铁皮石斛共性黄酮类成分新西兰牡荆苷Ⅱ的体外抗氧化与诱导HepG2细胞凋亡的作用

目的:对不同道地种源铁皮石斛的共性黄酮类成分新西兰牡荆苷Ⅱ(芹菜素-6,8-二-C-葡萄糖苷,vicenin Ⅱ)进行体外抗氧化及诱导肝癌HepG2细胞凋亡的活性研究。方法:采用2,2-联苯基^(-1)-苦基肼法(DPPH),2-联氨-双-3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸法(ABTS)和铜离子还原法对vicenin Ⅱ(0.005~1g·L^-1)进行体外的抗氧化活性研究;采用噻唑蓝(MTT)比色法检测viceninⅡ(12.5~100μmol·L^-1)对人6种不同的肿瘤细胞体外的增殖抑制作用;后续凋亡实验viceninⅡ浓度为75μmol·L^-1,采用Hoechst33258染色,荧光显微镜进行HepG2细胞形态学观察;应用流式细胞术,磷脂结合蛋白V/碘化丙啶(Annexin V-FITC/PI)检测HepG2细胞凋亡率;采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(Real-time PCR)检测丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路及相关凋亡基因的mRNA表达。结果:Vicenin Ⅱ质量浓度为1g·L^-1时,对DPPH的清除率和Cu2+还原率为48.82%和22.01%(P<0.01);当viceninⅡ质量浓度为0.5g·L^-1时,对ABTS清除率为86.88%(P<0.01);viceninⅡ显著抑制HepG2细胞增殖并诱导凋亡,75μmol·L^-1的vicenin Ⅱ作用48h后,细胞存活率为45.69%(P<0.01),细胞凋亡率为14.57%(P<0.01),升高B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)相关X蛋白(Bax)/Bcl-2,半胱氨酸蛋白酶(Caspase)-8,p38,细胞外信号调节激(ERK),c-Jun氨基末端酶(JNK),核转录因子-κB(NF-κB)mRNA表达(P<0.01)。结论:铁皮石斛不同道地种源的共性黄酮类成分新西兰牡荆苷Ⅱ在体外具有一定的抗氧化作用,能有效抑制HepG2细胞增殖,并可能通过调控MAPK通路及Bax/Bcl-2途径诱导HepG2细胞凋亡。

反相高效液相色谱法同时测定净石灵胶囊中5种成分的含量

目的建立同时测定净石灵胶囊中新西兰牡荆苷Ⅱ、异夏佛塔苷、淫羊藿苷、淫羊藿苷次苷Ⅱ和迷迭香酸含量的反相高效液相色谱法。方法采用Agilent C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱;流动相系统为甲醇(A)-0.2%甲酸水溶液(B),梯度洗脱;流速为1.0 m L·min^(-1);柱温25℃;检测波长为切变波长(0~40 min,270 nm;40~50 min,329 nm)。结果净石灵胶囊中新西兰牡荆苷Ⅱ、异夏佛塔苷、淫羊藿苷和淫羊藿苷次苷Ⅱ的进样量分别在0.099~1.238、0.132~1.650、0.081~1.012、0.038~0.475、0.062~0.775μg内与色谱峰面积呈良好的线性关系,加样回收率(n=6)分别为98.6%、99.1%、97.1%、101.0%、98.6%,RSD分别为1.2%、0.97%、1.4%、1.6%、1.9%。结论该方法符合方法学验证要求,简便、快捷,可用于净石灵胶囊的质量控制。

丹霞种、云南广南种铁皮石斛中主要黄酮苷的分离鉴定

目的:对2个道地种源(丹霞种、云南广南种)铁皮石斛中的黄酮苷成分进行提取分离、纯化及结构鉴定,为确认铁皮石斛的共性黄酮苷成分提供实验依据。方法:(1)采用70%乙醇提取两个产地铁皮石斛叶的总黄酮成分,依次采用有机溶剂石油醚、乙酸乙酯、水饱和正丁醇萃取粗提物,运用大孔吸附树脂AB-8,LH-20型羟丙基葡聚糖凝胶(Sephadex LH-20)以及ODS柱色谱对水饱和正丁醇萃取部位进行分离纯化,通过化合物的理化性质结合HPLC,ESI-MSn,1H-NMR,13C-NMR等现代波谱学方法鉴定黄酮苷结构。(2)利用HPLC分析比较不同道地种源(丹霞种、云南广南种、广西铁皮兰种、浙江本地种)铁皮石斛的黄酮苷共有成分。结果:从2个产地铁皮石斛叶中共分离得到了5个黄酮苷化合物,经鉴定为芦丁,新西兰牡荆苷Ⅱ,新西兰牡荆苷Ⅰ,佛莱心苷,异佛莱心苷。4个不同道地种源(丹霞种、云南广南种、广西铁皮兰种、浙江本地种)铁皮石斛茎中均能检出新西兰牡荆苷Ⅱ,新西兰牡荆苷Ⅰ特征峰,其中新西兰牡荆苷Ⅱ丰度相对较大,而佛莱心苷、异佛莱心苷在云南广南种、广西铁皮兰种中出峰明显,芦丁则在丹霞种中尤为突出。结论:新西兰牡荆苷Ⅱ为铁皮石斛不同道地种源(丹霞种、云南广南种、广西铁皮兰种、浙江本地种)的共性黄酮苷成分,可作为铁皮石斛特征图谱的参照物。

狭基线纹香茶菜水溶性成分及其抗肿瘤活性研究

目的 研究狭基线纹香茶菜Isodon lophanthoides var.gerardianus的水溶性成分及其抗肿瘤活性.方法 采用大孔吸附树脂D-101、ODS、Sephdex LH-20等色谱技术和重结晶进行分离纯化,通过ESI-MS、1H-NMR、13C-NMR等现代波谱技术进行结构鉴定；以HepG2为供试细胞株,采用MTT法对化合物进行体外抗肿瘤活性研究.结果 从狭基线纹香茶菜水提液中分离得到12个水溶性化合物,分别鉴定为新西兰牡荆苷Ⅱ （1）、新西兰牡荆苷Ⅲ （2）、异夏佛塔苷（3）、夏佛塔苷（4）、牡荆苷（5）、芹菜素-6,8-二-Gα-L-吡喃阿拉伯糖苷（6）、芹菜素-7-O-葡萄糖醛酸苷（7）、芹菜素-6-C-β-L-吡喃阿拉伯糖-8-C-α-L-吡喃阿拉伯糖苷（8）、芹菜素-6-C-β-D-木糖-8-C-α-L-阿拉伯糖苷（9）、咖啡酸（10）、迷迭香酸（11）、芦丁（12）.结论 化合物1～9为首次从香茶菜属植物中分离得到；其中化合物1、6、11对HepG2细胞有较好的抑制作用.