电离辐射对大鼠下颌下腺旁细胞途径分泌的影响

目的探讨电离辐射引起的紧密连接(TJ)蛋白claudin-4的改变及其对大鼠下颌下腺旁细胞分泌功能的影响。方法将24只Wistar大鼠随机分为对照组和照射组,照射组又分为照射后1、4、12周组,照射组一次性给予20Gy射线局部照射实验侧下颌下腺区。照射后1、4及12周,用Schirmer实验检测分泌量;苏木精-伊红(HE)染色观察腺体组织病理变化;透射电镜观察TJ超微结构;免疫荧光染色和蛋白质印迹(Westernblot)检测毒蕈碱型乙酰胆碱受体(M受体)亚型M3、水通道蛋白5(AQP5)及claudin-4的蛋白表达。结果电离辐射后1、4、12周,腺体分泌量逐渐降低(P<0.01);1周时腺体组织以间质水肿为主,随时间进行出现核固缩,腺泡细胞数目减少,小灶性腺体坏死伴炎症浸润,12周时最明显;照射组腺体不同时期TJ超微结构表现为模糊、崩塌、电子密度降低,TJ宽度显著减少(P<0.01);M3及AQP5表达随时间依赖性下调,荧光强度在照射后明显减弱,而claudin-4表达及荧光强度则表现为不同程度增强。结论下颌下腺照射后TJ结构改变,claudin-4表达上调,旁细胞水分泌途径损伤参与了下颌下腺电离辐射后分泌低下。

电离辐射对大鼠腮腺旁细胞分泌途径损伤及紧密连接蛋白claudin-4的影响

目的:探讨电离辐射对大鼠腮腺旁细胞分泌功能损伤及紧密连接(tight junction,TJ)蛋白claudin-4的影响与潜在作用机制。方法:24只8周龄雄性Wistar大鼠,随机分为对照组(6只)和照射组(照射后1周组、4周组、12周组,每组6只)。照射组一次性20 Gy射线局部照射实验侧腮腺区。采用Schirmer实验,检测各组腺体唾液静息分泌量;H-E染色,光镜下观察腺体组织病理变化;透射电镜观察TJ超微结构改变;免疫荧光染色和蛋白质印迹检测毒蕈碱型乙酰胆碱受体(M受体)亚型M3、水通道蛋白5(AQP5)及claudin-4的蛋白表达。采用SPSS 23.0软件包对数据进行统计学分析。结果:照射后1、4、12周,腺体静息分泌量较对照组显著减少(P<0.05);12周较1周、4周时减少更显著(P<0.05)。组织学观察可见,照射后腺体早期间质血管扩张、充血,后期腺泡细胞计数显著减少(P<0.05);TJ结构模糊、电子密度降低、宽度减少(P<0.05)。免疫荧光染色和蛋白质印迹检测结果显示,M3受体及AQP5蛋白在照射后1、4、12周表达显著下调,而claudin-4蛋白表达显著升高。结论:电离辐射后腮腺旁细胞分泌功能降低,TJ结构改变,claudin-4表达上调,可能参与腺体分泌功能损伤。

辣椒素对P-糖蛋白和细胞旁途经转运透过的作用

目的通过研究P-糖蛋白(P-gp)底物罗丹明123(R123)在空肠、回肠和结肠转运时辣椒素的作用,探究辣椒素对肠粘膜上P-gp功能的影响。方法使用体外扩散池法技术,分别取SD雄性大鼠的空肠、回肠和结肠肠段标本,计算各肠段中吸收方向(mucosa to serosa,M-S)和分泌方向(serosa to mucosa,S-M)R123的表观渗透速率(Papp)。用荧光分光光度计测定R123和荧光素钠(CF)在接收室中的浓度。结果在辣椒素作用下,R123经空肠粘膜透过时,吸收方向与空白组相比显著增高,分泌方向显著降低,但其在回肠及结肠M-S组及S-M组表观渗透系数Papp与空白组相比均没有显著性差异。CF经空肠粘膜透过时,MS组及S-M组Papp与空白组相比均显著增高;经回肠和结肠粘膜透过与空白组相比没有显著性差异。结论辣椒素影响P-gp底物R123和细胞旁转运药物CF经肠粘膜透过的作用具有肠段差异性,对R123和CF的影响仅存在于空肠,表明辣椒素是一种较弱的P-gp抑制剂和粘膜通道改善剂。可能与P-gp和紧密连接在肠粘膜上的逐渐变化的分布有关。

