无细胞短棒状杆菌制剂联合瘤内缓释化疗对鼠黑色素瘤的抑制效应

目的探讨无细胞短棒状杆菌制剂(NCPP)联合瘤内缓释化疗对小鼠黑色素瘤的影响。方法给小鼠皮下接种B16肿瘤细胞后建立荷瘤小鼠,随机分成4组,①生理盐水(NS)对照组:瘤内和腹腔注射NS;②缓释治疗组:瘤内注射含Ara-C缓释液;③NCPP治疗组:腹腔注射NCPP;④联合治疗组:腹腔注射NCPP+瘤内注射含Ara-C缓释液。7 d后重复治疗1次,期间观察各组小鼠肿瘤的生长情况;治疗2周处死小鼠,称瘤重量,光镜下观察瘤组织病理变化,采用流式细胞术检测脾内CD4+T细胞、CD8+T细胞数量变化。结果联合治疗能够明显抑制肿瘤的生长,疗效明显优于其他3组(P<0.05);联合治疗组瘤内出现大片坏死区域(P<0.05),联合治疗组的CD8+T细胞数量明显增多(P<0.01)。结论将NCPP和瘤内缓释化疗技术联合应用能有效地抑制肿瘤的生长。

无细胞短棒状杆菌纳米级制剂抗肿瘤作用及机理研究

目的 :研究无细胞短棒状杆菌纳米级制剂 (NCPP)体内抗肿瘤作用及机理。方法 :小鼠腹腔注射NCPP与短棒状杆菌制剂 (CPP) 14d后测定脾指数。小鼠腹腔注射艾氏腹水癌细胞 ,于注射癌细胞前 1d及注射后次日起 ,连续 (间隔 1d)腹腔注射NCPP与CPP 5次 ,计算小鼠存活率。小鼠腹腔注射NCPP和CPP 10d后测定腹腔巨噬细胞 (Mφ)吞噬率、吞噬指数、过氧化氢 (H2 O2 )和一氧化氮 (NO)水平、脾脏自然杀伤 (NK)细胞杀伤率及T细胞增殖指数。结果 :NCPP组和CPP组与对照组相比 :均有明显的抑瘤作用 ;脾指数均大于 2 .0 ;腹腔Mφ吞噬率、吞噬指数、产生过氧化氢 (H2 O2 )和一氧化氮 (NO)水平均有显著性提高 (P <0 .0 1) ;脾脏NK细胞杀伤率均有明显提高 (P <0 .0 5 ) ;脾脏T细胞增殖指数均无明显差异。上述所有实验中 ,NCPP和CPP 2组间均无明显差异。结论 :NCPP具有与CPP相同的脾激活及抑瘤作用 ,其机理主要是通过激活Mφ及NK细胞吞噬、杀伤功能所致。

无细胞短棒状杆菌纳米级制剂抗结核作用及机理研究

目的：研究无细胞短棒状杆菌纳米级制剂(NCPP)体内抗结核作用及机理。方法：NCPP各剂量组与乌体林斯组豚鼠皮下攻击结核杆菌H37RV后，第3，10，17d肌肉注射给药，于5，7，9周分3批处死动物，取脾查活菌分离数，并做病理镜检。另取小鼠腹腔注射NCPP 10d后测定腹腔巨噬细胞(Mφ)吞噬率、吞噬指数、过氧化氢(H2O2)和一氧化氮(NO)水平及脾T细胞增殖指数。结果：NCPP各剂量组豚鼠脾活菌数于5，7，9周时明显低于对照模型组(P<0．05)，与对照药乌体林斯组相近。亦可减轻结核特异性病理改变。此外，NCPP各剂量组小鼠腹腔Mφ上述各项指标均显著提高(P<0．01)，但脾脏T细胞增殖指数无明显变化。结论：NCPP对结核杆菌感染的豚鼠模型具有明显的免疫治疗作用，其机理主要是通过激活Mφ，且使其产生过氧化氢、一氧化氮水平明显提高．达到杀灭结核杆菌的目的。

短棒状杆菌菌体细胞与细胞代谢产物生物学活性的比较

欲提高短棒状杆菌制剂的临床应用效果,为该产品进一步精制奠定基础,进行了短棒状杆菌有效成份的研究。在适宜的培养基中,以厌氧法培养短棒状杆菌,分别收获菌体及培养上清,做生物学活性检测。结果显示,菌体细胞内脾激活和抑瘤试验生物学活性显著,细胞代谢产物无生物学活性。实验证实,短棒状杆菌的有效成份在菌体细胞内,与细胞代谢产物无关。

丙酮法处理短棒状杆菌制剂的效果

目的观察丙酮处理的短棒状杆菌制剂的毒性和免疫激活功能。方法用丙酮脱脂方法去掉短棒状菌的部分外膜蛋白及附着在菌体上的杂蛋白,制成制剂,与现用短棒制剂同时进行异常毒性试验、毒性试验、脾激活试验、抑瘤试验。结果丙酮处理后短棒状制剂比原短棒状制剂的毒性反应明显降低,免疫激活功能明显提高。结论丙酮处理后的短棒状制剂质量明显提高。

