小肠黏膜下层脱细胞基质复合外泌体构建组织工程尿道

背景:小肠黏膜下层脱细胞基质已被临床与基础研究证实可用于尿道的修复重建,但其单独应用时存在宿主细胞生长缓慢、支架血管化不足而成活困难、重建尿道狭窄梗阻等问题,仅适用于较短的尿道狭窄。目的:探讨应用小肠黏膜下层脱细胞基质复合外泌体构建组织工程尿道的可行性。方法:从新西兰大白兔骨髓间充质干细胞中分离提取外泌体;制备猪小肠黏膜下层脱细胞基质,将外泌体负载于小肠黏膜下层脱细胞基质上。将小肠黏膜下层脱细胞基质-外泌体(PKH26染料标记)复合物与脐静脉内皮细胞共培养12 h,观察细胞摄取外泌体情况。选取生长状态良好的脐静脉内皮细胞,分3组培养:空白组常规培养,对照组加入小肠黏膜下层脱细胞基质,实验组加入小肠黏膜下层脱细胞基质-外泌体复合物,通过划痕实验、成管实验、血管生成因子分泌检测评估血管生成情况。取30只新西兰大白兔,建立长段(3 cm)尿道缺损模型,采用随机数字表法分3组干预(n=10):单独材料组植入小肠黏膜下层脱细胞基质,对照组植入小肠黏膜下层脱细胞基质-骨髓间充质干细胞复合物,实验组植入小肠黏膜下层脱细胞基质-外泌体复合物,植入后12周进行尿道造影、尿动力学检查及重建尿道切片病理观察。结果与结论:(1)荧光显微镜下可见小肠黏膜下层脱细胞基质中的外泌体可被脐静脉内皮细胞摄取。(2)与空白组、对照组相比,实验组材料可促进脐静脉内皮细胞的迁移、成血管能力以及成血管因子血管内皮生长因子、肝细胞生长因子、白细胞介素8的分泌(P <0.05)。(3)尿道造影结果显示,单独材料组10只兔均出现尿道狭窄,对照组10只兔中2只出现尿道狭窄,实验组10只兔均未出现尿道狭窄。尿动力检查结果显示,单独材料组兔材料植入后12周的最大尿道压高于术前(P <0.05),对照组、实验组兔植入后12周的最大尿道压均低于空白组(P <0.05)。苏木精-伊红、Masson与免疫组化染色显示,单独材料组可见明显的再生上皮层、少量的皮下平滑肌与血管,以纤维组织增生为主,伴有明显炎性细胞浸润;对照组可见较完整的再生上皮与少量胶原,可见大量的皮下血管与平滑肌,伴有炎性细胞浸润;实验组可见完整的再生上皮层与大量的皮下血管、平滑肌,未见明显炎性细胞浸润,实验组AE1/AE3、ɑ-平滑肌肌动蛋白、CD31阳性表达均高于单独材料组、对照组(P <0.05)。(4)结果表明,小肠黏膜下层脱细胞基质-外泌体组织工程尿道可通过促进血管生成来修复尿道缺损。

