无创产前诊断在胎儿单基因病中的诊断价值初探

目的初步探讨无创产前诊断在胎儿单基因病中的诊断价值。方法通过基于目标序列捕获技术的高通量测序方法检测8例可能孕有单基因病胎儿并决定引产的孕妇外周血进行基因测序,以引产胎儿绒毛组织基因检测的结果为诊断的金标准。结果8例孕妇均行外周血胎儿游离DNA高通量基因测序,结果提示:病例1检测出COL1A2基因发生c.2962G>T突变,为胎儿成骨发育不全;病例4和7检测到FGFR3基因发生c.742C>T突变,为致死性侏儒;其余病例未检测到明显致病性突变,引产后发现胎儿存在不同程度的宫内生长受限。与引产绒毛组织基因检测结果比对证实,符合率100%。结论无创产前诊断检测可在产前明确胎儿异常的病因方面发挥作用,为患者提供准确的遗传咨询及下一次妊娠指导。

大规模并行基因组测序技术应用于无创产前诊断染色体非整倍体的研究

目的利用大规模并行基因组测序技术检测孕妇外周血浆中的游离DNA,行胎儿染色体非整倍体的无创产前诊断。方法选择2009年1月到2010年7月在深圳市人民医院产前诊断中心就诊,孕龄在8～30周之间高龄妊娠、唐氏综合征生化筛查高风险和(或)彩超显示胎儿异常等同意介入产前诊断的孕妇941例,抽取孕妇外周静脉血,提取血浆DNA,制备测序文库,应用Illumina HiSeq2000高通量基因测序仪检测,测得的基因序列与人类的参考基因组比对并作统计分析。同时采集胎儿羊水或脐血,经细胞培养后行羊水或脐血细胞染色体核型分析确定染色体非整倍体。结果①941例孕妇血浆样本处理后经大规模并行基因组测序技术检测判定胎儿为唐氏综合征高风险共27例,非唐氏综合征914例;以羊水或脐血染色体核型分析的结果为金标准进行结果对照,检测出的27例唐氏综合征高风险中2例误诊,其中一例核型为47,XXY,一例核型分析正常。经统计分析胎儿唐氏综合征的检出率为100%,检出正确率99.78%,误诊率0.22%;②941例样本中,检出18-三体高风险14例,18-三体低风险927例。与染色体核型分析相比,统计分析显示无创产前基因检测18-三体胎儿的检出率为93.33%(14/15),漏诊率为6.67%(1/15)、误诊率为0。结论利用大规模并行基因组测序技术检测孕妇外周血浆中的游离DNA行无创产前诊断胎儿染色体非整倍体,其敏感性、特异性与染色体核型分析技术具有较高的一致性。该技术具有无创性、高准确性、高通量等优势,具有临床实际应用价值。

无创产前诊断单基因遗传病的研究进展

基于母体血浆中胎儿游离DNA(cffDNA)无创产前诊断(NIPD)某些单基因遗传病已用于临床,而且检测病种越来越多。NIPD为高危妊娠夫妇提供了更安全的检测方法,避免了有创产前诊断带来的流产、死胎等风险。在一些国家已经应用NIPD方法诊断一些单基因遗传病,而且不需要通过有创产前诊断进行验证。本文主要对NIPD的研究进展及其面临的挑战做一综述。

第二代测序技术与无创产前诊断

孕妇外周血中胎儿游离DNA(cell free fetal DNA,cffDNA)的发现开辟了无创产前诊断的新篇章,借助各种分子诊断技术针对cffDNA进行胎儿染色体疾病、遗传性疾病以妊娠相关疾病的研究迅速成为热点。以高通量、自动化为显著特征的第二代测序(next-generation sequencing,NGS)技术诞生,极大加速了cffDNA的实验室研究进展。目前基于NGS平台,建立的胎儿21/18/13三体综合征的产前基因诊断技术已应用于临床,其他如性染色体非整倍体、双胎妊娠染色体非整倍体、胎儿染色体结构异常疾病以及孟德尔单基因遗传病的研究也因NGS的出现获得了显著的进步。本文就NGS的基本原理、cffDNA的生理特性及NGS在无创产前诊断研究中的进展进行综述。