短棒状杆菌制剂胸腔内注射治疗晚期肺癌胸腔积液23例

目的 比较中心静脉导管持续引流分别配合短棒状杆菌制剂(CP) 与顺铂(DDP) 胸腔内注射治疗晚期肺癌胸腔积液的疗效及副作用。方法 46例恶性胸水患者随机分为两组, 每组23 例, 分别进行短棒状杆菌制剂及顺铂胸腔内注射, 按WHO疗效标准评价。结果 治疗组(CP组) 完全有效(CR) 9例(39 1%), 部分有效(PR) 12例(52 2%), 有效率91 3%; 对照组(DDP 组) CR 3 例(13 0%), PR 11 例(47 8%), 有效率60 8%。两组有效率经统计学处理差异有显著意义(χ2=4 3, P<0 05), 对照组部分出现胃肠道反应及血象中白细胞降低等副作用, 治疗组无类似副作用。结论 本疗法治疗晚期肺癌胸腔积液效果好, 副作用少, 值得临床推广应用。

短棒状杆菌胞壁肽聚糖的实验研究

目的提取短棒状杆菌的有效成分,观察生物学效应,为研制新型治疗制剂奠定基础。方法将短棒状杆菌77-1株用冷热外压法获得细胞壁,再经苯酚及三氯甲烷萃取肤聚糖成分。结果提纯品经紫外吸收测定、淋巴细胞转化试验、抑瘤试验、脾激活试验、毒性试验证实,具有生物学活性及安全性。其主要成分经生化检测含有多肽及聚糖类物质。结论短棒状杆菌的有效成分是细胞壁上的肽聚糖类物质;实验采用的提纯工艺具有可操作性和实际应用价值,为新产品开发提供了可靠依据。

不同方法生产的短棒状杆菌生物学活性比较

提高短棒状杆菌疫苗临床疗效,解决接种后局部硬结,发烧等不良副反应。在菌体菌苗的基础上,采用超声、破碎、离心、胰酶消化脱脂的方法提取细胞壁做脾激活抑瘤试验生物学检定。结果显示,纯化的短棒状杆菌细胞壁可使小鼠脾激活指数达到4.06。能抑制艾氏腹水瘤的生长,而菌体脾指数3.18。实验证实,纯化的短棒杆菌细胞壁菌苗的活性好于菌体菌苗。

短棒状杆菌有效成分的分离及其作用

目的减轻短棒状杆菌全菌体制剂接种后的局部疼痛等副作用。方法采用超声破碎、蛋白水解及脱脂的方法提取了细胞壁,通过脾激活试验及抑瘤试验,检测纯化的短棒状杆菌细胞壁活性对家兔股四头肌的局部刺激作用及热原反应。结果纯化的短棒状杆菌细胞壁可使小鼠脾激活指数达到4.8,能抑制艾氏腹水瘤的生长,生存率达到80%;家兔股四头肌肌肉注射后未见局部充血坏死;家兔热原试验未见明显发热。结论纯化的短棒状杆菌细胞壁不仅保留了全菌体制剂所具有的活性,而且明显减轻了局部的刺激作用。

酶法处理短棒状杆菌对荷瘤鼠脾细胞免疫功能的影响

目的探讨酶法处理短棒状杆菌(Enzyme-digested Corynebacterium parvum product,ECPP)对荷瘤鼠脾淋巴细胞免疫功能的影响。方法将NIH小鼠随机分为5组:生理盐水对照组(NS)、荷瘤对照组(CK)、阳性对照组(CPP)、低剂量ECPP组(ECPPⅠ,500μg/ml ECPP)和高剂量ECPP组(ECPPⅡ,1 000μg/ml ECPP)。除NS组经腹腔注射0.2 ml 0.9%NaCl外,其他4组小鼠均经腹腔注射0.2 ml艾氏腹水瘤(Ehrlich ascites carcinoma,EAC)细胞悬液(5.0×106个/ml),接种次日,每组小鼠腹腔注射相应药物(注射体积均为0.25 ml),每次间隔1 d,连续5次,停药次日,颈椎脱臼处死小鼠,检测腹水量;3H-TdR法检测脾淋巴细胞转化能力;流式细胞术分析T淋巴细胞亚群及NK细胞活性;RT-PCR检测脾淋巴细胞中IFNγ、TNF-α基因mRNA的转录水平。结果与CK组相比,各给药组均能明显降低小鼠腹水量(P<0.01),CPP组和ECPPⅡ组间差异无统计学意义(P>0.05),ECPPⅡ组降低腹水的能力明显高于ECPPⅠ组(P<0.01);与NS、CK及ECPPⅠ组相比,ECPPⅡ组可明显提高T、B淋巴细胞的转化能力,增加脾CD4+、CD8+及NK细胞数量(P<0.01),而与CPP组比较,差异无统计学意义(P>0.05);与NS、CK和ECPPⅠ组比较,ECPPⅡ组IFNγ、TNF-α基因mRNA转录水平明显提高(P<0.01),与CPP组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 ECPP能显著提高荷瘤鼠脾细胞的免疫功能。

