新风胶囊抑制软骨细胞炎症和细胞外基质降解:基于调控miR-502-5p/TRAF2/NF-κB轴

目的探讨新风胶囊(XFC)对白介素(IL)-1β诱导的软骨细胞功能的影响及作用机制。方法构建IL-1β诱导的软骨细胞炎症模型;SD大鼠灌胃制备XFC含药血清。细胞增殖实验(CCK-8)和流式细胞术筛选最佳XFC含药血清浓度;双荧光素酶报告分析miR-502-5p和TRAF2的靶向关系。构建miR-502-5p抑制表达质粒(inhibitor)及阴性对照组,转染至软骨细胞中。分为对照组(NC),IL-1β组,XFC组,IL-1β+NC-inhibitor,IL-1β+miR-502-5pinhibitor,IL-1β+miR-502-5pinhibitor+XFC最佳含药血清组,酶联免疫吸附试验(ELASA)检测IL-1β、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、IL-4、IL-10的水平。逆转录PCR(RT-PCR)、蛋白质免疫印迹实验(WB)、免疫荧光法检测Ⅱ型胶原α1(COL2A1)、基质金属蛋白酶13(MMP13)、软骨蛋白聚糖抗体(ADAMTS5)和miR-502-5p/TRAF2/NF-κB基因的表达。结果与NC组相比,IL-1β组中软骨细胞活力下降,细胞凋亡率升高,且miR-502-5p、IL-4、IL-10和COL2A1表达下降,IL-1β、TNF-α和ADAMTS5、MMP13、TRAF2、NF-κB p65表达升高(P<0.05)。筛选得出20%XFC为最佳含药血清浓度。与IL-1β组相比,XFC含药血清干预后,软骨细胞活力升高,细胞凋亡率下降,IL-1β、TNF-α、ADAMTS5、MMP13、TRAF2、NF-κBp65表达下降,miR-502-5p、IL-4、IL-10和COL2A1表达升高(P<0.05)。与NC-inhibitor相比,转染miR-502-5p inhibitor后,IL-1β、TNF-α、ADAMTS5、MMP13、TRAF2、NF-κB p65表达升高,miR-502-5p、IL-4、IL-10和COL2A1表达下降;与miR-502-5pinhibitor相比,将miR-502-5pinhibitor转染的软骨细胞和最佳XFC含药血清共培养后,XFC含药血清能逆转miR-502-5p抑制状态对软骨细胞炎症和ECM的影响。结论XFC抑制软骨细胞炎症、细胞外基质降解,减轻IL-1β诱导的软骨细胞损伤,其机制可能是通过调节miR-502-5p/TRAF2/NF-κB轴。

新风胶囊改善湿热证类风湿关节炎患者免疫炎症水平的疗效分析

目的观察新风胶囊(XFC)对湿热证类风湿关节炎(RA)患者免疫炎症相关指标的临床疗效及对外周血中性粒细胞胞外网状陷阱(NETs)形成过程(NETosis)的影响。方法选择2019年1月至2023年12月就诊于安徽中医药大学第一附属医院风湿科的60例确诊RA患者,根据基线特征组间可比的原则,按照随机数字表法分为观察组(给予XFC治疗)和对照组(给予氨甲蝶呤治疗),疗程12周。评估两组治疗后临床缓解情况和免疫炎症指标变化。同时提取两组RA患者外周血中性粒细胞进行培养,采用透射电镜观察外周血中性粒细胞发生NETosis的水平;采用酶联免疫吸附试验法检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-17(IL-17)和中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)、髓过氧化物酶(MPO)水平,并分析其变化与免疫炎症指标之间关系。结果两组患者治疗后肿胀关节数、疼痛关节数、红细胞沉降率(ESR)、C反应蛋白(CRP)、视觉模拟评分法(VAS)评分、疾病活动度评分均明显降低;观察组患者关节疼痛的VAS评分及ESR水平低于对照组,组间差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后,两组患者的RF、CCP、TNF-α、IL-17均显著降低(P<0.05),同时NE、MPO水平也显著下降(P<0.05)。两组间比较显示,观察组在降低NE方面优于对照组,组间差异有统计学意义(P<0.05),余指标两组间差异无统计学意义(P>0.05)。经过药物治疗后,观察组患者的NETosis水平明显抑制,且作用略优于对照组,但两组间差异无统计学意义(P>0.05)。NETs水平与CCP、CRP、IL-17等免疫炎症指标呈正相关;NE与RF、CCP、ESR、hs-CRP、IL-17、TNF-α等呈正相关。结论RA湿热证患者外周血存在高水平NETosis,并与免疫炎症指标密切相关。XFC能够显著改善患者病情,且能有效抑制免疫炎症指标和NETosis的水平,改善免疫炎症状态,为中医药治疗RA的研究开拓思路。