羊膜细胞外基质与膀胱细胞外基质材料修复大鼠子宫内膜损伤

背景:大量研究已证实,羊膜细胞外基质与膀胱细胞外基质材料均可作为干细胞载体用于子宫内膜损伤的治疗,但是有关两种材料的比较研究相对少见。目的:对比羊膜细胞外基质与膀胱细胞外基质材料作为干细胞载体治疗子宫内膜损伤的差异。方法:采用全骨髓贴壁法分离纯化SD大鼠骨髓间充质干细胞。分别制备SD大鼠羊膜细胞外基质与膀胱细胞外基质材料,然后将骨髓间充质干细胞分别接种于两种材料表面,检测细胞增殖与黏附情况。将40只SD大鼠随机分为4组(n=10),除假手术组外,子宫内膜损伤组、羊膜细胞外基质组、膀胱细胞外基质组均通过机械干预的方式建立子宫内膜损伤模型,分别将羊膜细胞外基质/骨髓间充质干细胞复合物、膀胱基质细胞外基质/骨髓间充质干细胞复合物移植至羊膜细胞外基质组、膀胱细胞外基质组大鼠损伤内膜部位,移植后14,28 d取材检测,苏木精-伊红染色观察大鼠子宫内膜组织形态,酶联免疫吸附法分析子宫内膜组织中碱性成纤维细胞生长因子、胰岛素样生长因子1与血管内皮生长因子水平,免疫组化染色分析子宫内膜组织中波形蛋白与CD34表达。结果与结论:(1)两种细胞外基质材料均有利骨髓间充质干细胞的增殖,相较于膀胱细胞外基质材料,羊膜细胞外基质材料可促进骨髓间充质干细胞的黏附;(2)相较于假手术组,子宫内膜损伤组碱性成纤维细胞生长因子、胰岛素样生长因子1与血管内皮生长因子水平降低(P <0.01),子宫内膜组织形态发育不良,内膜厚度与腺体数量减少,波形蛋白与CD34阳性表达减少(P <0.01);相较于子宫内膜损伤组,羊膜细胞外基质组、膀胱细胞外基质组碱性成纤维细胞生长因子、胰岛素样生长因子1与血管内皮生长因子水平均升高(P <0.05或P <0.01),子宫内膜组织形态明显改善,内膜厚度与腺体数量增加,波形蛋白与CD34阳性表达增加(P <0.05或P <0.01),并且羊膜细胞外基质组的改善作用优于膀胱细胞外基质组(P <0.05);(3)结果表明,相较于膀胱细胞外基质材料,羊膜细胞外基质材料作为骨髓间充质干细胞的载体可进一步促进损伤子宫内膜的修复。

无细胞人膀胱黏膜下基质的生物相容性初探

目的探讨无细胞膀胱黏膜下基质(acellularurinarybladdersubmucosa,AUBS)的生物相容性。方法应用反复冻融-酶消化处理及冷冻干燥技术制备人AUBS。体外培养人口腔黏膜细胞,以2×106/ml密度接种于AUBS,观察细胞生长和增殖情况。取纯种SD大鼠18只,雌雄不限,体重250～300g。将AUBS1cm×1cm移植于大鼠腹部肌肉内,分别于术后3、6、10、14、21和28d各处死3只动物并取材进行组织学观察。结果AUBS主要由胶原纤维构成,呈三维立体网络状结构。第2代人口腔黏膜细胞接种于AUBS后能够生长和繁殖,10d后在AUBS表面形成了连续单层细胞结构。AUBS植入大鼠腹部肌肉内,术后6dAUBS移植区可见组织细胞浸润、生长,14d可见新生血管形成,28d胶原纤维排列规则。结论AUBS可以在体内、体外诱导细胞黏附和生长,生物相容性良好。

联合检测尿核基质蛋白22和尿脱落细胞在监测膀胱癌术后复发中的临床价值

目的探究联合检测尿脱落细胞和尿核基质蛋白22(NMP22)在监测膀胱癌术后复发中的临床应用价值。方法对我院2017年10月至2022年3月收治的106例膀胱癌手术后患者行荧光膀胱镜检查,检查前分别留取尿液样本行NMP22和尿脱落细胞检测;以荧光膀胱镜检查和病理结果为金标准,评价单独检测与联合检测NMP22和尿脱落细胞在诊断膀胱癌复发中的敏感性、特异性、准确性、阳性率和癌检出率,以及在不同分期、分级肿瘤中的阳性检出率。结果单独检测NMP22和尿脱落细胞诊断膀胱癌复发的敏感性分别为60.78%和50.98%,特异性分别为78.18%和87.27%,准确性均为69.81%,而联合检测的敏感性高达92.16%、特异性为74.55%、准确性升至83.02%。联合检测NMP22和尿脱落细胞的阳性率(57.55%)、癌检出率(44.34%)均高于单独检测NMP22的阳性率(40.57%)、癌检出率(29.25%)以及单独检测尿脱落细胞的阳性率(31.13%)、癌检出率(24.53%)。在Ta期和G1级肿瘤中,联合检测的阳性率明显高于单独检测尿脱落细胞的阳性率(P<0.05);在T1期肿瘤中,联合检测的阳性率明显高于单独检测NMP22的阳性率(P<0.05);在G2级肿瘤中,联合检测的阳性率明显高于单独检测NMP22和单独检测尿脱落细胞的阳性率(P<0.05)。结论联合检测NMP22和尿脱落细胞可以明显提高诊断膀胱癌复发的敏感性、准确性、阳性率和癌检出率,提高在Ta、T1期和G1、G2级肿瘤中的检出阳性率,可在行膀胱镜复查前为膀胱癌患者提供更充分、全面及准确的评估,具有一定的临床意义。

