9蛋白水平依次降低(P<0.05),LDH、MDA水平依次降低(P<0.05),SOD、GSH-Px水平依次升高(P<0.05),IL-1β、TNF-α含量依次降低(P<0.05),NF-κB p65蛋白表达水平依次降低(P<0.05)。结论灵仙新苷能降低脑缺血再灌注损伤大鼠脑组织氧化应激反应水平,减少细胞凋亡因子C-Caspase-3、C-Caspase-9的表达,抑制炎症介质释放,其机制可能与下调NF-κB信号通路有关。

蒲黄总黄酮提取物中香蒲新苷及异鼠李素-3-O-新橙皮糖苷的HPLC测定

建立了HPLC法测定蒲黄总黄酮提取物中香蒲新苷(1)及异鼠李素-3-O-新橙皮糖苷(2)的含量。采用Eclipse XDBC18柱,乙腈-0.5%乙酸-甲醇梯度洗脱,检测波长248nm。1和2分别在10～400mg/ml和12.6～504mg/ml范围内呈良好线性关系(r=0.9999),平均回收率分别为98.9%和102.3%,RSD分别为1.66%和2.05%。

高效液相色谱法测定复方蒲黄片中香蒲新苷与异鼠李素-3-O-新橙皮糖苷含量

目的建立测定复方蒲黄片中香蒲新苷和异鼠李素-3-O-新橙皮糖苷含量的高效液相色谱法。方法采用Luna-C18柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以乙腈-0.4%磷酸为流动相进行梯度洗脱,流速0.8 mL.min-1,柱温30℃,检测波长254 nm。结果香蒲新苷和异鼠李素-3-O-新橙皮糖苷分别在0.029～0.570 mg.mL-1和0.050～1.010 mg.mL-1浓度范围内有良好线性关系,平均加样回收率分别为98.0%和97.5%,RSD均<2.0%。结论该方法简便,快速,准确,重复性好,可用于该制剂的质量控制。

香蒲新苷和异鼠李素-3-O-新橙皮糖苷热稳定性初步研究

目的：研究加热温度和时间对香蒲新苷和异鼠李素-3-O-新橙皮糖苷稳定性的影响。方法：将香蒲新苷和异鼠李素-3-O-新橙皮糖苷分别在不同温度下加热不同时间，对各样品进行HPLC分析。结果：香蒲新苷和异鼠李素-3-O-新橙皮糖苷在加热过程中，生成一系列分解产物，其中异鼠李素为二者所共有。140oC加热3h或160℃加热1h，香蒲新苷和异鼠李素-3-O-新橙皮糖苷无明显变化；180℃加热10min，可检出分解产物，加热3h后仍能检测到香蒲新苷、异鼠李素-3-O-新橙皮糖苷及其分解产物；200℃或220℃加热1h，香蒲新苷、异鼠李素-3-O-新橙皮糖苷及其分解产物均不能被检测。结论：在烘制蒲黄炭时，烘制温度宜控制在160～180℃（170℃），而加热时间也应相应控制在3～1h（2h）。

HPLC法同时测定红藤颗粒中苦杏仁苷、香蒲新苷及异鼠李素-3-O-新橙皮苷

目的建立同时测定红藤颗粒(红藤、蒲黄、桃仁等)中苦杏仁苷、香蒲新苷、异鼠李素-3-O-新橙皮苷的HPLC方法。方法采用ACE C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以乙腈-0.1%磷酸为流动相,梯度洗脱,检测波长为210 nm,柱温20℃。结果 3种成分均达到基线分离,且线性良好,日内、日间精密度RSD<1.0%。苦杏仁苷、香蒲新苷和异鼠李素-3-O-新橙皮苷线性范围分别为0.23～11.55μg、0.075～3.744μg和0.064～3.214μg。平均回收率(n=6)分别为99.4%、99.1%和99.9%。结论该法简便、准确,具有较好的重复性和稳定性,可用于同时测定红藤颗粒中的苦杏仁苷、香蒲新苷和异鼠李素-3-O-新橙皮苷。