新风胶囊含药血清通过调控环状RNA Cbl原癌基因B(circ-CBLB)影响类风湿关节炎滑膜成纤维细胞增殖和凋亡

目的探讨新风胶囊(XFC)含药血清通过调控环状RNA Cbl原癌基因B(circ-CBLB)对类风湿关节炎成纤维细胞样滑膜细胞(RA-FLS)增殖、凋亡的影响。方法XFC灌胃大鼠,制备含药血清。人RA-FLS来源于RA患者滑膜组织,用100μL的10 ng/mL肿瘤坏死因子α(TNF-α)刺激RA-FLS建立模型。构建pcDNA3.1-circ-CBLB及阴性对照,分别转染至RA-FLS中。实验分为对照组、TNF-α处理的RA-FLS组、XFC处理的RA-FLS组、pcDNA3.1-circ-CBLB-NC转染的RA-FLS组(过表达空转组)、pcDNA3.1-circ-CBLB转染的RA-FLS组(过表达组)、pcDNA3.1-circ-CBLB联合XFC处理的RA-FLS组(过表达给药组)。采用CCK-8法检测细胞活力,采用流式细胞术检测细胞周期与凋亡,采用实时定量PCR检测circ-CBLB表达水平,采用ELISA检测抗炎因子白细胞介素4(IL-4)、IL-10,促炎因子IL-6、TNF-α水平。结果XFC最佳含药血清量为200 mL/L,处理时间为72 h;与同一时间模型组相比,XFC组、过表达组、过表达给药组的细胞活力均下降。与模型组比较,XFC组、过表达组、过表达给药组circ-CBLB表达水平升高、凋亡率升高,S期和G2期细胞比例增加,IL-4、IL-10含量升高,IL-6、TNF-α含量降低。结论XFC处理上调RA-FLS中circ-CBLB表达,提高抗炎因子的水平,降低促炎因子的水平,抑制RA-FLS的细胞活力,提高其凋亡率,延长细胞周期,抑制RA-FLS增殖并促进其凋亡。

基于miR-486-5p、巨噬细胞极化探讨新风胶囊改善佐剂性关节炎大鼠关节炎症的作用机制

目的:观察新风胶囊对佐剂性关节炎(adjuvant arthritis,AA)大鼠巨噬细胞极化及miR-486-5p的影响,探究新风胶囊改善AA大鼠炎症的可能机制。方法:32只SD大鼠被随机分为两个不同组别:正常组(NC组,8只)和造模组(24只),通过对造模组大鼠右后足跖皮内注射弗氏完全佐剂,成功构建AA大鼠模型后,进一步随机细分为3组:模型组(MC组,8只)、新风胶囊组(XFC组,8只)以及miR-486-5p抑制剂组(miR-486-5p inhibitor组,8只)。于炎症诱导后的第14天开始给予相应药物和试剂,NC组及MC组持续21天灌胃等量的生理盐水,然后检测各组AA大鼠足跖肿胀度(E)、关节炎指数(AI);采用酶联免疫吸附法测定(ELISA)检测大鼠细胞因子白细胞介素-23(interleukin-23,IL-23)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、IL-4及IL-13;流式细胞术检测大鼠外周血CD86、CD206表达;RT-qPCR检测大鼠关节滑膜miR-486-5p表达。结果:(1)与NC组比较,MC组大鼠E、AI及IL-23、TNF-α、CD86和miR-486-5p表达升高(P<0.01);IL-4、IL-13、CD206表达降低(P<0.01)。(2)与MC组比较,XFC组和miR-486-5p inhibitor组E、AI、IL-23、TNF-α、CD86和miR-486-5p表达降低(P<0.01);IL-4、IL-13、CD206表达升高(P<0.01)。(3)与miR-486-5p inhibitor组比较,XFC组IL-4、IL-13、CD206表达升高(P<0.01);IL-23、TNF-α、CD86和miR-486-5p表达降低(P<0.01);E、AI差异不明显(P>0.05)。结论:AA大鼠炎症与巨噬细胞极化和miR-486-5p表达有关,新风胶囊能明显改善AA大鼠关节炎症,其机制可能与抑制miR-486-5p表达,调节巨噬细胞极化有关。

