Ad-GFP转染兔离体基底动脉环的研究

目的通过将将携带有绿色荧光蛋白基因的重组腺病毒(Ad-GFP)转染兔离体基底动脉环,观察GFP表达部位及表达量的变化。方法获取兔基底动脉环,置入含DMEM的96孔板中;加入1.8×106pfu/μl的Ad-GFP转染1 h;转染后即刻3、5、7 d行冰冻切片,荧光显微镜观察亮绿色物质。另外,将不同病毒浓度(分别为1.2×105、1.2×106、1.8×106和2.4×106pfu/μl)转染离体血管环1 h后,培养3 d后行冰冻切片,用荧光显微镜观察结果。结果荧光显微镜下观察发现,基底动脉环管壁各层均表达GFP,但主要位于血管内皮层,1 000倍下在内皮细胞内中明确观察到荧光颗粒。1.8×106pfu/μl的Ad-GFP转染后发现,GFP在转染3d后表达最明显,5 d次之,而7 d后表达最弱;不同浓度Ad-GFP转染3 d后发现,浓度为1.2×105pfu/μl时,管壁有较弱绿色荧光,浓度不断升高亮度有所增强,浓度为1.8×106pfu/μl时达到最高峰,浓度继续增加时荧光亮度未见进一步增强。结论 Ad-GFP可以成功转染入离体血管环中,以内皮层为主;3 d为病毒转染后最佳培养时间。