灵仙新苷在Beagle犬体内的药动学及其绝对生物利用度研究

目的:研究灵仙新苷在Beagle犬体内的药动学和绝对生物利用度。方法:采用四周期交叉设计,即Beagle犬8只,雌雄各半,随机等分为4组,分别采取单剂量静脉注射(0.75mg/kg)及灌胃(7.5、15和30mg/kg)两种给药方式,交叉给药,间隔1周。并于给药后不同时间点取血,采用LC-MS/MS测定血浆中灵仙新苷的浓度,利用DAS 2.0软件估算灵仙新苷在Beagle犬体内的药动学参数,并计算绝对生物利用度。结果:Beagle犬i.g.7.5、15和30mg/kg灵仙新苷后,估算的t1/2分别为(14.3±2.7)、(13.3±1.3)和(13.7±2.4)h,AUC0-36分别为(1.9±1.2)、(4.5±1.9)和(8.0±3.3)μg.h.mL-1,Cmax分别为(0.14±0.08)、(0.27±0.10)和(0.52±0.28)μg/mL。i.v.0.75mg/kg灵仙新苷后,估算的t1/2为(13.3±3.0)h,AUC0-36为(66.2±12.8)μg.h.mL-1。灌胃灵仙新苷在Beagle犬体内的绝对生物利用度分别为0.32%、0.35%和0.30%。结论:口服灵仙新苷后在Beagle犬体内绝对生物利用度很低,其药动学过程在研究剂量范围内是线性的。

番红花化学成分研究——Ⅲ.番红花花粉中的番红花新苷甲和乙的结构

从番红花(crocus sativus L.)花粉中分到两个新苷,命名为番红花新苷甲(1)和乙(2).经理化性质和对它们的 IR、UV、~1HNMR、^(13)C NMR 和 MS 数据的分析,鉴定1为异鼠李素-4′-O-α-L-鼠李吡喃糖(1→2)β-D-葡萄吡喃糖苷,2为β-对羟基苯基-乙醇-α-O-α-L-鼠李吡喃糖(1→2)-β-D 葡萄吡喃糖苷.

黑鳗藤新苷K的急性毒性及体内抑制细胞和体液免疫的实验研究

目的:研究黑鳗藤新苷K的急性毒性及体内对细胞免疫和体液免疫的抑制作用。方法:采用2,4-二硝基氟苯(DNFB)所致的小鼠迟发型超敏反应(DTH)模型和绵羊红细胞(SRBC)所致小鼠血清凝集素生成模型,观察黑鳗藤新苷K对小鼠体内细胞免疫和体液免疫的抑制作用。结果:黑鳗藤新苷K3.2g/kg剂量内对小鼠无明显毒副作用;10mg/kg以上剂量即可显著降低DNFB诱导的DTH反应小鼠的耳廓肿胀度(P<0.05);20mg/kg以上剂量即可显著减少SRBC所致小鼠血清凝集素抗体的生成(P<0.05)。结论:黑鳗藤新苷K小鼠体内能显著抑制细胞免疫反应和体液免疫反应,无明显毒性。

黑鳗藤新苷K对大鼠佐剂性关节炎和同种异体皮肤移植排斥反应的治疗作用

目的:研究黑鳗藤新苷K对大鼠佐剂性关节炎和同种异体皮肤移植排斥反应的治疗作用。方法:采用完全弗氏佐剂(CFA)诱导大鼠佐剂性关节炎(AA)模型观察黑鳗藤新苷K对AA大鼠原发性炎症和继发性病变的治疗作用;采用大鼠同种异体皮肤移植排斥反应模型观察黑鳗藤新苷K对同种异体移植皮片存活时间的延长作用。结果:黑鳗藤新苷K对AA大鼠致炎足肿胀度、侧足肿胀度、尾部结节数及前足红肿程度均有显著的抑制作用(P<0.05,P<0.01或P<0.001),其作用强度与雷公藤多苷相当;黑鳗藤新苷K能明显延长大鼠同种异体移植皮片的存活天数(P<0.05),减少皮肤移植排斥反应。结论:黑鳗藤新苷K能有效防治大鼠佐剂性关节炎的原发性炎症和继发性病变;对大鼠同种异体皮肤移植排斥反应也有一定的治疗作用。