新风胶囊通过结合Wnt5a经Wnt/β-catenin信号通路抑制类风湿性关节炎

目的:本研究将探讨Wnt5a是否可以作为类风湿性关节炎(RA)潜在的诊断和治疗靶点,新风胶囊(XFC)如何通过Wnt5a/β-catenin信号通路改善RA。方法:在体内Adjuvant arthritis(AA)大鼠模型中采用ELISA和RT-qPCR检测炎症因子和病理基因研究XFC对AA大鼠疗效,RT-qPCR检测验证XFC调控通过网络药理学预测的核心基因和关键通路。在体外原代AA成纤维样滑膜细胞(FLS)中采用RT-qPCR、Western blot和免疫荧光等方法研究XFC对Wnt/β-catenin通路的调节机制。结果:XFC显著下调AA大鼠的关节炎评分和足爪肿胀,抑制AA大鼠关节炎症。XFC降低AA大鼠外周血中炎症因子TNF-α和IL-1水平,抑制AA大鼠关节滑膜和AA FLS中病理基因MMP3和fibronectin水平。网络药理学预测出Wnt通路与XFC治疗RA高度相关。细胞水平上,含XFC血清抑制Wnt通路相关基因β-catenin、CCND1和c-Myc的表达。分子对接结果显示XFC关键成分与Wnt5a的结合能力强,在AA FLS中Wnt5a过表达(Wnt5a-ove)干扰了XFC的作用。结论:Wnt5a在AA FLS和RA FLS中表达明显升高,XFC通过与Wn5a结合,抑制Wnt/β-catenin信号通路活化改善RA,为XFC改善RA提供新的治疗机制。

新风胶囊治疗类风湿性关节炎疗效观察

目的研究新风胶囊(Xinfeng Capsule,XC)治疗类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)疗效。方法选择80例活动期RA患者,分为治疗组和对照组,每组40例,两组均予以同等常规抗风湿对症治疗:甲氨蝶呤10 mg/周;疼痛明显时予以双氯芬酸胶囊50 mg,每天2次,治疗组同时服用新风胶囊3片/次,每天3次,两组均连续治疗12周。检测两组患者血清铁(serum iron,SI)、血清铁蛋白(serum ferritin,SF)、转铁蛋白(transferrin,TRF)以及RA疾病活动指标(DAS-28评分)。结果新风胶囊能改善活动期RA患者HAQ、DAS-28评分、hs-CRP、PGA、ESR、关节肿胀数、关节压痛数、SI、SF、TRF及疾病活动指标晨僵时间,结果显著优于对照组(P<0.01,P<0.05)。结论新风胶囊能改善活动期RA患者的疾病活动指数及铁储备情况,降低各项疾病活动相关指标。

新风胶囊对佐剂性关节炎大鼠疗效及滑膜fas、fasL及bcl-2表达的影响

目的 :观察新风胶囊对佐剂性关节炎大鼠疗效及对病变滑膜fas、fasL、bcl 2表达的影响。方法 :采用弗氏完全佐剂造模 ,设立正常组、模型组、甲氨喋呤 (MTX)组、雷公藤 (TPT)组和新风胶囊 (XFC)组 ;记录各组大鼠的关节炎指数及体重变化 ;检测fas、fasL、bcl 2在局部关节滑膜组织中的表达。结果 :与治疗前比较 ,XFC组、TPT组及MTX组治疗后大鼠的关节炎指数显著降低 (P <0 0 1,P <0 0 5 )。XFC组给药前后体重增加值与正常组比较 ,差异无显著性 (P >0 0 5 ) ;TPT组及MTX组给药前后体重增加值显著低于正常组和XFC组 (P <0 0 1)。与模型组比较 ,XFC组fasL表达显著增加 (P <0 0 5 )、bcl 2、fas表达均有所减少 ,但差异无显著性 (P >0 0 5 ) ;XFC组上述数据与MTX组、TPT组比较差异无显著性 (P >0 0 5 )。结论 :XFC与MTX、TPT一样能降低佐剂性关节炎模型大鼠的关节炎指数 ,XFC在增加模型大鼠的体重方面优于MTX和TPT ;XFC可能通过促进fasL的表达、抑制bcl 2的表达 ,促进增生滑膜细胞的凋亡 ,达到抑制滑膜增生的目的。