猪源罗伊氏乳杆菌LR1对断奶仔猪肠黏膜细胞外基质动态变化的影响

【目的】初步研究饲粮添加猪源罗伊氏乳杆菌对断奶仔猪肠道细胞外基质(Extracellular matrix,ECM)表达的影响,为猪源罗伊氏乳杆菌在畜牧业中的推广应用提供参考。【方法】选取21日龄体重相近的杜长大杂交断奶仔猪144头,随机分为3个处理组,对照组(CON)饲喂基础饲粮,抗生素组(AO)在基础饲粮中添加75 mg/kg金霉素和100 mg/kg喹乙醇,罗伊氏乳杆菌组(LR1)在基础饲粮中添加5×10^(10)CFU/kg猪源罗伊氏乳杆菌LR1,每个处理组各分8栏饲养,每栏6头猪,试验期为42 d,饲养试验结束时随机从每栏挑选1头仔猪进行屠宰,取其十二指肠(近端)、空肠(中段)、回肠(远端)样品,进行肠道胶原蛋白、纤维黏连蛋白、肌腱蛋白及其相关调控因子等ECM相关指标的检测。【结果】Masson染色观察结果显示,十二指肠、空肠和回肠中胶原纤维均由肠黏膜下层向上层延伸,与CON组相比,LR1组和AO组断奶仔猪十二指肠的胶原容积分数均显著降低(P<0.05),LR1组的回肠胶原容积分数也显著降低(P<0.05)。TMT高通量蛋白质组学分析结果显示,ECM-受体互作通路是差异蛋白主要富集通路之一,且其差异蛋白COL1A2、COL4A2、COL6A1、ITGA1等ECM分子的表达在LR1组显著低于CON组(P<0.05)。与CON组相比,LR1组和AO组断奶仔猪空肠和回肠COL1A2、COL3A1、ITGβ2的基因表达均显著降低(P<0.05),且LR1组显著降低了空肠COL4A2、COL5A1、COL6A1、FN1、TNC、ITGα1及回肠ITGα1的基因表达(P<0.05),但对回肠COL4A2、COL5A1、COL6A1、FN1、TNC无显著影响。在回肠中,与CON组相比,LR1组和AO组断奶仔猪回肠CollagenⅠ~Ⅵ的含量显著降低(P<0.05);LR1组回肠胞内调控因子SEC6A1、PDE4D和胞外调控因子MMP2的基因表达均显著降低(P<0.05);与AO组相比,LR1组的胞内调控因子SEC6A1、细胞因子TGF-β的基因表达显著降低(P<0.05)。【结论】饲粮中添加猪源罗伊氏乳杆菌LR1可通过减少ECM调控因子SEC6A1、PDE4D等的基因表达来调节断奶仔猪肠道ECM的重塑。