山茱萸新苷对EAE中枢神经系统MCP-1表达及CD68阳性细胞浸润的影响

[目的]研究山茱萸新苷对实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)大鼠中枢神经系统单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemoattractant protein-1,MCP-1)表达及CD68阳性细胞浸润的影响。[方法]制备豚鼠全脊髓匀浆免疫抗原,皮下注射至Lewis大鼠,建立EAE模型。设正常对照组、EAE组、山茱萸新苷组、波尼松组,每天神经功能评分,待症状达到高峰处死实验动物,用RT-PCR、Western Blot法比较各组实验动物中枢神经系统MCP-1 m RNA及蛋白的表达,免疫组织化学染色法比较各组实验动物中枢神经系统CD68阳性细胞浸润情况。[结果]正常对照组、EAE组、山茱萸新苷组、波尼松组大鼠MCP-1 m RNA的相对表达量分别为(11.265±2.928)、(401.373±55.398)、(124.987±20.244)、(75.465±7.766),MCP-1蛋白相对表达量分别为(7.458±2.570)、(24.155±1.420)、(19.568±0.863)、(17.458±1.630),CD68阳性指数分别为0%、(41.93±12.25)%、(16.08±8.70)%、(5.38±2.88)%。使用单因素方差分析法,MCP-1 m RNA的相对表达量、MCP-1蛋白相对表达量、CD68阳性指数组间差异显著,均有统计学意义(F=199.734、66.081、35.565,均P=0.000)。山茱萸新苷组与EAE组在神经功能评分、MCP-1 m RNA的相对表达量、MCP-1蛋白相对表达量、CD68阳性指数表达差异均有统计学意义(P=0.002、0.000、0.003、0.013)。[结论]山茱萸新苷可改善EAE大鼠神经功能,抑制EAE大鼠中枢神经系统MCP-1表达及CD68阳性细胞浸润。

灵仙新苷微乳的制备及其初步药效学研究

目的制备均一稳定的灵仙新苷(clematichinenoside,AR)油包水微乳,并初步考察其对佐剂性关节炎原发病变小鼠的治疗作用,为威灵仙中药单体药物制剂的开发提供药效学基础。方法选用卵磷脂和乙醇分别作为表面活性剂和助表面活性剂,油酸聚乙二醇甘油酯(Labrafil M 1944Cs)作为油相,AR水溶液为水相,绘制伪三元相图以确定各成分质量比。通过在小鼠右后足跖皮内注射弗氏完全佐剂(CFA)制备佐剂性关节炎(adjuvant arthritis,AA)模型。以体质量、肿胀率、胸腺与脾脏指数为主要检测指标,并观察小鼠病变部位的组织形态来比较AR微乳与AR溶液及阳性对照药白芍总苷的差异。结果确定Km=1∶1,处方组成为油相50%,混合表面活性剂35%,水相15%,得到AR微乳为澄清的淡黄色溶液,平均粒径为10.7 nm。AR微乳对佐剂性关节炎原发病变小鼠疗效略好于AR溶液,且AR微乳能更好地改善佐剂性关节炎原发病变小鼠的病理形态及病变部位的组织形态。结论 AR皂苷微乳粒径较小,脂溶性强,能够增加药物在体内的生物利用度。这表明微乳作为新的药物剂型具有广泛的应用前景。另一方面由于制剂促进药物吸收的机制并不是单一的,仍需进一步研究。

不同采收期东北铁线莲药材中灵仙新苷的含量变化研究

目的:考察不同采收期东北铁线莲药材中灵仙新苷(Clematichinenoside AR)含量,研究其动态含量变化和最佳采收期。方法:采用色谱柱Diamonsil C18(250 mm×4.6 mm,5μm)柱,流动相:乙腈-水溶液梯度洗脱程序,流速1.0 mL/min,检测波长203 nm,柱温:30℃。结果:灵仙新苷以8月下旬到9月中旬的含量最高。结论:东北铁线莲药材的最佳采收期为8月下旬到9月中旬。

黑鳗藤新苷A的溶血性及其对卵清白蛋白免疫小鼠的免疫佐剂作用(英文)