新风胶囊对佐剂性关节炎大鼠滑膜细胞及脾脏淋巴细胞超微结构作用的实验研究

目的 :观察新风胶囊对佐剂性关节炎大鼠治疗作用及对滑膜细胞、脾脏淋巴细胞超微结构的作用。方法 :将 6 0只大鼠随机分为正常对照组、模型对照组、新风胶囊组和雷公藤组 ,每组 15只 ,制备完全佐剂并分别向除正常对照组以外其余动物右后足跖皮内注射 0 1ml致炎。电镜观察滑膜细胞、脾脏淋巴细胞超微结构变化 (包括线粒体肿胀、空泡变、嵴突病变等 ) ,计算各组线粒体病变率。结果 :与治疗前比较 ,新风胶囊组及雷公藤组治疗后右后足跖肿胀度显著降低 (P <0 0 5 ) ;与模型对照组比较 ,新风胶囊组和雷公藤组治疗后模型大鼠关节滑膜细胞线粒体的病变率显著降低 (P <0 0 5 ) ;新风胶囊组脾脏淋巴细胞线粒体病变率显著降低 (P <0 0 5 ) ,而雷公藤组脾脏淋巴细胞线粒病变率差异无显著性 (P >0 0 5 )。与雷公藤组比较 ,新风胶囊组治疗后滑膜细胞及脾脏淋巴细胞线粒体病变率显著降低 (P <0 0 5 )。结论 :新风胶囊与雷公藤均能降低佐剂性关节炎大鼠病变关节的肿胀度 ,新风胶囊改善佐剂性关节炎大鼠滑膜和脾脏的超微结构病变的作用优于雷公藤 。

新风胶囊可以调节类风湿性关节炎患者的免疫功能和改善心功能

目的观察益气健脾化湿通络中药新风胶囊(XFC)对活动期类风湿性关节炎(RA)患者心功能、血清白细胞介素17(IL-17)、IL-10及B、T淋巴细胞衰减因子(BTLA)的影响。方法将60例活动期RA患者采用抽签的方式分为2组:治疗组30例口服XFC(3粒/次,3次/d);对照组30例口服甲氨蝶呤(10 mg/次,1次/周)。2组均治疗30 d为1个疗程,连续观察3个疗程。另设正常对照(NC)组20名。以超声心动图测量2组治疗前后心功能相关参数的变化,比较2组临床疗效,ELISA检测血清IL-17、IL-10含量,流式细胞术检测T细胞亚群BTLA水平,观察XFC对RA患者心功能、血清IL-17、IL-10及BTLA的影响。结果与NC组相比,RA患者E峰显著降低、A峰显著升高,E/A比值、左心室内径缩短率(FS)均显著降低。与对照组相比,治疗组A峰、红细胞沉降率(ESR)、超敏C反应蛋白(hs-CRP)、血尿酸(UA)、IL-17显著降低,E/A比值、CD4+BTLA+T细胞、CD8+BTLA+T细胞显著升高。相关性分析表明T细胞亚群BTLA表达与ESR、IL-17呈正相关,与IL-10无明显相关性。结论 RA患者心功能下降与致炎细胞因子及抑炎细胞因子失衡有关;XFC能够改善RA患者的心功能;与上调IL-10、增加CD4+BTLA+T细胞、CD8+BTLA+T细胞,下调IL-17、UA、ESR、hs-CRP水平,降低免疫炎症反应有关。

新风胶囊改善类风湿性关节炎患者心功能的机制

目的观察类风湿性关节炎(RA)患者心功能变化,外周血B、T淋巴细胞衰减因子(BTLA)及氧化应激相关指标变化,探讨中药新风胶囊(XFC)改善RA心功能的机制。方法选取100例RA患者随机分为2组:XFC治疗组50例和来氟米特(LEF)对照组50例;30 d为1个疗程,连续用药1个疗程;并从体检中心抽取40例健康人作为正常对照。采用流式细胞术检测BTLA表达频率及活化水平,采用魏氏法测定血沉(ESR),全自动生化分析仪测定C反应蛋白(hs-CRP)和类风湿因子(RF)。ELISA检测2组血清细胞因子(IL-1β、IL-17、IL-35、IFN-γ)及氧化应激指标[总抗氧化能力(TAOC)、丙二醛(MDA)、活性氧(ROS)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)]的含量。采用超声心动图检测2组心功能参数:心脏射血分数(EF%),每搏输出量(SV%),心室短轴缩短分数(FS%)。二尖瓣血流舒张早期峰值流速(E)、二尖瓣血流房缩期峰值流速(A)、E波与A波峰值流速的比值(E/A)。结果与正常组相比,RA患者心功能参数EF%、E峰、E/A明显降低,A峰明显升高,FS%无明显差异。RA患者IL-1β、IL-17和ESR、CRP升高,BTLA、IL-35、IFN-γ降低;外周血ROS、MDA明显升高,SOD、GSH明显降低;相关性分析结果显示:心功能参数EF%、FS%与CD24+细胞、CD19+CD24+细胞呈负相关,E/A与BTLA呈正相关,A峰与CD19+细胞呈正相关;EF%与ROS呈正相关,SV与MDA、SOD呈正相关;E峰与TAOC呈负相关。药物干预后,XFC组治疗RA总有效率为86%,能有效改善EF%、FS%、E峰、E/A等心功能参数,升高外周血SOD、GSH,降低ROS、MDA,升高BTLA、IL-35、IFN-γ,降低IL-1β、IL-17;与对照组相比,XFC在改善患者DAS28、提高心功能参数等方面优于LEF。结论 XFC通过提高外周血CD19+和CD24+B细胞的BTLA表达,抑制B细胞介导的体液免疫,减轻氧化应激损伤,从而改善心功能。

