一株无柄灵芝菌(G.resinaceum)LZ02高产漆酶液体培养基的响应面法优化

【目的】采用响应面法优化液体发酵培养基的碳、氮源,提高大型真菌无柄灵芝菌(G.resinaceum)LZ02的漆酶产量。【方法】在MF基础产酶培养基和单因素试验的基础上,以干酪素(A)、麦麸(B)、葡萄糖(C)、酒石酸铵(D)的添加量为4个影响因素,以漆酶酶活为响应值(Y),采用Design-Expert8软件的中心组合设计方法设计响应面试验,研究干酪素、麦麸、葡萄糖、酒石酸铵各自变量及其交互作用对漆酶产量的影响,并建立以漆酶产量为响应值的二次多项式回归数学模型,得到高产漆酶的最佳液体发酵培养基的碳氮源配比。【结果】无柄灵芝菌(G.resinaceum)LZ02产酶培养基4个因素的最佳组合为干酪素含量2.5%、麦麸含量1.5%、葡萄糖含量1.0%和酒石酸铵含量0.6%时,相应响应面二次模型预测漆酶活性最大值为16505U/L,通过3次平行摇瓶发酵试验得到的菌漆酶活性为15 800 U/L,与理论预测值无明显差异。【结论】响应面分析法提供的模型较真实地拟合了实际情况,证明了模型的可靠性。

无柄灵芝菌LZ02高产漆酶条件及部分酶学性质分析

【目的】从采自新疆天山的无柄灵芝菌(G.resinaceum)中筛选获得1株高产漆酶的LZ02菌株,对其产酶条件进行优化,研究部分酶学性质。【方法】采用单因素实验,对其产酶条件优化并研究其酶学特性,采用双向电泳检测酶蛋白。【结果】LZ02菌株产漆酶的最佳碳源为2.5%麦麸+1%葡萄糖,最佳氮源为干酪素;Cu^(2+)、Mg^(2+)、Fe^(2+)、Zn^(2+)和Ca^(2+)的添加对LZ02产漆酶有一定的促进作用,而Co^(2+)具有明显的抑制作用;藜芦醇和愈创木酚抑制产酶并使产酶高峰由第3 d推后至第9 d,添加没食子酸和ABTS对产酶影响不大,单宁酸对产酶有抑制作用。LZ02菌漆酶最适反应温度为60℃,且在80℃仍具有漆酶活性;在40℃,pH 4.0~5.0,酶活性最稳定;最适反应pH为3.0,Mn^(2+)、Zn^(2+)、Cu^(2+)、Ba^(2+)和K^(+)对酶稳定性有一定的促进作用,Co^(2+)、Cd^(2+)、Cr^(2+)和Pb^(2+)对酶的稳定性具有明显的破坏作用;对菌体及发酵液进行了双向电泳检测,测定其等电点为4.1;获得了1个纯化酶蛋白质谱序列,该蛋白与Ganoderma Lucidum来源的Laccase高度同源。【结论】无柄灵芝菌(G.resinaceum)漆酶的合成和分泌受到营养水平、培养条件、生长阶段以及培养基中诱导剂的严格调控,木质素或木质素相关的芳香类化合物、N源和C源也能调节漆酶的合成;漆酶活性对不同种类、不同浓度的金属离子以及诱导剂的响应不尽相同,其具有较复杂的生理功能及调控机制。

赤芝与无柄灵芝担孢子的萌发特性比较

以赤芝Ganoderma lucidum和无柄灵芝Ganoderma resinaceum担孢子为材料,从担孢子采集方法、萌发条件及保藏时间等方面,比较两种担孢子的萌发特性。结果表明,无柄灵芝担孢子在无菌水中培养24 h即可萌发产生芽管,48 h萌发率为6.77%;而赤芝只有早期弹射的新鲜担孢子可以在麦芽汁培养基中萌发,但萌发率仅有1.13%。赤芝担孢子根据形态大小可分为3类,其中可萌发担孢子的平均长为7.38μm,宽为4.46μm,小于成熟担孢子,细胞壁颜色也比成熟担孢子浅。灵芝担孢子萌发时一般在担孢子顶端或脐状处产生一个芽管,极少数两处同时产生芽管。新生菌丝在不适宜继续生长条件下,可进一步形成厚垣孢子;且随着担孢子保藏时间的延长,其萌发率快速降低。

