基于独特型-抗独特型初步建立玉米赤霉烯酮无毒ELISA定量检测技术

目的:初步建立以玉米赤霉烯酮(ZEN)抗独特型单抗替代玉米赤霉烯酮标准品,检测ZEN残留的无毒ELISA定量检测技术。方法:以ZEN-BSA为包被原,ZEN单抗(1G4)为反应抗体,分别以不同浓度的ZEN毒素或ZEN抗独特型单抗1D5(Ab2β-1D5)为竞争物,建立竞争抑制曲线。根据抑制率在20%~80%间,在相同抑制率条件下,ZEN与1D5间浓度对应关系,绘制替代标准曲线及对应的浓度转换方程。以ZEN类似毒素代替ZEN作为竞争抗原,检验方法的特异性;板内、板间试验检验方法的精密度。结果:初步建立了ZEN无毒ELISA定量检测技术,1D5与ZEN毒素之间的替代标准曲线方程为:y=1.2846x1.9310(y为ZEN毒素浓度ng/ml,x为抗独特型抗体浓度(μg/ml)。检出限(IC2 0)为1.041 ng/ml,检测范围为1.041~25.99 ng/ml。方法的批内平均变异系数为3.88%,批间平均变异系数为4.96%。方法特异性好,与ZEN类似毒素几乎无交叉反应。结论:利用ZEN单抗和ZEN抗独特型单抗初步建立了ZEN的无毒ELISA定量检测方法。

抗卵巢抗体ELISA间接检测法的建立与临床应用

抗卵巢抗体ＥＬＩＳＡ间接检测法的建立与临床应用张毅林，黄邱朝，武建国（南京军区南京总医院临床免疫科，南京２１０００２）抗卵巢抗体（ａｎｔｉｏｖａｒｉａｎａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，ＡＯＡｂ）是一种针对卵巢颗粒细胞、卵母细胞和激素生成细胞的自身抗体。目前检测...

清洁级长爪沙鼠病毒抗体ELISA检测法建立

经纯化长爪沙鼠ＩｇＧ免疫家兔后获得的血清用辛酸法纯化抗体，电泳可见只有一条蛋白带。制备得酶标二抗工作浓度为１：２５６００．用间接ＥＬＩＳＡ对开放系统和屏障系统中长爪沙鼠进行淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒（ＬＣＭＶ）、鼠肝炎病毒（ＭＨＶ）和仙台病毒抗体的检测，发现其血清病毒抗体阳性率开放系统为６．０％（４／６７）、２２．４％（１５／６７）和１４．９５（１０／６７），屏障系统为１．３％（１／７９）、１．３％（１／７９）和７．６％（６／７９）．如用酶标蛋白Ａ取代酶标抗长爪沙鼠ＩｇＧ抗体进行检测，则无一份血清阳性。结果表明长爪沙鼠可以自然感染ＬＣＭＶ、ＭＨＶ和仙台病毒或其抗原相关的病毒，酶标蛋白Ａ不宜作为酶标二抗用于长爪沙鼠抗体的检测。

小鼠肺支原体抗体ELISA检测法的建立

目的 建立小鼠肺支原体抗体ELISA检测法。方法 采取与国外试剂盒比较的方法。结果 符合率达 10 0 % ,检测 9个单位送检的 184份普通级小鼠血清 ,肺支原体抗体检出率为 97% ,清洁级小鼠血清 86份 ,3份为阳性 (3.5 % ) ,检测 92份SPF级小鼠血清 ,均为阴性 ,具有特异性强 ,灵敏度高 ,结果判定明确 ,可靠等优点。

荷C3d免疫复合物的ELISA检测法在肝病中的应用

免疫复合物(IC)的形成一般认为是清除抗原和终止免疫反应的过程。在某些病理情况下,IC激活补体并沉积于血管壁、肾小球基底膜以及其它血管外组织中,引起炎症反应和免疫病理损伤。抗原抗体结合形成IC并激活补体时,C1、C2、C4依次活化,C42将C3裂解成为C3a、C3b,I因子再将C3b裂解为C3c、C3f、