新风胶囊对活动期类风湿性关节炎患者细胞因子的影响

目的 观察健脾化湿通络中药新风胶囊 (XFC)对活动期类风湿性关节炎 (RA)患者细胞因子的影响。方法 4 0例RA患者随机分为两组 ,治疗组 2 0例应用新风胶囊 ,对照组 2 0例应用雷公藤多苷片 ,两组均为 3个月为 1个疗程 ,均治疗 1个疗程 ,观察临床疗效及CRP、RF、细胞因子 (IL 1、TNF α、IL 4、IL 10 )等指标的变化。结果 XFC在总有效率、改善RA关节症状及部分实验室指标方面与雷公藤多苷片作用相似 ,但在改善全身整体症状、脾虚湿盛、瘀血症状 ,调整细胞因子平衡方面显著优于雷公藤 ;而且治疗组药物不良反应 (如食欲减退、腹胀、腹泻 )的积分值显著低于对照组。结论 新风胶囊可综合改善RA的关节及全身病变 ,其作用机制可能与降低致炎因子 。

新风胶囊对膝骨关节炎患者B、T淋巴细胞衰减因子及氧化应激的影响

目的探讨膝骨关节炎患者(knee osteoarthritis,KOA)B、T淋巴细胞衰减因子(B and T lymphocyte attenuator,BTLA)及超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)的变化及新风胶囊(XinFeng capsule,XFC)对其影响。方法将60例KOA患者按随机分为2组:30例治疗组,即XFC组(每次3粒,每日3次)和30例对照组,即氨基葡萄糖组(glucosamine,GS组,每次2粒,每日3次);2组治疗均30天为1个疗程,连续1个疗程。流式细胞术检测BTLA表达频率及活化水平,比色法测定血清SOD,采用魏氏法测定血沉(erythrocyte sedimentation rate,ESR),全自动生化分析仪测定hs-C反应蛋白(hypersensitive cross-reacting protein,hs-CRP)。酶联免疫吸附法检测2组血清中白介素(interleukin,IL)-10,IL-1β,丙二醛(methane dicarboxylic aldehyde,MDA)。结果①与NC组比较,KOA患者外周血BTLA在CD3+T细胞(CD3+BTLA+T cell)、CD8+T细胞(CD8+BTLA+T cell),CD4+T细胞上(CD4+BTLA+Tcell)的表达频率明显下降,MAD明显升高。与正常范围比较,60%的KOA患者血清SOD水平降低,且随Lequesne MG的加重及病程的延长而降低,而与年龄、性别无关。②Pearson相关分析结果显示:外周血BTLA表达水平与Lequesne MG呈明显负相关,与RP、RE、BP积分呈正相关;CD3+BTLA+T cell、CD4+BTLA+T cell与IL-1β呈明显负相关,与血清IL-10呈正相关;CD4+BTLA+T cell与血清SOD呈正相关(P<0.05或P<0.01)。③与对照组相比,SF-36总积分、BTLA表达频率、IL-10明显升高,Lequesne MG、症状分级量化评分、IL-1β、MDA明显降低。结论 XFC能提高KOA患者外周血BTLA表达,抑制T细胞活化,降低异常免疫反应和氧化应激损伤,减轻关节疼痛症状,改善患者全身机能,从而提高生活质量水平。