无柄灵芝提取物中营养成分及体外抗氧化活性分析

为进一步探究无柄灵芝提取物中营养成分及其抗氧化能力。本研究以赤芝为对照,先用蒸馏水和55%的乙醇按照一定比例提取获得相应的水提物和醇提物,接着通过苯酚-硫酸法、香草醛-冰醋酸法分别测定4种提取物中的总糖和总三萜含量。再利用L-8900型氨基酸自动分析测定游离氨基酸含量。最后检测4种提取物分别对2,2′-联氨-二-3-基-苯并噻唑-6-磺酸(2,2′-Azinobis-(3-ethylbenzthiazoline-6-sulphonate),ABTS)、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)、羟基自由基的清除能力。结果表明,无柄灵芝与赤芝水提物总糖含量均显著高于相应的醇提物(P<0.05),无柄灵芝醇提物总糖含量为48.77%,赤芝醇提物总糖含量为51.54%,两种灵芝水提取物之间的总糖含量没有显著性差异(P>0.05);无柄灵芝醇提物总三萜含量显著高于其它3种提取物(P<0.05),达25.37 mg/g,但其水提物三萜含量却是最低,仅1.30 mg/g。无柄灵芝水提物中游离必需氨基酸总含量最高,为45.542 mg/g,而赤芝水提物含量最低,为2.381 mg/g。无柄灵芝醇提物对ABTS、DPPH、羟基自由基清除率均最高,分别为54.48%、24.42%、10.32%,说明其抗氧化能力较强。本研究可为无柄灵芝的进一步开发应用提供理论依据。

无柄灵芝醇提物对小鼠睡眠及肠道菌群的影响

旨在探究无柄灵芝醇提物(Ganoderma resinaceum alcohol extract,GRAE)对小鼠睡眠和肠道菌群的影响,分析肠道菌群与睡眠之间的联系。连续灌胃30 d,观察戊巴比妥钠诱导下小鼠的入睡率和睡眠时长,观察巴比妥钠诱导下小鼠的睡眠潜伏期。检测小鼠的血清,采用16S rDNA测序分析GRAE对小鼠肠道菌群丰度的影响。结果表明,GRAE延长戊巴比妥钠诱导下小鼠的睡眠时长,增加戊巴比妥钠阈下剂量催眠下小鼠的入睡率,缩短巴比妥钠诱导下小鼠的睡眠潜伏期,降低小鼠血清中血糖和甘油三脂的含量。16S rDNA结果表明,在门水平上,GRAE增加了拟杆菌门和放线菌门的菌群丰度;在属水平上,GRAE增加双歧杆菌属的菌群丰度,减少乳酸菌属和克雷伯氏菌属的菌群丰度。因此,GRAE能调节肠道菌群的丰度影响小鼠的睡眠质量。

无柄灵芝的鉴定及其在SD大鼠饲粮中应用价值的评估

本试验旨在研究液体培养的无柄灵芝菌液和菌丝对SD大鼠生长性能和营养物质沉积的影响,评估其在饲粮中的应用价值。通过对灵芝菌DNA的ITS序列的分析,对灵芝菌属进行鉴定。选取36只健康的3周龄雄性SD大鼠,随机分成3组:灌喂马铃薯葡萄糖水组(对照组)、灌喂无柄灵芝菌液组(菌液组)和灌喂无柄灵芝菌丝组(菌丝组),每组4个重复,每个重复3只大鼠,按照10 mL/(kg BW·d)连续灌喂4周。结果表明:与对照组相比,菌液组平均日增重显著提高(P<0.10),菌丝组平均日采食量显著降低(P<0.10),菌液组和菌丝组饲料转化率均无显著差异(P>0.10);菌液组和菌丝组器官指数和背最长肌中肌苷酸含量均无显著差异(P>0.05),但菌液组背最长肌中总蛋白以及天冬氨酸、丝氨酸、谷氨酸、甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、蛋氨酸、异亮氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、组氨酸、精氨酸等12种氨基酸的含量显著提高(P<0.05)。综上,灌喂无柄灵芝菌液、菌丝对SD大鼠的生长性能有一定影响,但灌喂无柄灵芝菌液对肌肉中总蛋白、风味氨基酸的沉积具有促进作用。

无柄灵芝子实体的化学成分研究

研究无柄灵芝子实体的化学成分.采用硅胶柱色谱、反相硅胶柱色谱、MCI柱色谱、高效液相色谱等技术进行分离纯化,得到的化合物采用核磁共振技术等手段鉴定结构.从无柄灵芝子实体中分离得到6个化合物,它们分别为:lucidone I(1)、spiroapplanatumine L(2)、spiroapplanatumine M(3)、牛蒡苷(4)、applanatin A(5)和3-羧基吲哚(6),所有化合物均为首次从该真菌中分离得到.