加强健康宣教对孕妇无创产前诊断认知率的影响

选取就诊的140例孕妇,随机分为观察组和对照组各70例。对照组采用常规护理措施,并不进行针对性宣教,观察组则加强关于无创产前诊断重要性的一对一护理宣教,对比两组干预前后的无创产前诊断认知情况及两组对无创产前诊断的接受情况。干预前两组对于无创产前诊断的认知达标率对比无显著差异(P>0.05),干预后观察组的认知达标率为87.14%,显著高于对照组的37.14%,差异具有统计学意义(P<0.05);观察组无创产前诊断实施率为84.29%,显著高于对照组的31.43%,差异具有统计学意义(P<0.05)。孕妇对于无创产前诊断的认知程度较低,通过加强健康宣教等措施能够有效提高孕妇对于无创产前诊断的认知程度,提高无创产前诊断实施率,能够有效减少先天缺陷儿的出生率。

孕妇血中胎儿微小RNA等核酸在唐氏综合征无创产前诊断中的应用

唐氏综合征是最常见的染色体非整倍体遗传病,出生干预是预防该病的有效措施。传统的产前诊断具有创伤等缺陷,无创产前诊断是未来发展的需求。孕妇血胎儿细胞、胎儿游离DNA、胎儿游离RNA及胎儿游离microRNA的分析是新近发展的4种唐氏综合征无创产前诊断技术。母血胎儿游离miRNA有足够的稳定性、特异性和准确性,是最具临床应用价值的生物标志物。

应用母血中胎儿游离DNA进行无创产前诊断的研究进展

有创性产前诊断是诊断染色体病的金标准,但是不能广泛应用于所有孕妇;孕妇血中胎儿游离DNA的发现为无创性产前诊断提供了广阔前景,借助大规模并行基因组测序技术,建立起无创产前诊断染色体非整倍体的新方法。就胎儿游离DNA的来源、应用胎儿游离DNA进行非整倍体和基因产前诊断进行综述。

基于父源差异SNP位点的等位基因特异性实时荧光PCR方法建立及其在α^0-地中海贫血无创产前诊断中的应用

目的建立并评价1种纯合α0-地中海贫血排除性无创产前诊断的等位基因特异性实时荧光PCR技术(AS-qPCR)。方法用PCR微测序技术,检测SEA高风险夫妇基因缺失区内9个SNP以确定双亲差异位点;然后以AS-qPCR技术检测孕妇血浆中父源差异SNP位点,判断父方是否将正常单倍型遗传给胎儿。结果 167个家系中,160个家系找到1个或多个有双亲差异的SNP位点,检测率为98.16%;94例检测到父源性正常等位基因SNP而免于创伤性产前诊断,检出率57.67%;所有家系的绒毛或羊水基因检测结果与本方法的符合率为100%。结论采用AS-qPCR检测孕妇血浆游离DNA中双亲差异SNP位点的方法,在孕早期即可进行纯合α0-地中海贫血的排除性无创产前诊断,可使约50%高风险孕产妇免于创伤性产前诊断。

无创产前诊断在胎儿染色体结构异常中的研究进展

一直以来,人们致力于开发一种早期、安全、准确的产前筛查方法以排查胎儿染色体异常,降低新生儿出生缺陷率。传统的介入性产前诊断方法有0.5%~1%的流产风险。因此,人们开始寻找一种准确又无创的产前诊断途径。研究至今,在孕妇外周血中发现了胎儿有核红细胞、胎儿游离DNA、胎儿游离RNA等新兴的研究物质,为非介入性产前诊断提供可能,

用于无创产前诊断的SRY基因高灵敏高特异检测方法研究

通过检测母体外周血中胎儿游离DNA(cffDNA)的SRY基因,确定胎儿性别,可评估胎儿性连锁遗传病的发病风险,降低病儿出生率。本研究建立了高灵敏、高特异、闭管检测不易污染的实时荧光PCR偶联核酸侵入反应方法用于SRY基因的检测。通过优化反应体系中的检测探针浓度、FEN1酶用量、Taq酶用量及预扩增退火温度,确定了最佳的反应条件,即检测探针浓度为250 nmol/L、FEN1酶用量为7.5 U、Taq酶用量为0.5 U、预扩增退火温度为67℃。在最佳反应条件下,实现对含量低至4‰(4 copies/μL)的模拟样本的检测,并成功检测两例孕期分别为9周和10周的临床实际样本。结果表明,所建立的方法可用于母体外周血cffDNA的SRY基因检测,为临床开展基于SRY基因的无创产前诊断提供了新方法。

