基于SPR技术定量检测肾透明细胞癌组织中NHERF3蛋白水平

目的建立基于表面等离子共振(SPR)技术定量检测肾透明细胞癌组织中钠氢交换调控因子NHERF3蛋白水平的方法。方法将抗NHERF3抗体固定在CM5芯片,将重组NHERF3蛋白(0.78-50 nmol/L)和牛血清白蛋白BSA(3.125-100μmol/L)依次注入芯片表面,通过Biacore分析软件计算NHERF3与其抗体的亲和力。将NHERF3蛋白(0.0625-8μg/ml)依次注入高水平固定抗NHERF3抗体的芯片表面,用结合反应值通过非线性回归法建立NHERF3的标准曲线。将NHERF3蛋白稀释至8μg/ml,重复进样50次,检测方法的可重复性。将20对肾癌和癌旁组织蛋白提取液作为分析物,根据反应值计算NHERF3的浓度并比较肾癌和癌旁组织之间的差异。结果抗NHERF3抗体与NHERF3之间可以发生特异性强相互作用(K D=19.7 nmol/L)。该NHERF3定量检测方法的检测限(LOD)和定量限(LOQ)分别为8.12 ng/ml和27.07 ng/ml;50次重复检测的变异系数(CV)为4.25%。肾透明细胞癌组织中NHERF3蛋白的表达水平明显低于癌旁组织[(36.4±54.38)ng/μl vs(155.1±60.47)ng/μl,P<0.001]。结论基于SPR的定量检测方法适用于高通量检测肾透明细胞癌组织中NHERF3的蛋白表达水平。