冻干无细胞膀胱黏膜下基质修复兔尿道缺损

目的 探讨冻干无细胞膀胱黏膜下基质修复尿道缺损的效果。方法 应用反复冻融-酶法及冷冻干燥技术制备冻干无细胞人体膀胱黏膜下基质。 18只新西兰白兔建立尿道中段部分缺损模型 ,尿道缺损面积约 1 0cm× 0 5cm。其中 14只兔作为实验组 ,以冻干无细胞膀胱黏膜下基质修补尿道缺损 ,术后 1、2、3、4、8、12、2 4周分别取 2只行逆行性尿道造影 ,观察尿道情况 ,并采取尿道组织进行大体、组织学及超微结构观察 ;4只兔作为对照组 ,未采用任何材料修补尿道缺损 ,直接缝合尿道海绵体包膜、皮下组织及阴茎皮肤 ,术后 2、4周分别取 2只行逆行性尿道造影 ,采取尿道组织进行大体观察。结果 实验组 14只兔均未发现明显的尿道狭窄。冻干无细胞膀胱黏膜下基质组织相容性良好 ,移植后无细胞膀胱黏膜下基质内有细胞长入 ,新生血管形成 ,术后 2周无细胞膀胱黏膜下基质移植区完全上皮化。随着移植时间的延长 ,移植区胶原纤维排列由紊乱趋于规则。结论 冻干无细胞膀胱黏膜下基质能够诱导尿道黏膜细胞迁徙、生长和上皮化 ,初步认为可以作为尿道缺损修复材料。

应用异种脱细胞真皮基质修复黏膜缺损的近期疗效

目的介绍应用异种(牛)脱细胞真皮基质(acellular dermal matrix,ADM)修复耳鼻咽喉头颈外科术后黏膜缺损的临床效果。方法2006年10月-2007年3月,对12例患者术后黏膜缺损应用异种ADM一期修复。男10例,女2例;年龄18～76岁。其中鼻中隔偏曲、前中颅底黑色素瘤各1例;鼻前庭血管瘤1例;下咽癌1例,T2N2M0;颈段食道癌1例,T2N1M0;扁桃体癌3例,其中T2N0M02例,T3N1M01例;喉癌4例,均为声门区喉癌,其中T2N0M03例,T3N1M01例。下咽癌、颈段食道癌、扁桃体癌、喉癌的患者病理诊断均为鳞状细胞癌。结果术后12例患者均获随访6个月,所有患者术后3个月内应用内窥镜复查,修复膜均已替代缺损黏膜组织,局部功能恢复。其中下咽癌患者术后第5天出现咽瘘,经局部换药及对症处理10d后咽瘘愈合;前中颅底黑色素瘤患者术后第7天再次出现脑脊液鼻漏,经嘱患者卧床、通便、控制颅压,1周后症状消失,但术后2个月发现局部肿瘤复发,拒绝再次手术而行局部放疗,现仍带瘤生存。所有咽喉及颈段食道癌患者均经过放疗,1例扁桃体癌术后放疗2个月时局部复发及颈部转移,拒绝再次手术,现仍带瘤生存;颈段食道癌患者在放疗后3个月因口内大出血死亡。其余咽喉肿瘤患者未见肿瘤复发。结论异种ADM为修复头颈肿瘤术后黏膜缺损提供了一种新方法,手术操作简便,有一定临床应用价值。