胎儿有核红细胞用于无创产前诊断的研究现状

胎儿有核红细胞可作为产前诊断、胎儿缺氧、妊娠合并症及新生儿疾病的检测指标。本文对胎儿有核红细胞的来源、作为无创产前诊断的优点、几种可识别的标识、作为无创产前诊断研究现状以及与妊娠合并症的相关性进行综述,为进一步指导临床诊断提供新思路。

地中海贫血无创产前诊断策略新进展

地中海贫血是中国南方地区高发的单基因遗传病,携带率、发病率高,目前无根治手段,对患儿家庭带来沉重负担,目前首要预防措施是借助有创产前诊断方法取得胎儿组织并进行分子诊断,预防重型地中海贫血患儿出生。但羊水穿刺、绒毛活检等方法具有损伤胎儿风险,时间窗较窄。而无创产前诊断方法使用孕妇血浆游离DNA检测具有早期、精准、快速、无创、痛苦小等优势。随着无创产前检测技术应用于临床,单基因病无创产前诊断对于地中海贫血的防控具有重要意义。高通量测序是目前重要的无创产前检测技术平台,而数字PCR同为高通量的数字化定量工具,成本更加低廉,基于两种平台产生的诊断策略,对于多种单基因遗传病的无创产前诊断有启示意义。本文主要介绍高通量测序及数字PCR两种数字化定量平台及其相关无创产前诊断策略进展。

α-地中海贫血无创产前诊断研究进展

α-地中海贫血是我国南部常见的单基因遗传病,其中以--SEA缺失型携带率最高,纯合的--SEA可致严重的胎儿贫血,可发生宫内死亡或在出生后24小时内死亡,重型地中海贫血尚无有效的治疗方法。目前常依赖有创产前诊断方法明确胎儿基因型,从而避免患病胎儿出生,而羊水穿刺、绒毛活检等有创方法有一定的流产及宫内感染风险,迫切需要一种无创、安全、快速的产前诊断方法。随着孕妇血浆中胎儿游离DNA(cffDNA)的发现,无创产前诊断方法得以实现,并已应用于胎儿非整倍体及多种单基因遗传病的诊断中。本文主要综述α-地中海贫血的无创产前诊断的平台发展。

无创产前诊断胎儿常见染色体非整倍体异常的临床探讨

目的研究分析无创产前诊断胎儿常见染色体非整体异常的临床检查。方法选择2014年4月至2015年4月在我院进行治疗的400例孕妇,均进行无创产前诊断。结果无创产前基本检查400例患者中,结果阳性者12例(3.0%),包括21三体综合征者4例,18三体综合征者2例,13三体综合征者1例,性染色体异常者3例,其他染色体异常者2例;结果阴性者388例(97.0%)。结论无创产前诊断胎儿常见染色体非整体异常可有效降低患儿出生率,可作为一种安全、快捷、易接受的产前诊断方法。

无创产前诊断单基因病的研究策略及进展

发现母体外周血游离胎儿DNA已20年,无创产前诊断领域取得了重大突破,改变了现有的产前筛查模式。无创产前诊断单基因病已得到越来越多的关注及研究。一些单基因遗传病的无创产前诊断已经应用于临床实践,其他常见单基因遗传病无创产前诊断也得到了发展。本文针对目前无创性产前诊断常见单基因病的思路、研究现状及进展进行综述。

母体外周血胎儿有核红细胞及其在无创产前诊断中的应用

母体外周血中存在来源于胎儿的具有完整细胞核的红细胞,即胎儿有核红细胞(fetal nucleated red blood cells,FNRBCs).FNRBCs在整个妊娠期内持续存在于母体血液循环之中,具有全套的胎儿遗传物质、细胞器、各类生物分子以及代谢物等,包含丰富的胎儿生理信息,同时还表达多种特异性蛋白,是用于无创式产前检测/诊断的理想分析靶标.然而,孕妇外周血中存在数量巨大的红细胞(~10~9个/mL)和白细胞(~10~6个/mL),FNRBCs则十分稀少(<10^(3)个/mL).在完成母体静脉采血后,如何高效率高纯度分离富集血样中的FNRBCs、确定其胎儿源性并开展面向临床的生化分析极具挑战.本文从实施无创产前检测/诊断的重要意义出发,对母体外周血FNRBCs这一潜力巨大的无创产前检测/诊断标志物进行综述,在介绍FNRBCs来源及特征的基础上,总结FNRBCs分离富集与鉴定分析技术的发展现状,并阐述FNRBCs的临床应用、当前面临的挑战以及今后的发展方向,旨在为相关研究和临床转化提供参考.