维甲酸调变的巨噬细胞对肺泡细胞癌(A_(549))作用的研究专业 病理

本文应用光镜、相差显微镜及同位素测定等方法,观察了维甲酸（RA）对人肺泡细胞癌 A（549）生长曲线及3HTdR 掺入的抑制作用,经 RA 在体外或体内激活的小鼠腹腔巨噬细胞,在体外对 A549的细胞毒作用,以及 RA与 CP（短棒状杆菌菌苗）在小鼠体内合用,对小鼠腹腔巨噬细胞数量及功能的影响。实验结果提示:RA10-8M 对 A549生长曲线有一定的抑制作用。对3HTdR 掺入 A549也有一定的抑制作用。RA 在体外对小鼠腹腔巨噬细胞具有直接的激活作用,表现为巨噬细胞体积增大,梭形、多角形细胞明显增多,并获得了对 A549的抑制及杀伤能力。

短棒状杆菌细胞壁对膀胱癌细胞抑制效果的检验

目的检验短棒状杆菌细胞壁提取物对膀胱癌细胞的抑制效果。方法将3组大鼠分别膀胱灌注短棒状杆菌细胞壁提取物、致癌剂MNU、0.9%氯化钠,灌注9周后提取每组的大鼠膀胱RNA,检测RNA的纯度与浓度。将提取的RNA反转录成cDNA,设计引物,聚合酶链式反应(PCR)扩增大鼠干扰素/维甲酸诱导凋亡相关基因19(Grim19)、Stat3、β-actin基因。然后对PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳检测,用Image J软件对电泳图进行分析。结果从短棒状杆菌提取物组、致癌剂甲基-亚硝基脲(MNU)组、0.9%氯化钠对照组的大鼠膀胱提取到的RNA浓度分别为53.3、93.4和64.9 ng/μl,OD260/OD280在2.03~2.07。琼脂糖电泳结果表明短棒状杆菌细胞壁提取物组的大鼠膀胱中Grim19基因、Stat3基因均高表达,致癌剂MUN组的大鼠膀胱Grim19基因的表达含量低,Stat3基因表达含量高。而0.9%氯化钠对照组Grim19基因、Stat3基因均正常表达。结论在患膀胱癌的大鼠体内,膀胱内灌注的短棒状杆菌细胞壁提取物可以有效地提高抑癌基因Grim19基因的表达,同时降低癌基因Stat3基因的表达,表明短棒状杆菌细胞壁提取物是一种潜在的抗膀胱癌药物。

NCPP对肝纤维化作用及机理的初步研究

目的:研究不同状态巨噬细胞分泌细胞因子及免疫功能的差异及无细胞短棒状杆菌纳米级制剂(NCPP)活化巨噬细胞在肝纤维化中的作用。方法:将 C57/B6小鼠分为痤疮丙酸杆菌(ATCC12930)组、NCPP 组及对照组。于第1d 及第7d 腹腔注射痤疮丙酸杆菌及 NCPP。第10d 处死小鼠,取腹腔液,分离培养巨噬细胞,收集上清液,用于检测 IFN-γ和 TNF-α。小鼠腹腔注射 NCPP 与痤疮丙酸杆菌,14d 后测定脾指数,并做脾病理检查。小鼠腹腔注射艾氏腹水癌细胞,于注射癌细胞前1d 及注射后次日起,连续(间隔1d)腹腔注射 NCPP 与痤疮丙酸杆菌5次,计算小鼠存活率。将猕猴分为对照组及 NCPP 高、中、低3个剂量组,肌肉内注射给药,每周2次,连续90d。剖取肝脏,做病理切片检查。结果:NCPP 组小鼠腹腔巨噬细胞产生的 IFN-r 水平明显高于痤疮丙酸杆菌组(p<0.05),TNF-α的水平明显低于痤疮丙酸杆菌组(p<0.05)。NCPP 组和痤疮丙酸杆菌组均引起小鼠脾脏明显增大,脾指数增高。病理检查两组脾脏均显示脾窦中单核细胞及多核巨细胞明显增多,但NCPP 组有明显的抑瘤作用,而痤疮丙酸杆菌组无明显抑瘤作用。猴肝病理结果显示 NCPP 高、中、低剂量组肝脏组织结构正常,未见明显的纤维化现象。结论:NCPP 和痤疮丙酸杆菌均可刺激单核巨噬细胞增生,但分泌的细胞因子及免疫功能有明显差异。NCPP 活化巨噬细胞未见明显致肝纤维化作用。