异种(牛)脱细胞真皮基质修复咽喉肿瘤切除术后黏膜缺损的效果评估

目的:咽喉肿瘤切除后黏膜缺损的修复直接影响呼吸、发音、吞咽功能的恢复。文章评估了应用异种(牛)脱细胞基质修复膜修复咽、喉术后黏膜缺损的效果。方法:选择2006-08/2007-11青岛大学医学院附属烟台毓璜顶医院耳鼻咽喉头颈外科收治的咽喉肿瘤患者27例,口咽部扁桃体癌5例,下咽癌6例,喉癌16例,其中声门区癌15例,声门上区癌1例,肿瘤病理均为鳞状细胞癌。实验经医院伦理委员会批准,所有患者对实验及治疗方案均知情同意。实验采用烟台正海生物技术有限公司提供的异种(牛)脱细胞真皮基质修复膜,批号SS070603,规格(2×2.5)cm或(4×3)cm的白色、半透明、蜂窝状片块组织,基底膜面较粗糙,另一面较光滑。扁桃体癌患者将修复膜缝于创面后,采用碘仿纱条打包固定7d。喉癌患者如缺损组织小可以将修复膜直接铺于创面缝合,如缺损较大则先应用带状肌或带状肌筋膜修补喉部缺损,然后将修复膜铺于喉内创面与黏膜切缘对位缝合,采用喉扩张模局部压迫10～12d。下咽癌及颈段食管癌患者亦应用带状肌修补下咽部后壁或侧壁缺损,然后将修复膜与局部黏膜切缘直接对位缝合。术后对患者进行随访观察,以3,6个月,1年为观察时间;主要观察脱细胞真皮基质修复膜修复的愈合,呼吸功能、发音功能、吞咽功能的恢复情况。结果:27例患者中出院时经电子喉镜检查26例黏膜缺损修复一期愈合,1例下咽癌患者术后出现咽漏,经局部换药对症处理后愈合。4例扁桃体癌、4例下咽癌、6例喉癌患者在术后3～6个月应用电子喉镜复查,修复的局部已经恢复为肉眼可见的黏膜组织,吞咽、呼吸均恢复正常(1例声门上喉癌的患者在术后15d进食时有呛咳,经过锻炼进食恢复正常)。喉癌患者发音功能恢复,但是发音的清晰度欠佳;5例扁桃体癌中随访6个月以上4例无复发,1例术后放疗于2个月时局部复发及颈部转移,拒绝再次手术,现带瘤生存;随访1年以上者2例。6例下咽癌随访6个月以上者4例,其中1例患者术后出现咽瘘,经局部换药及对症处理后咽瘘愈合,放疗后3个月因口内大出血死亡。16例喉癌患者随访6个月者6例,随访1年以上者1例。27例患者均未发现排斥、过敏等反应。结论:异种脱细胞真皮基质修复膜为修复头颈肿瘤术后黏膜缺损提供了一种新的方法,手术操作简便,效果良好,为功能恢复提供了保证。

血根碱对膀胱癌T24细胞增殖迁移的调控作用及其机制

目的 观察血根碱对膀胱癌T24细胞增殖迁移的调控作用,并探索可能的作用靶基因及作用机制。方法 培养膀胱癌T24细胞和人正常膀胱上皮细胞SV-HUC-1,分别分为实验组和对照组,实验组分别加入0.012 5、0.025、0.05、0.1、0.2、0.4、0.8、1.6μmol/L的血根碱,对照组培养基中不加血根碱,采用CCK-8试剂盒检测细胞增殖能力,并计算半数抑制浓度(IC_(50))。将T24细胞分为实验组和对照组,实验组给予血根碱,对照组不进行血根碱处理,采用Transwell小室实验检测细胞迁移能力。分别基于BATMAN、SwissTargetPrediction网络药理学数据库、TCGA数据库分析并筛选得到血根碱作用靶基因和膀胱癌治疗靶基因的交集靶基因,进行GO分析和KEGG功能富集分析,绘制蛋白质相互作用网络,筛选血根碱调控T24细胞的靶基因。采用GSEA_4.2.3进行靶基因集富集分析,以确定靶基因富集的相关通路。基于GEPIA网站和“survival”R软件包评估靶基因高表达组和低表达组的无进展间隔期、疾病特异性生存期、总生存期差异。将血根碱和靶基因蛋白结构进行分子对接,并计算结合能。采用实时荧光定量PCR法检测实验组和对照组细胞中的靶基因。结果 实验组T24细胞增殖能力和穿膜细胞数低于对照组(P均<0.05)。血根碱对T24细胞的IC_(50)为0.200 3μmol/L、对SV-HUC-1细胞的IC_(50)为0.709 9μmol/L。筛选出血根碱调控T24细胞的靶基因为基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9、前列腺素—内过氧化物合酶2(PTGS2)。MMP-2、MMP-9、PTGS2与调节上皮细胞增殖的通路有关。MMP-9高表达者疾病特异性生存期和总生存期低于低表达者(P均<0.05)。血根碱与MMP-2、MMP-9、PTGS2结合能分别为-8.8、-8.6、-10.0 kcal/mol。实验组PTGS2、MMP-2、MMP-9 mRNA表达低于对照组(P均<0.05)。结论 血根碱可在不影响SV-HUC-1细胞的浓度下抑制膀胱癌T24细胞的增殖迁移能力。血根碱对膀胱癌细胞增殖迁移能力的调控作用可能与调控MMP-2、MMP-9、PTGS2表达并影响上皮细胞增殖相关通路有关。