新风胶囊通过BTLA-HVEM诱导Treg免疫耐受改善膝骨关节炎大鼠心肺功能

目的:观察膝骨关节炎(KOA)大鼠心肺功能的变化及新风胶囊(XFC)对其影响,探讨可能的分子机制。方法:按随机数字表将40只大鼠随机分为正常对照(NC)组,模型对照(MC)组,氨基葡萄糖对照(GS)组,XFC组,每组10只。除NC组外,采用关节腔注射木瓜蛋白酶和L-半胱氨酸方法复制成KOA大鼠模型,造模后第14天开始给药。NC组及MC组均给予生理盐水,剂量为0.01 g/kg,其余2组分别给予GS、XFC混悬液,剂量分别为0.098 g/kg、0.375 g/kg。采用超声诊断仪检测大鼠心功能,动物肺功能仪检测大鼠肺功能,ELISA法检测BTLA、HVEM、IL-17、IL-4、TGF-β1;流式细胞术检测大鼠外周血CD4+CD25+Treg、CD4+CD25+Foxp3+Treg的表达。结果:与NC组比较,MC组体质量、E、E/A、FVC、FEV1、FEF25、FEF50、FEF75、MMF、PEF,BTLA、HVEM、IL-4、CD4+CD25+Treg、CD4+CD25+Foxp3+Treg明显降低,TGF-β1、IL-17明显升高(P<0.01或P<0.05)。与MC组比较,各组大鼠体质量,心功能参数E峰、E/A,肺功能参数FEV1、FEF50、FEF75、PEF,BTLA、HVEM、IL-4、CD4+CD25+Treg、CD4+CD25+Foxp3+Treg明显升高,关节软骨Mankin评分、心系数、肺系数、TGF-β1、IL-17明显降低(P<0.01或P<0.05);与GS组相比,XFC组体质量、Treg升高最为明显(P<0.01或P<0.05)。结论:新风胶囊改善KOA大鼠关节软骨Mankin评分,改善其心肺功能,其机制可能是促进BTLA-HVEM负调共刺激信号作用,诱导Treg免疫耐受,上调IL-4表达,下调IL-17、TGF-β1表达,抑制异常免疫炎症反应。

新风胶囊上调佐剂性关节炎大鼠滑膜组织Bax和caspase-3表达并下调Bcl-2表达

目的观察新风胶囊(XFC)对佐剂性关节炎(AA)大鼠滑膜组织中Bcl-2、Bax、caspase-3表达的影响。方法 SD大鼠,随机分为正常组、模型组、(1.5、3.0、6.0)g/kg XFC组、40 mg/kg雷公藤多苷片作为阳性对照药物组,每组10只。除正常组外,采用Freund完全佐剂皮内注射的方法诱导AA大鼠模型。造模第19天灌胃给予药物连续30 d,1次/d。实验结束后,取非致炎侧踝关节组织,HE染色观察病理学改变,反转录PCR检测滑膜组织中Bcl-2、Bax、caspase-3 mRNA的表达,免疫组织化学染色和Western blot法检测滑膜组织中Bcl-2、Bax、caspase-3蛋白的表达水平。结果与模型组相比,(3.0、6.0)g/kg XFC组不仅可改善AA大鼠踝关节病理组织学损伤程度,还可降低Bcl-2的表达,提高Bax和caspase-3的水平。结论XFC可上调滑膜组织Bax、caspase-3的表达,下调Bcl-2的表达。

新风胶囊中水溶性蛋白的SDS-PAGE分析方法研究

目的:建立新风胶囊中水溶性蛋白SDS-PAGE的分析方法。方法:采用SDS-PAGE电泳方法,根据分子量大小不同,分离新风胶囊中水溶性蛋白;电泳条件:1.0 mm×25齿试样格,浓缩胶浓度为4.5%,分离胶浓度为12.5%,分离电压100 V,上样量5μL,染色2 h,脱色4 h。结果:新风胶囊中水溶性蛋白成分含量不均,其中主带有2条,分子量为16.38、17.07 kDa左右。结论:SDS-PAGE电泳方法可以用于新风胶囊中水溶性蛋白成分测定,为建立该制剂电泳特征图谱提供依据。

