建鲤生长激素受体基因分离、转录子多态性以及组织表达特性

使用PCR、RT-PCR和RACE方法分离克隆了建鲤基因组内的4个jlGHRs基因,同源性分析和系统树表明它们两两分属于鱼类GHR1和GHR2,命名为jlGHR1a、jlGHR1b;jlGHR2a、jlGHR2b。jlGHR1s和jlGHR2s的两个旁系同源基因间氨基酸差异分别为5%和11%,但功能保守区FGVFS基序、Box1、Box2基本一致,jlGHR1s和jlGHR2s氨基酸差异为41%。jlGHRs和斑马鱼GHRs基因结构相同,在阅读框内存在7个内含子,两旁系同源基因间内含子长度或序列存在差异。jlGHR1s、jlGHR2s与不同鱼类GHR1、GHR2同源性高低与传统分类地位一致。实验过程中发现建鲤肝脏存在jlGHRs的多种转录子,包括丢失了外显子4的jlGHR1b'、保留了内含子3的jlGHR2a'、丢失了部分外显子8的jlGHR2as。实时定量RT-PCR组织表达结果显示4个jlGHRs在脑、肝、心、头肾、肾、肠、脾、肌肉各组织中均有表达,但表达量差异明显,其中肌肉组织中4个基因表达量均最高,脑中4个基因的表达水平相当,其余各组织中jlGHR2b的表达量均最高。从多转录子和较低表达量推测jlGHR2a所受的选择压力低于jlGHR2b。鲤鱼基因组内分离到GHR1、GHR2的两个旁系同源基因在功能基因方面证实了鲤鱼体内存在两套基因,表明鲤鱼是研究同源基因变异分化的好材料,也为今后正确查找jlGHRs基因上的SNP位点奠定了基础。

斑马鱼hoxb7a基因在hox基因簇中的作用研究

斑马鱼hoxb7a基因是hox基因家族在进化过程中第7旁系同源组中仅存的基因。为了研究hoxb7a基因在整个hox基因簇中的作用,利用CRISPR/Cas9技术对斑马鱼hoxb7a基因进行编辑,T7E1结果显示F0敲除效率平均为43%,并在F2成功获得缺失8个碱基(Δ8bp)和缺失23个碱基(Δ23bp)的hoxb7a纯合突变体。进而利用实时荧光定量PCR技术检测48hpf野生型和hoxb7a突变体中旁系同源hox基因的表达量变化,QPCR结果显示,hoxb7a缺失后hox基因簇中相邻的hox基因表达量显著性升高(P<0.001),而基因组上距离hoxb7a较远的hox基因表达量未出现明显变化(P>0.05)。研究表明hoxb7a基因在整个hox基因簇中发挥重要调控作用,通过阐述hoxb7a的作用加深了对hox基因簇加倍后基因功能分化的认识。同时斑马鱼hoxb7a突变体的成功构建,为其基因功能机制的研究奠定了坚实基础。

甘蓝型油菜HMG基因家族的生物信息学分析

为研究甘蓝型油菜HMG(high mobility group)基因家族的起源、进化和功能,利用生物信息学方法对甘蓝型油菜和其近缘物种HMG基因家族进行鉴定,并对其进化、基因结构、组织表达、直系旁系同源基因进行系统分析。在甘蓝型油菜中鉴定到45个HMG家族成员,并根据进化树和基因结构将其分成5组。染色体定位发现,19条染色体中有18条染色体有HMG基因,说明该家族基因分布较广泛。在甘蓝型油菜与甘蓝、白菜和拟南芥分别鉴定到45、47和26个直系同源基因对。在甘蓝型油菜中鉴定到28个旁系同源基因对,而在其它3个物种中则比较少,这可能与甘蓝型油菜的多次基因组加倍有关。对45个甘蓝型油菜BnHMG基因在根和叶中的表达模式进行分析,结果显示,大多数基因在根和叶中均有表达,且呈现出不同的表达模式。

sCTLA-4、RAD51C蛋白对宫颈癌患者介入治疗术后复发的预测价值

目的分析可溶性细胞毒T淋巴细胞相关抗原4(sCTLA-4)、RAD51旁系同源基因C(RAD51C)蛋白对宫颈癌患者介入治疗术后复发的预测价值。方法选取2015年5月至2019年4月河南省人民医院宫颈癌患者107例为观察组,均经介入手术治疗,统计术后复发情况,另选取同期良性宫颈疾病患者107例为对照组。比较观察组、对照组及是否复发患者sCTLA-4、RAD51C蛋白表达,采用Logistic回归分析宫颈癌患者术后复发的影响因素,构建宫颈癌患者术后复发的列线图模型并采用校准曲线验证,绘制决策曲线分析sCTLA-4、RAD51C蛋白预测宫颈癌患者术后复发的价值,并统计不同sCTLA-4、RAD51C蛋白表达患者的复发率。结果观察组sCTLA-4水平、RAD51C蛋白高表达率高于对照组(P<0.05);高危型人乳头瘤病毒阳性、脉管浸润、间质浸润≥1/2、宫旁浸润、RAD51C蛋白高表达及sCTLA-4高水平是宫颈癌患者术后复发的独立危险因素(P<0.05);高危型人乳头瘤病毒、脉管浸润、间质浸润、宫旁浸润、RAD51C蛋白及sCTLA-4水平构建宫颈癌患者术后复发的列线图预测模型,一致性指数分别为0.610(95%CI为0.511~0.702)、0.616(95%CI为0.517~0.708)、0.640(95%CI为0.541~0.730)、0.609(95%CI为0.510~0.702)、0.728(95%CI为0.633~0.809)、0.817(95%CI为0.731~0.885),且校准曲线验证显示具有较高一致性,sCTLA-4、RAD51C蛋白联合检测的净受益率大于单独检测。结论宫颈癌患者sCTLA-4、RAD51C蛋白均呈高表达,且二者同时高表达表明宫颈癌患者术后复发风险较高,临床可通过检测sCTLA-4、RAD51C蛋白表达情况筛选高复发风险患者并及早进行干预,以降低复发率。