方格星虫多糖体外抗乙型肝炎病毒活性的研究

以Hep G2.2.15细胞为研究模型,选用拉米夫定为阳性对照药物,采用Taqman荧光定量PCR检测细胞上清HBV DNA,ELISA检测培养上清液HBsAg、HBeAg水平的变化。采用MTT法观察它们对细胞生长的影响。发现方格星虫多糖的4个剂量组(250,125,62.5,32.3 mg/L)和所观察的时间点(3、6、9 d)对HBV DNA、HB-sAg、HBeAg表现出剂量与时间依赖的抑制作用(P<0.05)。方格星虫多糖对HBV DNA抑制的半数抑制浓度为49.48 mg/L,对Hep G2.2.15细胞半数细胞毒性浓度为250 mg/L,治疗指数为5.06。认为方格星虫多糖对培养2215细胞中呈剂量与时间依赖的抑制作用,具有较好的应用前景。

方格星虫多糖对低剂量电离辐射、一氧化碳、苯和噪声复合损伤大鼠的保护作用观察

目的观察方格星虫多糖对低剂量电离辐射、一氧化碳、苯和噪声等有害环境因素复合损伤大鼠的保护作用。方法健康成年SD大鼠50只,随机分为正常对照组、模型对照组及方格星虫多糖低、中、高剂量组。给药组大鼠每天于γ射线照射前经口给予方格星虫多糖70、140、280mg/(kg.d),连续7d。模型对照组给予等体积0.9%NaCl。试验结束后处死动物,全自动血细胞计数仪检测外周血细胞计数,紫外分光光度法测定骨髓DNA含量,试剂盒检测血清超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量,并计算主要脏器(肝脏、脾脏、胸腺)指数。结果与模型对照组比较,方格星虫多糖处理后外周血红细胞、血小板计数及血细胞比容、血红蛋白水平、SOD活性均显著升高(P<0.05,P<0.01),白细胞有升高趋势,MDA含量明显下降(P<0.05),骨髓DNA含量显著升高(P<0.05),而肝脏指数、脾脏指数、胸腺指数均无明显变化。结论方格星虫多糖对有害环境因素复合损伤大鼠具有升高白细胞、血小板,提高抗氧化能力,促进骨髓损伤修复等保护作用。

方格星虫多糖分子量的高效凝胶渗透色谱法测定

目的建立方格星虫多糖的分子量测定分析方法。方法应用高效凝胶渗透色谱法,色谱柱为phenomenex PolySep-GFC-P 4000(300×7.8 mm),流动相为0.71%硫酸钠溶液(内含0.02%叠氮钠),柱温:35℃,RID-10A示差折光检测器(检测器温度35℃),流速0.5 ml·min-1。结果根据建立的方法测定,得到方格星虫多糖的高效凝胶色谱图,并计算出其重均分子量。结论所用方法简便、快速、准确,可用于方格星虫多糖的质量控制。

方格星虫多糖抗乙型肝炎病毒的实验研究

目的进一步探讨方格星虫多糖(SNPs)治疗乙型肝炎(乙肝)的机制。方法取50只重庆麻鸭随机分为对照组、阿昔洛韦组及SNPs大、中、小剂量组各10只,均经静脉注射HBV-DNA阳性鸭血清0.2 ml/只建立乙肝模型,7 d后分别予生理盐水、阿昔洛韦及不同剂量SNPs灌胃,均为每天2次,连续给药10 d。给药前1 d、用药5 d、用药10 d及停药后3 d各组均自鸭腿胫静脉取血分离血清,采用实时定量PCR法检测HBV-DNA复制情况,计算HBV-DNA抑制率。结果SNPs不同剂量组HBV-DNA复制均有不同程度抑制(P<0.05),且大、中剂量组与阿昔洛韦组作用相似,但小剂量组反跳现象明显。结论SNPs在体内有一定抑制HBV复制作用,此为抗乙肝药物的研制提供了新思路。

方格星虫多糖对人肠上皮细胞辐射损伤的保护作用

研究方格星虫多糖(Sipunculus nudus polysaccharide,SNP)对正常人肠上皮细胞(Human intestinalepithelial cell,HIEC)电离辐射损伤的保护作用。用CCK-8 法检测HIEC细胞的存活率,筛选最佳SNP作用浓度;用克隆法分析SNP对辐照后HIEC 细胞增殖能力的影响;在^137Cs γ射线照射至吸收剂量为10 Gy后48 h,用Hoechst33342/PI 染色法结合显微镜观察细胞凋亡,并用流式细胞仪检测细胞凋亡率和细胞内活性氧(Reactive oxygen species,ROS)水平。结果显示:细胞存活率随吸收剂量增大而显著下降,而经一定浓度的SNP预处理后,存活率显著上升且与浓度呈正相关;当SNP终质量浓度为50 μg/mL时,存活率最高,克隆细胞的存活率也显著高于辐照模型组;与辐照模型组相比,SNP预处理的细胞凋亡率和胞内ROS水平均显著下降。结果表明,SNP对^137Cs γ射线造成的HIEC细胞损伤有较好的防护作用,其机制可能与SNP清除细胞内自由基、减缓细胞凋亡有关。

