根癌农杆菌介导脂肪酶在无孢黑曲霉中的高效表达

黑曲霉(Aspergillus niger)具有高效的蛋白表达和分泌能力.为实现异源蛋白在无孢黑曲霉中的高效重组表达,在优化遗传筛选标记的基础上,建立了根癌农杆菌介导的、以潮霉素抗性基因为筛选标记的黑曲霉转化体系.利用该体系介导米黑根毛霉脂肪酶(RML)转化黑曲霉SH-1,通过PCR鉴定、酶活检测、镍柱亲和层析及SDS-PAGE电泳检测等确定成功获得了RML的黑曲霉转化子,并通过发酵条件优化实现了RML的高效表达,对硝基苯酚比色法测得转化子酶活最高可达15 U/mL,是其在酵母中表达水平的10倍以上.

无孢平菇03菌株生理指标的测定

无孢平菇03(Pleurofus floridasporele)是从沈阳市农科所引进,1988年6月通过市科委鉴定的无孢平菇新品系。为加深了解无孢平菇的生理特性,我们对其不同生长时期酯酶同工酶、过氧化物同工酶以及呼吸强度进行了测定,以期对无孢平菇的深入研究有所帮助。

无孢灵芝菌丝生物学特性研究

了解无孢灵芝菌丝生物学特性,以期为人工栽培提供依据。在不同温度、湿度、pH、碳源和氮源条件下对无孢灵芝菌丝生长的影响进行对比试验。无孢灵芝菌丝生长的适宜温度为25℃~30℃,适宜湿度为62%~63%,适宜pH为6.0~6.5,最佳碳源为麦芽糖,最佳氮源为蛋白胨。

两种无孢灵芝子实体醇提物的比较

以龙芝2号和鹿角灵芝两种无孢灵芝(Ganoderma lingzhi)子实体为原料,95%乙醇超声提取,对醇提物中的三萜进行了分析和体外抗肿瘤实验。结果表明,两种样品的醇提物得率分别为1.8%和3.7%,醇提物中三萜化合物含量分别为0.53%和1.16%;高效液相结果表明,鹿角灵芝中三萜的种类也多于龙芝2号。两种无孢灵芝的醇提物对肿瘤细胞K562和SW620的增殖均有一定的抑制作用,龙芝2号抑制肿瘤增殖的活性优于鹿角灵芝。

无孢霉菌性角膜炎患者的临床特征及治疗转归

目的探讨无孢霉菌性角膜炎患者的临床特征及治疗转归。方法选择2009年3月至2019年3月在山东第一医科大学附属眼科医院诊断为无孢霉菌性角膜炎的患者64例(64眼),对患者的临床特征、实验室检查、治疗方法和转归进行分析。结果64例(64眼)中,15例(23.4%)为中浅基质层溃疡和浸润,20例(31.3%)为深基质层溃疡和浸润,29例(45.3%)为深基质层溃疡和全层浸润。26例(40.6%)伴有前房积脓,5例(7.8%)伴有角膜穿孔,所有患者真菌培养均未见孢子生长。9例患者行药物治疗,11例患者接受角膜病灶切除术或结膜瓣遮盖术,17例患者行板层角膜移植术(LKP),24例患者行穿透性角膜移植术(PKP),3例患者行眼内容摘除术。总复发率为23.0%(14/61),其中药物治疗后复发率为22.2%(2/9),LKP后复发率为11.8%(2/17),PKP后复发率为41.7%(10/24),不同治疗方法之间复发率差异有统计学意义(χ2=11.268,P<0.05;因行眼内容摘除术后无复发可能,统计中未计入眼内容摘除术患者),LKP组与PKP组患者复发率差异无统计学意义(P>0.05)。术前合并穿孔的患者复发率为75.0%(3/4),高于无穿孔患者的复发率19.3%(11/57),差异有统计学意义(P<0.05)。前房积脓患者的复发率为30.4%(7/23),高于无前房积脓患者的复发率18.4%(7/38)(P>0.05)。8例患者最终感染无法控制行眼内容摘除术,总治愈率为87.5%。复发患者总体治愈率为64.3%(9/14)。结论无孢霉菌性角膜炎是一种严重的进行性感染性角膜疾病,角膜移植术后复发率高、预后差,应引起临床医师重视。

原生质体紫外线诱变选育无孢高产平菇的研究

本研究对无孢平菇菌株P22原生质体进行紫外线诱变处理,经拮抗试验,孢子印检测,扫描电镜和出菇试验,筛选出一株中低温型、高产、菇形好的无孢平菇突变菌株4-10。品比结果显示,4-10新菌株两年平均生物效率达112％,较出发菌株P22增产19.8％,较对照菌株P51增产22.7％。研究结果表明,原生质体紫外线诱变是一种快速简便且有效的育种方法。

