狐源兔脑炎微孢子虫极管蛋白2(PTP2)的原核表达及间接ELISA方法的建立

为了建立一种特异性好、敏感性高、重复性好的可检测蓝狐兔脑炎微孢子虫病的间接ELISA方法,试验首先从疑似感染兔脑炎微孢子虫(Encephalitozoon.cuniculi)的蓝狐脑组织DNA中扩增PTP2基因,并将其与原核表达载体pET-32a(+)连接,构建重组质粒pET32a-PTP2,转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中进行诱导表达,将菌体超声后对表达的重组蛋白进行可溶性分析,并纯化目的蛋白;然后以重组蛋白作为包被抗原,通过优化反应条件和临界值的确定建立蓝狐兔脑炎微孢子虫的间接ELISA方法,并进行特异性、敏感性和重复性试验;最后采用建立的间接ELISA方法对28份经常规PCR方法验证已经感染兔脑炎微孢子虫病的蓝狐血清样品进行检测,并计算符合率。结果表明:表达的重组蛋白的分子质量为45.8 ku,且表达产物以可溶性蛋白和包涵体两种形式存在,经纯化杂带明显减少,纯化后的重组蛋白质量浓度为1.55 mg/mL。间接ELISA方法的最佳包被抗原质量浓度为8μg/ml,最佳一抗稀释度为1∶100,最佳封闭液为5%脱脂乳,最佳封闭条件为37℃、1 h,最佳一抗孵育时间为120 min,最佳二抗稀释度为1∶5 000,最佳二抗孵育时间为60 min,最佳显色时间为20 min。阴、阳性血清OD_(450)临界值分别为0.268和0.302。建立的间接ELISA方法检测蓝狐犬瘟热病毒、蓝狐伪狂犬病毒、蓝狐细小病毒阳性血清均为阴性,可检测到稀释度为1∶3 200的蓝狐兔脑炎微孢子虫阳性血清,批内重复与批间重复变异系数均小于10%。用建立的间接ELISA方法检测28份蓝狐血清样品的阳性样品数为23份,与常规PCR方法的符合率为82.14%。说明试验成功建立了一种可检测蓝狐兔脑炎微孢子虫病的间接ELISA方法,该方法特异性好、敏感性高、重复性好,适合在基层推广。

浅谈药品中的残留溶剂分析方法的建立

本文从药品中残留溶剂种类的确定、残留溶剂检测方法的建立和优化以及残留溶剂检测方法的验证,系统地阐述药品中残留溶剂分析方法的建立流程和注意事项,以期从事药物研发及药物分析的同仁在对药品中的残留溶剂进行分析时,提供一定参考。

秦皮水提液中秦皮乙素含量检测方法的建立

为建立秦皮水提液中秦皮乙素含量检测的方法,以乙腈-0.1%磷酸（13：87）为流动相,采用高压液相色谱仪和紫外检测器进行测定。结果表明,在10-100μg/m L范围内,秦皮乙素浓度和峰面积的线性关系良好,秦皮乙素的平均回收率为96.35%（n=6）,RSD为2.15%。该方法符合方法学考察的规定,可作为秦皮水提液中秦皮乙素含量测定的方法。

黄连水提液中盐酸小檗碱含量检测方法的建立

建立黄连水提液中盐酸小檗碱含量检测的方法。以乙腈-0.03 mol/L磷酸二氢钾(30∶70)为流动相,采用高压液相色谱仪和紫外检测器进行检测。结果表明,在10-60μg/m L范围内,盐酸小檗碱浓度和峰面积的线性关系良好,盐酸小檗碱的平均回收率为98.15%(n=6),RSD为1.87%。该方法符合方法学考察的规定,可作为黄连水提液中盐酸小檗碱含量检测的方法。

金银花中异绿原酸A含量检测方法的建立

为建立金银花中异绿原酸A含量检测的方法,以乙腈-0.1%磷酸(20︰80)为流动相,采用高效液相色谱仪和紫外检测器进行测定。结果表明,在9.6～96μg/mL范围内,异绿原酸A浓度和峰面积的线性关系良好,异绿原酸A的平均回收率为102.07%(n=6),RSD为1.02%。该方法符合方法学考察的规定,可作为金银花醇提液中异绿原酸A含量测定的方法。

滴眼用利福平微生物限度检查方法的建立

目的建立滴眼用利福平的微生物限度检查方法,并对方法进行验证,结果采用薄膜过滤法细菌以600ml/膜,霉菌及酵母菌以300ml/膜冲洗量检查,各类菌的回收率均大于70%。结论,方法简便快速,结果可靠。