无柄灵芝子实体中的灵芝酸类化合物

对无柄灵芝Ganoderma resinaceum子实体进行了化学成分研究,该大型真菌经过95%乙醇提取后,再使用正相柱色谱、反相柱色谱、MCI柱色谱以及半制备HPLC等技术手段分离得到了13个灵芝酸类化合物.这些化合物的结构通过核磁共振技术(^1H NMR、^13C NMR)得到了鉴定,它们分别为resinacein D(1)、leucocontextin I(2)、ganolucidic acidγa(3)、resinacein R(4)、resinacein O(5)、甲基灵芝酸C(6)、灵芝酸AM1(7)、灵芝酸H(8)、3β,7β-二羟基-11,15,23-三羰基-羊毛甾烷-8,16-二烯-26-羧酸(9)、3β,7β-二羟基-11,15,23-三羰基-羊毛甾烷-8,16-二烯-26-羧酸甲酯(10)、ganoderense A(11)、resinacein J(12)以及3β,7β,15β-三羟基-8,16-二烯-11,23-二羰基-羊毛甾烷-26-羧酸甲酯(13),其中化合物2、3、6、8、9和化合物11为首次从该大型真菌中分离得到.

无柄灵芝遗传多样性的SRAP、ITS、TEF1-α和LSU分析

【目的】研究来自我国不同地区的45株无柄灵芝菌株的遗传多样性。【方法】利用ITS、TEF1-α和LSU多基因分析及SRAP分子标记两种方法,对供试无柄灵芝菌株进行聚类分析和遗传多样性研究。【结果】筛选出8对SRAP引物共扩增出95条条带,其中具有多态性条带79条,平均多态性比例为82.4%,多态性信息含量(PIC)变幅在0.28-0.43,平均为0.38。ITS、TEF1-α和LSU多基因序列分析结果显示,同一地域的部分菌株聚在一起,亲缘关系较近,而地域相隔较远的部分菌株也聚在同一个进化支上,其亲缘关系也很近,这与SRAP聚类分析结果相吻合。【结论】无柄灵芝菌株遗传多样性较为丰富,其遗传相似性与地理分布存在一定的相关性,ITS、TEF1-α、LSU基因及多基因分析更适合无柄灵芝分类鉴定,而SRAP分子标记更适合于无柄灵芝遗传多样性分析。

无柄灵芝中1个新的杂萜类成分

目的对无柄灵芝Ganodermaresinaceum子实体的化学成分进行研究,以期发现新的化合物。方法利用硅胶、MCI-GEL树脂及PR-HPLC等多种色谱技术进行分离纯化,并根据理化性质和波谱数据鉴定化合物的结构。结果从云南瑞丽产无柄灵芝子实体中分离得到4个化合物,分别鉴定为无柄灵芝素F(1)、3β,7β,15β-三羟基-11,23-二酮基-羊毛脂-8,16-二烯-26-羧酸(2)、灵芝酸XL_2(3)和2,3-二氢-4(1H)-喹诺酮(4)。结论其中化合物1为1个新的杂萜类成分,命名为无柄灵芝素F。