大肠杆菌粘附因子K-88抗体ELISA检测法的建立

在已有的试管凝集法检验仔猪腹泻疫苗介导产生抗体效果的基础上,建立了用间接ELISA法检查K-88抗体活性的方法。用K-88抗原包板,羊抗兔酶标二抗检测经猪痢疫苗免疫后的兔血清所产生K-88抗体的情况。结果在一个月内抗体效价达到1∶40。与原有试管凝集试验结果比较,此法灵敏度较高,特异性较好,可快速、准确提供K-88抗体活性数据。

胶体金快速检测法与ELISA法检测HIV抗体效果观察

目的:探讨胶体金快速检测法与ELISA法检测HIV抗体效果观察。方法:选取我院就诊的1200例检测HIV抗体患者,分别通过胶体金快速检测法与ELISA法对其进行初筛和复查,同时以免疫印迹法确诊,比较两种方法阳性率结果。结果:胶体金法复查检出阳性率略高于ELISA法,但无明显差异(χ2=0.61,P>0.05)。结论:实际应用中要注意假阳性和假阴性结果。将胶体金快速检测法和ELISA法联合使用,可以明显降低假阳性和假阴性结果,因为单独使用一种方法确实难以避免假阳性或假阴性。

温度对ELISA检测法的影响

酶联免疫吸附试验（ELISA）检测法具有敏感性高、特异性强、快速等特点，目前广泛应用于乙型肝炎病毒“两对半”、抗艾滋病病毒抗体及梅毒抗体等的检测。但该方法的缺点是干扰因素多，从加样、预温、洗板、显色到比色步骤繁多，其中的每一步控制不好都可能影响检测结果的质量，尤其是酶对温度非常敏感，ELISA检测时的温度控制就显得特别重要。因此，在实际测定操作中一定注意以下几点。

ELISA试剂盒法 值得推广的孔雀石绿、结晶紫类物质检测法

酶联免疫分析法(Enzyme-linked Immunosorbent Assay,ELISA)是将抗原与抗体的特异性免疫反应和酶的高效催化作用有机结合起来的检测技术。具体是将抗原或抗体结合到某固相载体(保持其免疫活性),使受检标本和酶标抗体或抗原与固相载体表面的抗原或抗体起反应,然后洗涤,使固相载体上形成的抗原抗体复合物与其他物质分开。因最后结合在固相载体上的酶量与标本中受检物质的量成一定的比例,所以可根据加入底物后,酶催化反应产生有色物质颜色的深浅进行定性或定量分析。如今,尽管各种新型食品安全检测技术不断涌现,ELISA技术仍因其操作程序的规范化、简单化和检测的高灵敏性,表现出独特的优势,并在药物残留、生物毒素、食品添加剂和人畜共患疾病病原体的快速检测与分析等食品安全检测领域中得到广泛应用。

脱氧雪腐镰刀菌烯醇检测方法比较与分析

目的:比较胶体金快速检测法、ELISA检测法、高效液相色谱检测法各自技术特点和优劣。方法:通过对玉米样品中脱氧雪腐镰刀菌烯醇检测数据的对比分析、试验要求条件对比来诠释胶体金快速检测法、ELISA检测法、高效液相色谱检测法各自技术特点。结果:胶体金快速检测法、ELISA检测法、高效液相色谱检测法对比同一样品检测结果存有差异,样品复测稳定性存有差异。结论:胶体金快速检测法可为高效液相色谱法的检测做前期筛查,ELISA法可以作为大量试验样品前期筛查使用,高效液相色谱法可作为方法比对的基准方法或仲裁方法。

血清抗S100B蛋白自身抗体的检测法及初步应用

目的 建立一种检测血清抗S10 0B蛋白自身抗体的方法 ,探讨抗S10 0B自身抗体对精神及神经系统疾病的意义。方法用间接ELISA检测 112例健康人及 10 1例精神病及神经系统疾病患者血清抗S10 0B自身抗体。结果 建立的ELISA有较高的特异性。批内与批间平均变异系数分别为 5 6 %和 12 1%。抗S10 0B自身抗体阳性率 ,癫痫为 4 6 .6 7% (14 / 30 ) ,多发性硬化为4 5 .83% (11/ 2 4 ) ,帕金森病为 6 3.6 4 % (14 / 2 2 ) ,抑郁症为 4 0 .0 % (12 / 2 5 )。结论 该法可有效地检测抗S10 0B自身抗体 ;某些精神病患者或神经系统疾病患者血清中抗S10