人膀胱癌组织中细胞外基质金属蛋白酶诱导因子的表达

背景与目的:基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMPs)在恶性肿瘤的发生、浸润和转移中发挥关键作用,肿瘤细胞表达的细胞外基质金属蛋白酶诱导因子(extracellular matrix metalloproteinase inducer,EMMPRIN)司以诱导间质成纤维细胞合成MMPs,从而促进肿瘤的浸润和转移。本研究拟通过检测EMMPRIN在人膀胱癌组织和正常膀胱粘膜中的表达,探讨EMMPRIN在膀胱癌发生、浸润和转移中的作用。方法:应用免疫组化SP方法检测EMMPRIN在45例膀胱癌组织和9例正常膀胱粘膜中的表达,并与临床病理指标结合起来分析。结果;EMMPRIN蛋白定位于癌细胞的胞膜和胞浆,阳性率为73.3％,正常膀胱粘膜和肿瘤间质均为阴性表达。EMMPRIN在Ⅱ、Ⅲ级和术后复发组的阳性表达率分别为84.0％、84.6％和100％,高于Ⅰ级和无复发组(分别为14.3％和55.6％)(P<0.05);在淋巴结转移组的强阳性表达率(85.7％)高于无淋巴结转移组(23.7％)(P<0.05)。结论:EMMPRIN在人膀胱癌组织中过度表达,与膀胱癌的恶性程度有关,可作为判断膀胱 癌是否具备高侵袭转移潜能的指标。

异种脱细胞真皮基质修复膜在口腔黏膜下纤维性变手术治疗中的应用

目的:评价异种脱细胞真皮基质修复膜在口腔黏膜下纤维性变手术治疗中的应用效果。方法:8例重度口腔黏膜下纤维性变患者,经鼻腔气管插管全麻下切除双侧颊部翼下颌韧带前方区域纵行的纤维条索,术中被动开口度达正常范围后,剪取相应大小的异种脱细胞真皮基质修复膜覆盖黏膜缺损创面,间断缝合后,碘纺纱包加压固定。术后10～14d拆除纱包与缝线后开始开口训练,定期随访并进行类固醇皮质激素黏膜下局部注射等辅助治疗,通过伤口愈合、瘢痕软化及开口度改善等指标评价手术效果。采用SPSS16.0软件包对数据进行单因素方差分析。结果:8例患者双侧颊部纤维条索切除后形成的手术创面,采用异种脱细胞真皮基质修复膜进行修复均获得成功,无感染或排异等并发症发生。术后随访6～18个月,患者颊部原手术区黏膜红润,质地柔软,开口困难明显改善。术前开口度为(12.04±2.93)mm,术中开口度为(35.46±3.17)mm,术后6个月时的开口度为(29.33±4.28)mm,经统计学分析,差异具有显著性(P<0.05)。结论:应用异种脱细胞真皮基质修复膜修复重度口腔黏膜下纤维性变手术治疗中的黏膜缺损创面,能够起到促进创面早期愈合、减轻瘢痕形成与改善开口困难的作用,其操作简单易行,值得临床推广应用。