三细胞紧密连接蛋白tricellulin表达与功能调控的研究进展

紧密连接(tight junction,TJ)是由多个蛋白构成的大分子复合物,广泛分布在所有上皮细胞和内皮细胞的顶侧膜区域。TJ通过调节水、离子和大、小分子物质经旁细胞途径的转运以及限制细胞膜脂质和蛋白的自由流动,发挥着重要的屏障和栅栏功能。狭义的TJ复合物主要包括跨膜蛋白,如密封蛋白(claudin)家族、闭合蛋白(occludin)和连接黏附分子(junctional adhesion molecules,JAMs)等,以及胞浆蛋白,如闭锁小带蛋白(zonula occludens,ZO)和扣带素(cingulin)等[1];广义的TJ复合物还包括与调控TJ相关的信号调控蛋白,如G蛋白、非典型蛋白激酶C(atypical protein kinase C)和蛋白磷酸酶(protein phosphatase)等,以及转录因子,如激活蛋白1(activator protein-1,AP-1)和ZO-1相关核酸结合蛋白(ZO-1-associated nucleic acid-binding protein,ZONAB)等。tricellulin是第一个被发现的主要表达在三个相邻细胞接头处的TJ跨膜蛋白。

紧密连接蛋白claudin-10功能的研究进展

Claudin-10是紧密连接跨膜蛋白claudin家族的一员,在多个器官和组织的上皮细胞中表达,存在claudin-10a与10b两种同工型。Claudin-10具有维持细胞膜选择透过性和调节离子经旁细胞途径转运的作用。近年来,claudin-10已被报道与多种疾病的发生发展过程相关。Claudin-10基因突变导致的多种器官功能受损的疾病被命名为HELIX综合征,患者具有无汗症、肾病、低钾血症、口干症及严重的牙釉质磨损等临床表现。本文将对claudin-10的分子结构、表达与分布、功能与疾病关系等方面的研究进展进行综述。

放射后炎症反应对大鼠颌下腺紧密连接蛋白的影响

目的:观察颌下腺放射后炎症反应导致的紧密连接(TJ)蛋白改变及对旁细胞途径的影响。方法:24只大鼠随机分为对照组及放射1、6、12周组。对照组未照射,放射组右侧颌下腺接受20 Gy照射,特定时间点检测5 min唾液分泌量。苏木精-伊红(HE)染色观察颌下腺组织形态;免疫组织化学(IHC)染色观察肿瘤坏死因子(TNF)-α阳性表达;Western blot及免疫荧光(IF)染色观察claudin-1、claudin-3及水通道蛋白5(AQP5)水平及分布,实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测mRNA表达;酶联免疫吸附剂测定(ELISA)检测TNF-α、白细胞介素(IL)-1β及IL-6水平。结果:放射后唾液分泌量降低;组织间质水肿增宽、脱颗粒改变、空泡化及炎症细胞浸润持续加重;炎症因子水平增加;claudin-1、claudin-3和AQP5蛋白水平及mRNA表达量异常,荧光染色强度减弱。结论:放射后炎症反应可能是颌下腺紧密连接蛋白异常,旁细胞途径破坏的重要影响因素。

促炎因子调控紧密连接的研究进展

紧密连接存在于所有上皮或内皮细胞间连接的最顶端,是物质经过旁细胞途径进行物质转运的结构基础,具有"屏障"和"栅栏"的作用。在炎症及免疫因素介导的多种疾病中,如炎症性肠病、囊肿性纤维化、舍格伦综合征和神经系统炎症等,患者血清及疾病累及的上皮或内皮组织均出现多种促炎因子含量升高。促炎因子作用于相关的上皮或内皮组织,通过影响紧密连接蛋白的表达、结构和功能从而调控上皮或内皮的旁细胞途径通透性,是炎症性疾病的一个重要的发病机制。本文重点综述了促炎因子对肠道、呼吸道、唾液腺上皮以及脑微血管内皮紧密连接的调控及其相关分子机制。

上皮细胞间紧密连接功能的研究进展

紧密连接(tight junction,TJ)广泛存在于所有上皮或内皮细胞间连接的最顶端,是物质经旁细胞途径转运的结构和功能基础。TJ是由跨膜蛋白和胞浆蛋白两大类构成的大分子复合物,主要行使"屏障"和"栅栏"功能,前者可对物质的大小和电荷进行选择,进而调控旁细胞途径的物质转运;后者则通过调控顶膜和基底侧膜两个功能区之间的脂质和蛋白等物质的自由弥散形成高度极性化的细胞。近年来,关于TJ在各种上皮细胞中的作用及调控机制的研究日益增多。本文重点综述了上皮细胞间TJ研究的最新进展,包括TJ的构成、结构和功能检测以及调控机制,并以几类研究比较集中的上皮类型为例介绍TJ研究的现状,这将为防治与TJ改变相关的上皮屏障功能障碍性疾病提供新的思路。