目的:评价从黑鳗藤根中分离得到的C21甾体苷--黑鳗藤新苷A(stemucronatoside A,SA)的溶血性及免疫佐剂作用。方法:以分光光度法测定黑鳗藤新苷A对血红细胞的溶血百分率;以卵清白蛋白(OVA)100μg,OVA 100μg加氢氧化铝200μg,OVA 100μg加黑鳗藤新苷A 25μg、50μg和100μg于第1 d和15 d分别免疫ICR小鼠,二免后14天,用MTT法检测刀豆蛋白A(Con A),脂多糖(LPS)和OVA诱导脾淋巴细胞增殖反应,ELISA检测血清中的抗OVA抗体效价。结果:黑鳗藤新苷A显示轻微的溶血作用,其引起兔红细胞50%溶血的浓度(HD50)为331.39±26.16μg/ml。黑鳗藤新苷A在剂量为50和100μg时能显著增强Con A,LPS和OVA诱导的OVA受免小鼠脾淋巴细胞增殖反应(P<0.05 orP<0.01 orP<0.001);50μg时能极显著提高OVA受免小鼠血清中OVA特异性抗体IgG,IgG1和IgG2b的水平(P<0.01 orP<0.001)。结论:黑鳗藤新苷A具有较低的溶血性和显著的免疫佐剂活性。

山茱萸新苷经GFRα1/Ret信号通路对慢性脑低灌注大鼠认知功能障碍的改善作用

目的:探讨山茱萸新苷经胶质细胞源性神经营养因子受体α1(GFRα1)/受体酪氨酸激酶(Ret)信号通路对慢性脑低灌注大鼠认知功能障碍的改善作用。方法:50只SD大鼠采用随机数字表法分为5组:假手术组、模型组、阳性对照组(石杉碱甲,250μg·kg-1)、山茱萸新苷低、高剂量组(67.5,270 mg·kg-1),每组10只。除假手术组外,其余各组采用双侧颈总动脉闭塞(BCCAO)法制作慢性脑低灌注大鼠模型。造模成功后,山茱萸新苷低、高剂量组和阳性对照组分别灌胃给予相应药物,假手术组和模型组给予等量生理盐水,1次/d,持续给予21 d。给药结束后,进行Morris水迷宫实验;HE染色观察大鼠海马组织病理学改变;检测海马组织中胶质细胞源神经营养因子(GDNF)、GFRα1、Ret、磷酸化-Akt(p-Akt)、B细胞淋巴瘤白血病-2(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)水平。结果:模型组大鼠海马区细胞结构疏松,海马萎缩、神经元变性坏死;与模型组相比,山茱萸新苷各剂量组和阳性对照组大鼠海马区细胞结构和神经元形态得以修复,神经元变性坏死现象得到改善。与假手术组比较,模型组大鼠目标象限游泳时间、平均游泳速度、GDNF、GFRα1、Ret、p-Akt和Bcl-2水平降低,Bax水平增加(P<0.05);与模型组比较,山茱萸新苷各剂量组和阳性对照组大鼠目标象限游泳时间、平均游泳速度、GDNF、GFRα1、Ret、p-Akt和Bcl-2水平增加,Bax水平降低(P<0.05),且山茱萸新苷高、低剂量组及阳性对照组间差异有统计学意义(P<0.05)。结论:山茱萸新苷对慢性脑低灌注大鼠认知功能障碍有改善作用,其机制可能与GFRα1/Ret信号通路的激活有关。

HPLC法测定蒲灵合剂中香蒲新苷的含量

目的建立蒲灵合剂中香蒲新苷的含量测定方法。方法采用HPLC法测定香蒲新苷的含量,色谱柱为Agilent Zorbax Eclipse XDB-C_(18)(4.6 mm×150 mm,5μm),流动相为乙腈-0.5%磷酸溶液(15:85),流速为1.0 ml·min^(-1),检测波长为254 nm,柱温为30℃。结果香蒲新苷进样量在0.107~2.134μg范围内与峰面积呈良好的线性关系(r=0.9999)。平均加样回收率为100.01%,RSD为2.77%(n=6)。结论本方法简便、准确、快速,可用于蒲灵合剂中香蒲新苷的含量测定。

RP-HPLC法测定黑鳗藤药材中黑鳗藤新苷K的含量

目的：建立黑鳗藤药材中黑鳗藤新苷K的含量测定方法。方法：应用反相高效液相色谱法测定黑鳗藤中黑鳗藤新苷K的含量,色谱柱使用D iamonsil C-18（250mm×4.6mm,5μm）;流动相为乙腈：水（48∶52）;检测波长为355nm;流速1mL/m in。结果：黑鳗藤新苷K在进样量2.024~14.168 mg范围内线性关系良好,回归方程为：Y=144701X-9335.5,r=0.9998;平均回收率为98.69%,RSD为1.48%（n=9）。结论：该方法简便,灵敏,准确,重现性好,可用于黑鳗藤药材的含量测定和质量控制。