新西兰兔骨髓基质细胞构建组织工程膀胱的实验研究

目的 :研究骨髓基质细胞 (MSCs)在兔组织工程膀胱中的应用 .方法 :按文献改进方法制作膀胱无细胞基质(BAMG) ,从兔胫骨中分离出MSCs,体外扩增后接种于BAMG外表面 ,在低糖DMEM (LG DMEM )培养 12h ,与BAMG复合成组织工程膀胱 ,对同一兔实施膀胱次全切术 ,用组织工程膀胱替代 .2 0只兔实施了保留三角区的膀胱次全切术 .实验随机分为 3组 .A组 6只直接缝闭三角区 ;B组 7只用膀胱形状的BAMG进行重建 ;C组 7只用复合自体MSCs的组织工程膀胱进行替代手术 .术前术后分别记录膀胱测压和放射线造影资料 .12wk时无痛处死动物 ,进行大体解剖和组织染色分析 .结果 :体外扩增时间平均为 2 1d .A ,B和C组膀胱容积分别为术前的 2 2 % ,85 %和 95 % ,顺应性分别为术前的 11% ,10 4 %和 10 7% .大体解剖显示A组仅有很小的储水能力 ,而B ,C组具有正常膀胱形态 ,组织染色分析A ,B组显示上皮层正常 ,粘膜下纤维组织增生而肌层较薄 ;C组则显示了与自体膀胱相似的正常的 3层组织结构 .结论 :膀胱次全切除后原位缝合膀胱容积和顺应性均不能恢复 ,单纯应用BAMG膀胱容积和顺应性能够恢复正常 ,但逼尿肌层较薄 ,应用BAMG复合自体ASCs或MSCs的组织工程膀胱替代 ,术后 12wk膀胱容积和顺应性能够恢复正常 。

骨髓间充质干细胞与膀胱脱细胞基质的生物相容性

背景:在尿路缺损修复中,骨髓间充质干细胞-膀胱脱细胞基质复合物有望形成上皮层、肌层及血管化。目的:观察骨髓间充质干细胞与膀胱脱细胞基质的生物相容性。方法:将第4代兔骨髓间充质干细胞按1.0×109L-1种植于同种异体兔膀胱脱细胞基质支架上,以单独培养骨髓间充质干细胞为对照。绘制两组细胞生长曲线图,对比观察两条生长曲线有无差异。结果与结论:骨髓间充质干细胞在膀胱脱细胞基质表面能够很好的贴附、分裂生长,且细胞生长曲线与对照组相似,说明骨髓间充质干细胞在膀胱脱细胞基质表面生长良好,相容性较好。

脱细胞真皮基质黏膜组织补片在鼓膜修补术中的应用

目的探讨脱细胞真皮基质黏膜组织补片(acellulardemalmatrix,ADM)在鼓膜修补术中的应用及临床疗效。方法收集2005～2006年在我院行鼓室成型术I型的34例患者(36耳),所有病例均为鼓膜紧张部穿孔,手术在耳内镜下进行,修复材料为ADM。术前行鼓气耳镜检查、听力学检查、贴补试验,有中耳感染史者行CT检查。结果术后随访6个月至1年。36耳术后14d耳内镜下复查,均未发生排异反应。2耳术后1～2个月因感染移植物未存活,干耳再次手术后愈合良好;1耳术后14d观察修补处上缘裂隙,3个月后自然愈合。结论ADM来源方便,组织相容性好,薄厚适宜,存活率高,手术时间短,术后恢复快,是一种值得推广的方法。

异种脱细胞真皮基质修复膜在口腔黏膜组织缺损修复中的应用

目的:评价异种脱细胞真皮基质修复膜在口腔黏膜组织缺损修复中的应用效果。方法:收集2007年1月至10月应用异种脱细胞真皮基质修复膜进行口腔黏膜组织缺损修复的60例患者资料。术后进行追踪随访和功能评价。结果:术后随访10～18个月,平均14个月。60例患者中,59例患者的黏膜组织缺损修复均获得成功,术后7～10 d未见修复膜脱落,愈合良好。1例病灶累及软腭,术后出现基质溶解,出现穿通,造成口鼻瘘,修复失败。成活后的修复膜在软组织部位受植床存在一定的收缩。结论:应用异种脱细胞真皮基质修复膜能够起到早期覆盖创面,促进创面愈合,减轻瘢痕生成的作用。其操作简单易行,是一种值得推广的修复方法。