新风胶囊通过抑制miR-155/NF-κB信号通路改善强直性脊柱炎活动期患者高凝状态

目的新风胶囊(XFC)对强直性脊柱炎(AS)活动期患者miR-155、核因子κB(NF-κB)信号通路、高凝状态的影响,探讨其可能的机制。方法采用随机数字表法将56例AS活动期患者分为新风胶囊组(XFC组)和柳氮磺吡啶组(SASP组)。实时荧光定量PCR检测miR-155。反转录PCR检测核因子κB激活蛋白1(Act1)、NF-κB抑制蛋白α(IκBα)、IκB激酶β(IKKβ)、NF-κB p65、NF-κB p50 mRNA的水平,Western blot法检测NF-κB P65、NF-κB P50蛋白表达,ELISA检测血清血栓素B2(TXB2)、6-酮-前列环素F1(6-keto-PGF1)、血小板颗粒膜蛋白(GMP140)、血小板活化因子(PAF)、纤溶酶原激活抑制剂(PAI-2)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素4(IL-4)、IL-10、IL-17。同时评价XFC对AS患者临床疗效。结果 XFC组Bath AS疾病活动指数50%达标率(BASDAI50)显著高于SASP组。与SASP组治疗后相比,XFC组治疗后血小板(PLT)、纤维蛋白原(FBG)、D-D二聚体(D-D)、TXB2、GMP140、PAF、PAI-2、IL-17、血沉(ESR)、C反应蛋白(CRP)、视觉模拟评分(VAS)、Bath AS疾病活动指数(BASDAI)、Bath AS功能指数(BASFI)、Bath AS总体指数(BAS-G)降低更明显,且其可明显升高6-keto-PGF1、IL-4、IL-10;与SASP治疗后相比,XFC治疗后IKKβ、IκBα、NF-κB p65、NF-κB p50 mRNA及NF-κB P65、NF-κB P50蛋白、miR-155表达水平更低。结论 XFC能有效改善AS活动期患者的高凝状态,可能与抑制miR-155、抑制NF-κB信号通路活化有关。

新风胶囊治疗对强直性脊柱炎患者BTLA^+T细胞数量和氧化应激的影响

目的探讨强直性脊柱炎(AS)患者B、T淋巴细胞衰减因子(BTLA)及活性氧(ROS)、活性氮(RNS)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、总抗氧化能力(TAOC)的变化及新风胶囊(XFC)对其影响。方法将140例AS患者随机等分为XFC组(3粒/次,tid)和柳氮磺吡啶(SASP)组(4片/次,bid);连续治疗3个月。60例健康体检者为对照组。采用流式细胞术检测患者外周血BTLA表达频率及活化水平;采用ELISA检测2组血清中氧化应激指标(ROS、RNS、MDA、SOD、CAT、TAOC)和白细胞介素4(IL-4)、IL-10、IL-1β、肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量;采用魏氏法检测血沉(ESR);采用日立7060型全自动生化分析仪检测高敏C反应蛋白(Hs-CRP)。结果 XFC组临床疗效显著优于SASP组,具有统计学意义(P<0.01)。与健康对照组相比,AS患者外周血CD3+T细胞、CD4+T细胞BTLA的水平显著降低(P<0.01或P<0.05);与对照组相比,AS患者SOD、CAT、TAOC值均显著降低,ROS、RNS、MDA值显著升高(P<0.01或P<0.05);与对照组相比,AS患者血清IL-1β、TNF-α和ESR、Hs-CRP值显著升高(P<0.01),IL-4、IL-10水平显著降低(P<0.01或P<0.05)。与治疗前相比,2组治疗后外周血BTLA+CD3+T细胞、BTLA+CD4+T细胞、SOD、TAOC、IL-4,SF-36量表生理机能(PF)、社会功能(SF)、生理职能(RP)、情感职能(RE)、躯体疼痛(BP)、精神健康(MH)、活力(VT)以及一般健康状况(GH)八个维度积分均显著升高,ROS、MDA、TNF-α、ESR、Hs-CRP、VAS、BASDAI、BASFI、BAS-G均显著降低(P<0.01或P<0.05)。XFC组与SASP组相比,差异有统计学意义(P<0.01或P<0.05)。Pearson相关分析结果显示:外周血BTLA表达水平与SOD、RP、BP、SF、RE呈正相关;BTLA+CD3+T细胞、BTLA+CD4+T细胞与ROS、MDA、IL-1β、TNF-α、ESR、VAS、BASDAI呈明显负相关,与TAOC、IL-4、IL-10呈正相关;BTLA+CD3+T细胞与RNS、Hs-CRP、BASFI呈明显负相关;BTLA+CD4+T细胞与CAT呈正相关。结论 XFC能增强AS患者外周血BTLA表达,负性调节T细胞的激活与增殖。