猪肝和猪尿中沙丁胺醇和克伦特罗残留的酶联免疫吸附检测法研究

采用混合酸酐法将沙丁胺醇与牛血清白蛋白偶联,并免疫家兔制备抗沙丁胺醇抗血清。以间接ELISA法测定血清效价,测得抗血清最佳工作浓度为1∶6400,该抗沙丁胺醇抗血清对克伦特罗有110%的交叉反应性。建立了能够同时检测SAL和CL的间接竞争ELISA方法,该方法对沙丁胺醇的检测范围为0148ng/mL～8.0μg/mL,对克伦特罗的检测范围为0143ng/mL～7.3μg/mL,对沙丁胺醇的检测灵敏度为0148ng/mL,对克伦特罗的检测灵敏度为0143ng/mL。在猪肝和猪尿中添加1～50ng/g(ng/mL)的沙丁胺醇,添加回收率为72.2%～8418%,变异系数为4.2%～28.3%,在猪肝脏和猪尿中添加1～50ng/g(ng/mL)的克伦特罗,添加回收率为8413%～103.4%,变异系数为013%～35.5%。

一种猪圆环病毒Ⅱ型ELISA抗体检测试剂盒的临床应用

采用猪圆环病毒2-dCap-ELISA抗体检测试剂盒,对河北、山西两地共441份猪血清样品进行检测。结果显示,河北保定地区349份血清样品中阳性样品为306份,感染率为87.68%;山西地区92份血清样品中阳性样品为77份,感染率为83.7%。与标准的间接免疫荧光检测法进行比较,该ELISA检测试剂盒的诊断敏感性为95.48%(380/398),诊断特异性为93.02%(40/43),总符合率为95.24%。由此表明该试剂盒是一种简便、快速、灵敏、适合于大规模临床应用的猪圆环病毒2型抗体检测试剂盒。

TNF－α的生物活性检测法与酶联免疫吸附法比较

比较了生物活性检测法（ｂｉｏａｓｓｙ，ＢＡ）与酶联免疫吸附法（ＥＬＩＳＡ）对大鼠腹腔巨噬细胞（ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ，Ｍφ）分泌的肿瘤坏死因子－α（ｔｕｍｏｒｎｅｃｒｏｓｉｓｆａｃｔｏｒ－α，ＴＮＦ－α）的检测。在静息Ｍφ培养上清液中，用两种方法均未测到ＴＮＦ－α；而脂多糖（ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ，ＬＰＳ，１００μｇ／Ｌ）刺激组，用两种方法均测到大量ＴＮＦ－α；如ＬＰＳ与秋水仙碱（ｃｏｌｃｈｉｃｉｎｅ，Ｃｏｌ）联用，ＴＮＦ－α的产生受到抑制，ＢＡ法检测显示抑制率为９７％，而ＥＬＩＳＡ检测则显示抑制率为４２％，提示Ｃｏｌ对ＴＮＦ－α生物活性的抑制比对其生物合成的抑制更明显。此外，Ｃｏｌ在浓度≥１０μｍｏｌ／Ｌ时，可部分减轻ＴＮＦ－α对其靶细胞Ｌ９２９的毒性作用。文中对这两种方法的优缺点进行了比较与讨论。

酶联免疫吸附检测法在农药残留检测中的应用

随着农药种类和用量的不断增加,农药的残留对人体的危害以及食品进出口的影响日益严重,因此进行农药残留检测工作非常重要,其中最重要的是建立高效的检测方法。酶联免疫吸附检测法(ELlSA)特异性高、灵敏性强,在农药残留检测中的研究和应用也越来越多,本文综述了其在农药残留检测方面的应用现状、存在问题及建议。