气相色谱法分析方格星虫多糖的单糖组成

目的:研究方格星虫多糖的单糖组成。方法:采用3 mol.L-1三氟乙酸将方格星虫多糖水解成单糖,然后与盐酸羟胺进行衍生化反应,采用气相色谱法对其单糖组成进行分析。结果:方格星虫多糖的单糖组成主要为阿拉伯糖和葡萄糖,其质量分数分别为7.91%和79.32%。结论:此法简单、快速,重现性好,可用于方格星虫多糖的单糖组成分析。

凯氏定氮法和考马斯亮蓝法测定方格星虫多糖中蛋白质的含量

目的:建立一种快速、简单、准确测定方格星虫多糖中蛋白质含量的方法。方法:分别采用凯氏定氮法和考马斯亮蓝法测定蛋白质含量,并进行稳定性、精密度、重复性和回收率测定。结果:凯氏定氮法和考马斯亮蓝法测定方格星虫多糖中蛋白的含量分别为2.40%,2.22%,其回收率分别为98.69%,100.97%,2种方法测得蛋白质含量基本相同,无显著性差异(P>0.05)。结论:综合考虑,凯氏定氮法简便、快速、准确,可用于方格星虫多糖中蛋白质的质量控制。

方格星虫多糖对低剂量中子辐射损伤大鼠的保护作用

目的研究方格星虫多糖（SNPS）对低剂量中子辐射损伤大鼠的保护作用。方法 SNPS 3个剂量组70,140和280mg·kg-1。SD大鼠,50只,雄性,清洁级,180~200g,每天于照射前经口给予受试药,连续38d。除正常对照组外,其余各组每天照射22h,放射源为252 Cf中子源,吸收剂量率为0.085mGy·h-1,累积吸收剂量为71.06mGy。在照射第7、14、21、28、35d检测外周血细胞计数,在照射38d检测血清SOD和GSH-PX活力、MDA含量,血清胆固醇和甘油三酯含量,肝脏脂代谢相关基因CYP7A1、FABP1、PPARαmRNA表达变化,计算主要脏器指数。结果与模型对照组比较,在照射第35d,SNPS中剂量组外周血血小板显著回升,在照射第38d,SNPS各剂量组血清GSH-PX活力显著上升,血清MDA含量显著下降,肝脏中胆固醇7-α羟化酶含量显著回升。结论 SNPS对长期低剂量中子辐射损伤大鼠具有升高血小板,提高抗氧化能力,调节胆固醇代谢等保护作用。

方格星虫多糖对小鼠抗辐射能力的影响

目的 探讨方格星虫（sipunculus nudus）多糖对辐射损伤小鼠的保护作用.方法 C57小鼠给予方格星虫多糖15 d后,用60Co γ射线进行8 Gy一次性全身照射,辐照后继续给药,观察照后30 d生存情况和照后3 d外周血细胞计数、血清超氧化物歧化酶（SOD）活性、丙二醛（MDA）含量.结果 方格星虫多糖能提高受照小鼠30 d存活率,延长其平均生存时间,提高机体的抗氧化能力.结论 方格星虫多糖对辐射损伤小鼠具有明显的保护作用,能提高小鼠的抗辐射能力.

方格星虫多糖对HUVEC细胞137Cs γ射线损伤的保护作用

目的研究方格星虫多糖(Sipunculus nudus polysaccharide, SNP)对HUVEC细胞电离辐射损伤的保护作用。方法采用CCK-8法测定137Cs γ射线照射的SNP预处理HUVEC细胞的存活率,筛选获得137Cs γ射线的最佳辐照剂量为8 Gy,SNP的最佳处理浓度为100 g/ml。采用克隆形成法检测SNP预处理后HUVEC细胞的辐照敏感性。采用Hoechst33342和PI双染色法及流式细胞术测定HUVEC细胞凋亡情况。结果 HUVEC细胞存活率随辐射剂量增大而显著下降(P<0.01);而经一定浓度的SNP预处理后,HUVEC细胞存活率显著上升,且与浓度呈正相关(P<0.01),当SNP终浓度为100 μg/ml时,存活率最高,由照射后的63.43%上升至84.96%(P<0.01);SNP预处理组的细胞克隆形成率显著高于未处理组(P<0.01)。与辐照模型组相比,SNP预处理的细胞凋亡率和细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平均显著下降,其中凋亡率由15.6%降至6.8%,ROS水平由47.10×104降至41.77×104,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01);Hoechst33342着色的蓝色荧光和PI着色的红色荧光也显著降低(P<0.01)。结论 SNP预处理能提高照射后细胞存活率和克隆形成率,有效降低辐射诱导的细胞凋亡和细胞内ROS水平,表明SNP对电离辐射所致的HUVEC细胞损伤具有较好的保护作用。