新风胶囊对类风湿性关节炎患者的疗效及肺功能生活质量的影响

目的:观察中药新风胶囊对类风湿关节炎(Rheumatoid arthritis,RA)患者的疗效及对其肺功能、生活质量的影响。方法:将40例RA患者按随机数字表分为新风胶囊实验组(20例)和正清风痛宁对照组(20例),观察两组的疗效及治疗前后肺功能、生活质量、临床症状体征、实验室指标的改善情况。结果:两组总有效率相比无显著差异,但治疗组显效率显著高于对照组(P<0.05)。治疗后,实验组IC、MVV、FEF25、FEF50、PEF均明显升高(P<0.05或P<0.01),对照组MVV、FVC明显升高(P<0.05或P<0.01)。其中,MVV实验组较对照组改善程度更明显,实验组治疗后FEF25、FEF50、FEF75、PEF的均值均显著高于对照组(P<0.05或P<0.01)。治疗后,两组生理功能积分、心理功能积分、健康自我认识能力积分均明显降低(P<0.01),实验组社会功能积分明显降低(P<0.01),而对照组较治疗前无显著差异(P>0.05);其中生理功能积分、社会功能积分、生活质量总积分等部分指标,实验组较对照组改善程度更明显(P<0.01)。结论:中药新风胶囊通过抗炎消肿止痛,调节免疫,能全面改善RA患者关节局部症状,降低炎症活动性指标,还能改善RA患者肺功能。同时,也能改善生活质量,其综合作用优于正清风痛宁缓释片。

类风湿关节炎患者肺功能变化及中药新风胶囊干预研究

类风湿关节炎（RA）是一种以慢性滑膜炎症为主要特征的自身免疫疾病，关节炎症刺激可导致关节内软骨和骨的破坏，反复迁延多年，最终导致关节畸变及功能丧失［1-2］。然而RA病变并非局限于关节局部，常伴有关节以外的其他脏器病变，甚至可引起主要脏器的血管炎而危及生命［3］。因肺组织含有丰富的结缔组织和血管，因此，RA肺部受累的概率比其他组织增加，且随着RA病程延长，肺受累的概率逐步增高。研究显示［4］，约有11％RA患者会继发肺间质纤维化改变，最终出现肺功能的减低。RA中医证候呈现脾虚湿盛、虚实夹杂的特征［5］。既往研究发现［6-9］，治疗RA肺功能损伤采用“从脾论治”原则，将具有健脾化湿通络功效的中药复方“新风胶囊”应用于临床，取得了良好的临床效果，并对RA肺功能损伤患者和佐剂关节炎（AA）肺功能下降的大鼠亦有一定疗效。

佐剂关节炎大鼠血小板参数和细胞因子的变化及新风胶囊对其的影响

目的:观察佐剂关节炎(adjuvant arthritis,AA)大鼠血小板参数(血小板计数PLT、血小板压积PCT、血小板平均体积MPV、血小板分布宽度PDW)和细胞因子(IL-1β、TNF-α、IL-10)的变化及新风胶囊对其的影响。方法:将40只SD雄性大鼠随机分为正常对照组、模型对照组和新风胶囊(XFC)、甲氨喋呤(MTX)、雷公藤多苷片(TPT)3个治疗组,每组8只,用弗氏完全佐剂(Freund′s complete adjuvant,CFA)0.1ml分别向除正常对照组以外的其余大鼠右后足跖皮内注射诱发大鼠产生关节炎,观察各组大鼠血小板参数(PLT、PCT、PDW、MPV)和细胞因子(IL-1β、TNF-α、IL-10)的变化。结果:1.与正常对照组相比,模型对照组大鼠血小板参数PLT、PCT及IL-1β、TNF-α显著升高,IL-10值降低(P<0.05或P<0.01)。2.与模型对照组相比,XFC、MTX、TPT组均能升高AA大鼠IL-10,降低PLT、PCT、IL-1β和TNF-α(P<0.05或P<0.01);各治疗组相比,在升高AA大鼠IL-10方面,XFC组优于其余两治疗组(P<0.05),在降低PLT、PCT、IL-1β和TNF-α值方面无明显差异(P>0.05)。3.AA大鼠的血小板参数PLT、PCT与IL-1β、TNF-α、足跖肿胀度、关节炎指数呈正相关,与IL-10值呈负相关(P<0.01或P<0.05)。结论:AA大鼠的血小板参数PLT、PCT升高,且与IL-1β、TNF-α、IL-10、足跖肿胀度、关节炎指数具有相关性;XFC在降低AA大鼠足跖肿胀度、关节炎指数的同时,也能降低PLT、PCT,其作用机制可能与XFC能够改善病情及下调IL-1β和TNF-α,上调L-10有关。