无柄灵芝代料栽培基质营养组成与其功能成分累积的关系研究

寻求灵芝高产多糖和三萜的栽培配方,采用常规栽培灵芝的4种培养基配方,栽培无柄灵芝(Ganoderma resinaceum)获得子实体和孢子,硫酸-蒽酮法测定其多糖含量,香草醛-高氯酸法测定其三萜含量。通过多元回归拟合确定灵芝子实体、孢子的多糖和三萜产量与培养基主要营养成分粗蛋白、粗纤维、粗脂肪、可溶性总糖的相关性方程。根据方程计算得到常用原料对功能成分产量的贡献度,结合原料成本,分别对子实体、孢子功能成分产量最高的配方1、配方3进行改良,得到子实体高产功能成分的配方A和孢子高产功能成分的配方B。配方A:玉米粉7%、麦麸7%、玉米芯84%、蔗糖1%、石膏1%,子实体多糖产量123.5 mg、三萜产量122.76 mg,与配方1相当,但成本降低42.29%。配方B:玉米粉5%、麦麸5%、甘蔗渣88%、蔗糖1%、石膏1%,孢子多糖45.83 mg、三萜31.59 mg,与配方3相比分别提高92.88%、96.70%,而成本相当。

海南习用药材无柄灵芝质量标准研究

为建立海南习用药材无柄灵芝的质量标准,依据《中国药典》2015年版中药质量标准研制的要求,对无柄灵芝药材的性状、鉴别、检查、浸出物、灰分、含量测定等项目进行研究。本研究明确了无柄灵芝药材的性状和显微结构特征,建立了专属的薄层鉴别方法;规定无柄灵芝多糖含量不得低于0. 40%、三萜与甾醇含量不得低于0. 40%、水分不得超过18. 0%、总灰分不得超过4. 0%、浸出物不得低于2. 0%,为无柄灵芝药材质量控制及资源开发利用提供科学依据。

我国南方部分灵芝产区栽培品种调查鉴定与分析

应用菌丝间拮抗反应对17个我国南方部分产区的灵芝栽培品种菌株进行分析,应用ITS-RFLP技术和ITS序列聚类进行分类鉴定,采用亲和试验进行鉴定结果验证。结果表明:收集到的17个栽培菌株可以分为3个聚类群,分别为赤芝Ganoderma lucidum菌株11个,紫芝Ganoderma sinense菌株1个,还有5个灵芝菌株属于无柄灵芝Ganoderma resinaceum;不同产区选用的栽培灵芝菌株不尽相同,收集的鹿角灵芝、松杉灵芝其实为赤芝,而开平灵芝、0057等则是无柄灵芝。本研究有助于纠正菌种使用混乱现象。

灵芝研究的进展

灵芝(Ganoderma Lucidum),又称芝草。公元前300年左右的《礼祀·内侧》中立“芝柄”论述,记载有“食所加庶,羞有芝柄”。东汉末年我国最早的药学专著《神农本草经》,将灵芝列为上品,认为可以使人“轻身不老”。近年国内外对灵芝的研究、开发和临床应用非常活跃,作者就其对国内外灵芝的分类、化学成分研究、药理作用和临床应用加以综述。

两种食用菌菌丝体复合材料机械、物理和生物降解特性

制备无柄灵芝(Ganoderma resinaceum)、白蜡多年卧孔菌(Perenniporia fraxinea)菌丝体复合材料,测定其密度、静曲强度、弹性模量、压缩强度、吸水厚度膨胀率和吸水重量增加率,并进行热重分析,测定埋土处理后两种菌丝体复合材料中纤维素、半纤维素和木质素降解率。结果表明:与白蜡多年卧孔菌菌丝体复合材料相比,无柄灵芝菌丝体复合材料的断裂载荷、静曲强度均较高;压缩实验中产生相同形变时,无柄灵芝菌丝体复合材料的压缩强度较大;无柄灵芝菌丝体复合材料的密度较大,2 h吸水厚度膨胀率、24 h吸水重量增加率均较低;在热重分析实验过程中,25~750℃时无柄灵芝菌丝体复合材料的失重率较低。在60 d埋土实验中,与白蜡多年卧孔菌菌丝体复合材料相比,无柄灵芝菌丝体复合材料在不同处理时期的木质素降解率较高;在0~15、15~30、30~45 d时纤维素降解率较低;在0~15、30~45 d时半纤维素降解率较低,在45~60 d时较高;随着处理时间增加,两种菌丝体复合材料的木质素、纤维素、半纤维素累计降解率均增加;无柄灵芝菌丝体复合材料在不同处理时期的木质素累计降解率较高,纤维素和半纤维素累计降解率均较低。研究结果表明,两种菌丝体复合材料具有良好的机械性能、热稳定性和生物降解性,是极具潜力的包装材料泡沫塑料替代品。