山茱萸新苷Ⅰ对成骨细胞的增殖及成骨分化的影响

目的基于Wnt信号通路及内质网应激研究山茱萸新苷Ⅰ对大鼠原代成骨细胞的增殖及成骨分化的影响。方法提取原代成骨细胞,CKK8实验检测在药物浓度下山茱萸新苷Ⅰ对成骨细胞增殖的影响;碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)染色检测不同浓度山茱萸新苷Ⅰ干预下成骨细胞ALP的活性情况;Real-time PCR检测Wnt2、β-catenin、BMP2、OPG、NOX4、PERK基因mRNA的表达;Western blot检测Wnt2、β-catenin、PDI、CHOP和BIP蛋白表达量。结果CKK8实验及ALP染色表明山茱萸新苷Ⅰ对成骨细胞增殖及分化有一定影响,不同浓度山茱萸新苷Ⅰ干预下成骨细胞出现不同程度的增殖;与空白对照组相比,山茱萸新苷Ⅰ组的Wnt2、BMP2、β-catenin、OPG、NOX4的mRNA表达水平显著升高(P<0.01),而PERK明显降低(P<0.01)。与空白对照组相比,山茱萸新苷Ⅰ组的成骨细胞Wnt2、β-catenin、PDI蛋白表达量显著升高(P<0.01),CHOP表达亦有轻微上升,但不明显(P>0.05),而BIP的蛋白表达水平明显降低(P<0.01)。结论山茱萸新苷Ⅰ浓度为1 mmol/mL时在促进成骨细胞的增殖分化的作用上表现最佳,其能显著升高成骨细胞Wnt2、BMP2、β-catenin、OPG和NOX4的mRNA表达水平,而降低PERK的mRNA表达水平,升高Wnt2、β-catenin、PDI的蛋白表达量,降低BIP的表达量,在山茱萸新苷Ⅰ的干预下,Wnt信号通路及内质网应激途径对成骨活动的发生发展起着重要作用。

灵仙新苷对膝骨关节炎软骨细胞凋亡和自噬的影响

目的观察灵仙新苷(C-AR)对体外培养的膝骨关节炎(KOA)软骨细胞凋亡及自噬的影响,探讨其改善KOA的作用机制。方法从接受全膝关节置换术的KOA患者软骨组织提取软骨细胞,通过甲苯胺蓝及Ⅱ型胶原免疫荧光染色鉴定软骨细胞。将细胞分为对照组、模型组和C-AR组,对照组不予干预,模型组和C-AR组采用白细胞介素(IL)-1β诱导24 h构建KOA模型,C-AR组造模前用30μmol/L C-AR预处理1 h。CCK8法检测细胞活力,ELISA检测细胞IL-6和IL-8含量,流式细胞仪检测活性氧(ROS)含量和细胞凋亡率,Western blot检测Bax、Caspase-3、Bcl-2、Beclin1、LC33B蛋白表达,qRT-PCR检测Bax、Caspase-3、Bcl-2 mRNA表达,免疫荧光检测LCB表达。结果与对照组比较,模型组软骨细胞活力显著降低(P<0.01),IL-6和IL-8含显著增加(P<0.01),ROS含量和细胞凋亡率显著升高(P<0.01),Bax、Caspase-3 mRNA和蛋白表达显著升高(P<0.01),Bcl-2 mRNA和蛋白表达显著降低(P<0.01),Beclin1、LC3B蛋白表达及LC3BⅡ/LC3BⅠ比值显著降低(P<0.01);与模型组比较,C-AR组软骨细胞活力显著升高(P<0.05),IL-6和IL-8含量显著减少(P<0.05),ROS含量和细胞凋亡率显著降低(P<0.01),Bax、Caspase-3 mRNA和蛋白表达显著降低(P<0.01),Bcl-2 mRNA和蛋白表达显著升高(P<0.01),Beclin1、LC3B蛋白表达及LC3BⅡ/LC3BⅠ比值显著升高(P<0.01)。结论C-AR可减轻体外培养的KOA软骨细胞炎症反应,降低细胞凋亡率,其机制可能与激活自噬有关。