母血游离胎儿DNA检测在染色体非整倍体无创产前诊断的应用

目的探讨孕妇外周血中游离胎儿DNA检测在染色体非整倍体无创产前诊断意义。方法选取2013年在该院接受外周血游离胎儿DNA检测孕妇1 248例,根据孕妇年龄和血清学筛查结果分为3组,其中高危组548例,高龄组414例,其他原因组286例,对所有孕妇进行外周血游离胎儿DNA检测,检查结果阳性者建议进一步行羊水染色体核型分析,阴性者则电话随访胎儿出生情况。结果 1 248例孕妇完成游离胎儿DNA检测,结果异常者22例,占1.76%,其中唐筛高危组孕妇检出21-三体4例,18-三体2例,性染色体异常4例,异常率为1.83%;高龄组孕妇检出21-三体3例,18-三体1例,13-三体2例,性染色体异常3例,异常率为2.17%;其他原因组孕妇检出21-三体1例,18-三体1例,性染色体异常1例,异常率为1.05%,3组异常率差异无统计学意义(P>0.05);8例21-三体检测阳性者经核型分析,均为47,XN,+21,4例18-三体检测阳性者核型为47,XN,+18,2例13-三体检测阳性者核型为47,XN,+13,上述游离胎儿DNA检测结果与羊水染色体核型分析结果符合率为100.00%,8例性染色体异常者,经核型分析,其中1例为45,X,1例为47,XXY,3例为47,XXX,有3例误诊,符合率为62.50%;外周血游离胎儿DNA检测诊断胎儿非整倍体异常的灵敏度为100.00%(19/19),特异度为99.76%(1 226/1 229)。结论母体血浆游离胎儿DNA检测在筛查胎儿染色体异常方面有重要价值,但仍有待进一步研究。

微滴式数字PCR技术在两个单基因遗传病家系无创产前诊断中的应用

目的探讨微滴式数字PCR（droplet digital PCR，ddPCR）技术在单基因遗传病无创产前诊断中的应用。方法应用ddPCR技术对母体外周血中胎儿游离核酸、羊水DNA进行父源性致病基因位点检测，应用Sanger测序技术对羊水DNA进行父源性致病基因位点确认。结果ddPCR技术对孕妇外周血游离核酸检测结果与羊水DNASanger测序结果一致，显示两家系胎儿均携带父源性致病基因突变位点。结论ddPCR技术可对微量样本进行准确、灵敏、稳定的定性分析，检测孕妇外周血中胎儿游离核酸，为父源性单基因遗传病产前诊断提供了有效、快捷、安全的检测方法。

血浆/血清游离核酸与无创性产前诊断

循环核酸包括循环DNA和RNA,是近年发现的一类新的血清/血浆分子生物标志物。循环核酸的发现、研究开创了无创性产前诊断的新领域。本文主要阐述了母体血浆中胎儿游离核酸的生物学特性及其在产前胎儿性别鉴定和RHD血型分型、孟德尔疾病、异倍体检测、妊娠合并症方面的应用。

孕妇外周血胎儿基因检测在无创性产前诊断中的应用

目的探讨孕中期孕妇外周血胎儿基因检测在无创性产前诊断胎儿染色体非整倍体中的应用。方法选取进行孕妇外周血胎儿DNA检测的孕妇1 182例,孕周12～24周,检测的指征为高龄、唐氏筛查高风险、有不良妊娠史、孕期B超提示胎儿异常等。检测方法是通过采集孕妇外周血,提取胎儿游离DNA,PCR扩增后采用新一代高通量测序技术,得出胎儿患染色体非整倍性疾病(如21-三体、18-三体、13-三体综合征)的风险率。检测高风险者行羊水穿刺进行胎儿染色体分析。结果无创性母血胎儿基因检测高风险者9例,其中21-三体5例,18-三体4例,与羊水细胞培养染色体核型分析结果符合,诊断准确率100%。结论孕中期无创性母血胎儿基因检测胎儿染色体非整倍体是一种准确可靠的产前诊断方法。