水产品中地西泮残留量测定方法的建立及稳定性研究

为了建立高效便捷的水产品中地西泮残留量的定量检测方法。作者通过实验研究得出:使用氨水-乙腈溶液对样品进行提取,采用陶瓷均质子均质样品,吸附剂净化样品,氮吹浓缩样品,用液-质联用仪对地西泮进行检测,得到地西泮测试的曲线范围为0.500~50.00 ng·mL^(-1),R=0.99992;样品出峰时间稳定且回收率范围为90.8%~110%。此方法具有省时、操作简便、检测回收率高、精密度好、出峰时间稳定的优势,可适合用于数量比较大的水产品样品中地西泮的检测。

复方醋酸钠林格注射液中无水葡萄糖含量测定方法的建立及葡萄糖转化现象的探讨

目的建立复方醋酸钠林格注射液中无水葡萄糖含量测定方法,并针对方法建立中发现的葡萄糖转化问题开展研究。方法采用氨基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱;以乙腈-水-氨水(体积比75∶25∶0.1)为流动相;示差折光检测器检测;流速为1.0 mL/min,柱温和检测池温度均为40℃。结果无水葡萄糖浓度在0.4125~8.249 mg/mL范围内线性关系良好(r=1.0000),定量限为101μg/L,平均回收率为100.5%,RSD为0.5%,采用该测定法发现样品中少量葡萄糖转化为果糖。结论建立的方法简单、准确、灵敏度高,不受葡萄糖转化现象的干扰,适用于复方醋酸钠林格注射液中无水葡萄糖的含量测定。

分析测试中的假阳性来源分析与判定方法的建立

分析测试中,样品由于受到各种因素的干扰,导致假阳性结果的出现,往往对质量控制造成影响,因此,对假阳性的来源进行研究和建立有效的假阳性判定体系,对于质量控制有着重要的作用。我们从以下几方面总结假阳性结果的来源。来源之一:背景。饮用水中甲醛测定的过程中,溶液的背景吸收非常容易造成假阳性,需要双甲酮实验进行假阳性判定,增加了实验复杂度。

霍乱弧菌实时荧光定量PCR快速检测方法的建立

为建立霍乱弧菌(VC)的快速检测方法,以VC的hlyA基因为靶基因设计合成引物及Taq Man探针建立实时荧光定量PCR快速检测法,同时对该方法进行了特异性、灵敏性、稳定性和重复性试验,并对145份临床样品进行了检测。结果表明:特异性试验中15株试验菌株荧光定量PCR检测只有VC菌株为阳性,表明该检测方法特异性强;灵敏性试验表明该方法的灵敏度为25 cfu/m L;稳定性和重复性试验表明同一样品重复检测4次,Ct值的变异系数均小于2%;对145份临床样品进行检测,共计检出2份VC阳性样品,与行标法(SN/T 2425—2010)检测结果一致。说明该检测方法灵敏度高、特异性强、重复性好,具有良好的实用性。

分级检验方法学的建立及其在血脂生化检验中的应用研究

目的探讨研究分级检验方法学的建立及其在血脂生化检验中的应用。方法 140例血脂生化检验标本,随机分为观察组和对照组,观察组采用分级检验,对照组采用传统的拉网式检验,对比分析两种检验方法的结果。探讨分级检验方法学的建立过程。结果在总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白(HDL)三项,组间比较差异无统计学意义(P>0.05),观察组低密度脂蛋白(LDL)、载脂蛋白AI、载脂蛋白B方面的比较,阳性率显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论分级检验科显著提高检验结果的准确性,检验成本低,是值得临床推广使用的血脂生化检验的好方法。

病原体RNA和DNA同步聚合酶连反应的方法建立与应用

目的:建立一种可同步检测病原体RNA或DNA的荧光定量RT-PCR方法,以提高突发公共卫生快速检测能力。方法:通过与经典荧光定量PCR的比对来验证新建立的方法能否同步扩增RNA和DNA以及对DNA的扩增效果。结果:新建立的方法可同步扩增RNA和DNA,扩增所需时间为35分钟,扩增曲线呈典型的"S"型,扩增效率E值均在理想值范围(0.916、0.923)、均在理想值范围(相关系数均可达到"1"),重复性良好(s均≤0.34、cv均≤1.13%),扩增灵敏度相同(平均ct值误差分布在0.02～0.25之间,t值分布在0.17～2.50之间,P均>0.05)。结论:新建立的方法可同步检测6种不同核酸类型的病原体,检测时间明显缩短,检测效果与经典荧光定量PCR相同。