佛罗里达平菇的无孢突变种

平菇是重要的商品菇种.然而其子实体在发育过程中释放出大量孢子,污染菇床和周围的树木,并引起菇农的过敏反应,此外孢子还是传播蘑菇病毒的载体.平菇是由A和B两个不亲和因子控制的四极性品种.肺形侧耳(P.pulmonarius)的无孢子表型被证明与不亲和因子A连锁的隐性基因有关(Ohira,1977,1978).近年来我们获得了佛罗里达平菇(P.florida)的无孢子菌株(Chang等,1985).本文将对佛罗里达无孢菌株的遗传控制和形态特征进行探讨.

紫外线诱变选育无孢高产平菇的研究

紫外线诱变选育无孢高产平菇的研究陈平，汪仁，张士义，张艳君（辽宁省农科院土肥所做生物研究室，沈阳１１０１６１）近年来，随着食用菌学科的深入发展，应用生物工程，进行食用菌的诱变育种，这项新技术在国内外进展很快。平菇是我省食用菌产业的重要商品菇种，然而在...

无孢平菇的 驯化选育

平菇生产具有周期短、见效快、原料广泛、栽培容易、经济效益显著等特点,几年来深受栽培者的欢迎。又由于它品味鲜美、吃法多样、营养丰富、价格适宜,也深受消费者的喜爱。所以,平菇生产发展很快,并且日益向温室发展,以填补晚秋早春蔬菜淡季。

灵芝两个无孢品种中水提物成分分析及免疫活性比较

龙芝2号和鹿角灵芝均为赤芝的栽培品种,且在生长发育过程中均不产生孢子。目前,尚缺乏对两者化学成分和药理活性的系统比较研究。本研究以灵芝两个无孢品种——龙芝2号和鹿角灵芝为原料,研究对比两者子实体水提物成分差异及免疫活性的强弱。采用化学及仪器分析相结合的方法,分析两者水提物中的多糖得率、含量、重均分子量分布特征及核苷、蛋白质、氨基酸含量差异,并研究了灵芝两个无孢品种水提物样品刺激RAW 264.7细胞释放NO活性。结果表明,两者多糖得率及含量差异不大,但龙芝2号中重均分子量分布范围较广,多糖分子量较大,其含有3种多糖,分子量分别为2.021×10~6、1.802×10~6和4.825×10~5,而鹿角灵芝中仅含有1种多糖,分子量为1.589×10~4;两者中含有的核苷种类相似,但各核苷的含量存在差异;鹿角灵芝和龙芝2号中蛋白质含量分别为10.70%和10.32%,两者均不含有组氨酸,蛋氨酸在两者中含量均较高,分别达到2.556%和2.591%。从鹿角灵芝和龙芝2号中得到的水提物样品均具有体外刺激巨噬细胞释放NO的活性。

担子菌孢子缺失菌株相关研究进展

总结了担子菌孢子缺失菌株资源、获取方法及突变原因方面的研究,探讨了孢子缺失菌株的发展前景。

平菇产孢数量遗传特性的初步研究

选用８个平菇品种为亲本进行自交和不完全双列杂交，以８０份材料对平菇产孢数量进行了研究。结果表明：平菇产孢量组合间、亚组合间差异显著，品种遗传上表现为杂合性；个别亚组合产孢量随温度下降而减少；产孢量亲子相关不显著，非加性效应占主导地位；无孢或多孢亲本通过自交或杂交均易产生无孢或少孢后代，但无孢比多孢亲本，自交比杂交可产生更多的无孢组合；

白曲酸性蛋白酶在无孢黑曲SH-2中的克隆表达及酶学性质分析

白曲霉酸性蛋白酶在白酒酿造发酵过程中具有溶解发酵原料的颗粒,促进微生物繁殖,分解蛋白质生成香味物质,降解酵母菌体蛋白等多种功能,可以提高白酒风味,因此被广泛应用于白酒生产中。本研究利用经基因工程改造的低内源蛋白背景的黑曲霉宿主SH-2,表达白曲霉酸性蛋白酶基因pepB。通过PCR技术获得pepB以及表达元件糖化酶启动子PglaA、糖化酶终止子TglaA、乳清酸核苷-5-磷酸脱羧酶标记基因pyrG,在pMD18-T载体基础上,构建了pepB表达载体,通过PEG介导转化法转化无孢黑曲酶SH-2。重组菌株经发酵罐发酵240 h,发酵粗酶液酶活达9722 U/mL,是报道的白曲原始菌株酶活的8.5倍,SDS-PAGE结果显示表达产物分子量约为47 ku。酶学性质分析结果表明,该酸性蛋白酶最适反应温度为35℃,最适pH为4.0,Mn^(2+)、Cu^(2+)对酶活有显著地激活作用。最后,探究了在不同发酵初始pH下重组菌株酶活的变化,结果显示,在pH 4.5~6.5范围内,适当提高发酵初始pH,酸性蛋白酶酶活会提高。以上结果表明,本研究成功构建了一株能胞内高效表达白曲酸性蛋白酶的菌株。

