ELISA法定量测定食蟹猴血清中的抗CTLA-4单克隆抗体

目的:建立酶联免疫吸附法(ELISA法)用于测定食蟹猴血清中的抗CTLA-4单克隆抗体(伊匹单抗,YERVOY^(■))的浓度。方法:建立间接ELISA方法对待测抗体药进行浓度测定,将Human CTLA-4蛋白包被于酶标板中,封闭后加入稀释后样品,采用HRP标记的羊抗人Ig G作为酶标抗体,用TMB底物进行显色并用2 mol·L^(-1)硫酸终止,在酶标仪上用双波长读取D_(450/630 nm)值。最后以标准曲线样品D_(450/630 nm)为纵坐标(Y),以样品浓度为横坐标(X),进行非线性五参回归运算,得到标准曲线方程,将待测样品D_(450/630 nm)带入方程即可得到待测样品浓度。结果:在优化的条件下,本方法的定量范围为0.625-30.000μg·mL^(-1),定量下限为0.625μg·mL^(-1)。精密度(批内和批间)均在±15%之内,准确度介于75%-125%。方法特异性、选择性、稀释线性均满足可接受标准,准确度介于80%-120%。同时抗CTLA-4单克隆抗体在食蟹猴血清中经验证具有良好的室温稳定性、反复冻融稳定性及长期稳定性,样品准确度均介于80%-120%。结论:本研究建立的方法满足《中华人民共和国药典》2020年版中生物样品定量分析方法验证指导原则的要求,可用于定量分析食蟹猴血清中抗CTLA-4单克隆抗体(YERVOY^(■))的浓度。