Asporin在食管鳞状细胞癌发生发展中的作用及临床意义

目的探讨无孢蛋白(Asporin)在食管鳞状细胞癌发生发展中的作用及临床意义。方法收集2019年12月⁃2021年11月选取涟水人民医院收治的140例食管鳞状细胞癌患者。随机选取60例新鲜切取的食管鳞状细胞癌(ESCC)组织及癌旁正常组织,利用Western blot、RT⁃PCR技术检测Asporin的蛋白及mRNA表达水平;80例ESCC组织及其相应癌旁组织的石蜡标本,利用免疫组化技术进一步检测Asporin的表达情况;利用卡方检验、Kaplan⁃Meier分析以及COX回归分析验证Asporin的表达与ESCC患者临床病理特征及预后的关系;Transwell侵袭实验研究Asporin沉默后对ESCC细胞株侵袭转移功能的影响;Pearson相关分析评价Asporin与基质金属蛋白酶2(MMP2)之间的相关性。结果Western blot和RT⁃PCR结果显示ESCC的Asporin蛋白和mRNA表达水平明显高于其癌旁正常组织(P<0.05);免疫组化结果显示,Asporin在ESCC组织中的表达明显高于癌旁组织,且Asporin在ESCC的高表达率为65%(52/80);Asporin表达水平与患者的淋巴结转移情况及TNM分期有显著相关性(P<0.05),与其他临床病理特征无显著相关性(P>0.05);Kaplan⁃Meier分析结果表明,高表达Asporin的ESCC患者无病生存期短于低表达ASPN的患者(P<0.01);COX回归分析显示,低表达Asporin的ESCC患者死亡风险低于高表达ASPN的患者,HR=0.106(95%CI:0.024⁃0.469),Asporin是影响ESCC患者预后的独立危险因素(P=0.003);Transwell侵袭实验表明,经siRNA沉默Asporin后,与阴性对照组相比,Asporin敲低组的侵袭能力明显降低;Pearson相关分析显示,Asporin的表达水平与MMP2表达存在中度正相关关系(r=0.61,P<0.01),MMP2在恶性肿瘤侵袭转移过程中起关键作用。结论Asporin可能作为一种癌基因,参与食管鳞状细胞癌的发生发展。

世界茶树病原名录(续)

Deuteromycotina 半知菌亚门 Hyphomycetes 丝孢纲 Agonomycetales 无孢目 Agonomycetaceae 无孢科 Capillaria sp.发菌之一种茎(日本) (Marasmius equicrinis Muell.& Berk.菌的无性世代)

一株产长春新碱内生真菌的初步研究

目的 通过长春花叶内生真菌的分离 ,筛选产生长春新碱的菌株。方法 从长春花叶中分离内生真菌 ,对其发酵提取物进行 TL C和 HPL C分析。结果 从长春花叶中分离筛选到一株无孢菌群菌株 :97CY3。它能产生长春新碱 ,HPL C测定其长春新碱含量约为 0 .2 0 5 μg/ L。结论 长春花内生真菌中 ,有的菌株可产生与宿主所产相同的抗癌物质长春新碱。

喜树产10-羟基喜树碱内生真菌的分离鉴定

采用组织块法从喜树(Camptotheca acuminata Decne.)果实中分离筛选得到13株纯化的内生菌株.经过摇瓶发酵培养后,采用TLC法与HPLC法对其菌丝体提取物进行分析,发现有1株菌株能够产生10-羟基喜树碱(10-hydroxycam ptothecin,HCPT),其10-羟基喜树碱产量为677μg/L,并将该菌株命名为XK001.对菌株XK001菌落、菌丝体和孢子的有无进行观察研究,表明菌株XK001暂属于无孢菌群(Mycelia sterlia).

喜树果内生真菌的分离与鉴定

从喜树(CamptothecaacuminataDecne.)果实中分离、纯化得到5株内生真菌,经初步鉴定,分别属于半知菌亚门的匙孢霉属(MystrosporiumCda.)、鲜壳孢属(ZythiaFr.)及无孢类群(MyceliaSterilia)。其内生真菌经摇瓶培养后,采用薄层层析(TLC)法对其菌丝体提取物进行分析,初步表明WZ001菌株可能产生喜树碱(Camptothecin,CPT)的类似物。