膀胱细胞外基质的研制

目的 :探讨膀胱细胞外基质 (ECM)的制备方法。方法 :采用正交设计方法 [L9(34) ]。取 1 9只兔的膀胱共 1 9个 ,其中 9个被分成 2 7片 ,按正交设计随机分为 9组行脱细胞处理 ;所有试验重复 3次。经脱细胞处理后 ,采用HE染色及计算机图像分析对基质进行残余细胞成分计数 ,统计分析获得最佳方法。另 1 0个膀胱采用最佳方法制备成膀胱ECM并用于同种异体膀胱缺损修复实验 ;分别于修复术后 1 0d、4周及 3个月取材分析缺损修复处组织再生情况。结果 :各组脱细胞后残余细胞成分量均不相同 ,但第 7组未发现细胞残余成分 ;采用最佳方案(A3 B2 C3 )制备的膀胱ECM经扫描电镜分析未发现细胞残片。缺损修复实验后 1 0d移行上皮组织爬满基质内表面 ;术后 4周可见基质内细胞成分明显增多 ,但较正常组织稀疏 ,排列不规则 ;3个月后 ,取材的组织学分析表明细胞外基质替代部分组织再生状况良好。结论 :制备膀胱细胞外基质的最佳方案是A3 B2 C3 ,即在膀胱脱细胞处理过程中采用 0 .4 %胰蛋白酶、1 %甲醛 +0 .2 %戊二醛、4 0U·ml-1 DNase。

脱细胞真皮基质黏膜组织补片在喉咽癌切除咽喉修复中的应用:25例随访

背景：异体脱细胞真皮基质黏膜组织补片（acellular dermalmatrix, ADM）作为一种新型组织修复材料，目前已经广泛应用于头颈部肿瘤术后组织缺损修复。但下咽癌手术多涉及咽、喉部组织缺损的修复与功能重建，其在下咽癌术后下咽缺损修复中的应用效果有待更多的研究验证。目的：实验拟验证脱细胞真皮基质黏膜组织补片在喉咽癌切除术后喉咽修复中的作用效果。设计、时间及地点：回顾性病例分析，于2005-05/2006-06在解放军第三军医大学大坪医院野战外科研究所耳鼻咽喉-头颈外科完成。对象：男性喉咽癌确诊患者25例，年龄45~68岁，其中肿瘤原发于梨状窝侧壁22例，原发于喉咽后壁3例，病理诊断为均鳞状细胞癌。方法：根据临床分期不同采用部分或全喉咽切除术，术后均采用正海生物有限公司提供的海奥TM脱细胞异体真皮基质组织补片进行咽腔黏膜修复。修复黏膜片状缺损时可单独使用ADM，其局限性在于单纯应用ADM不能完成空间结构重建，因此对于喉咽全切除患者，喉咽腔重建时结合肌皮瓣等其他材料。主要观察指标：咽腔术部黏膜修复情况及患者吞咽、呼吸、发音等功能重建情况。结果：25例患者均进入结果分析，无脱落。25例患者均无咽瘘发生，1例部分喉咽切除术后20 d出现颈部局灶性皮下感染，换药后创面愈合。喉咽部分切除的15例患者均发生不同程度呛咳。术后30~60 d吞咽功能基本恢复，3例患者进食流质时仍有轻微呛咳，可以忍受，不影响进食。喉呼吸功能均恢复，术后6~12个月拔除气管套管。喉咽全切除10例患者喉咽腔重建均获得成功，术后20 d左右即恢复正常饮食。术后随访12-30个月，ADM修复区外观与正常黏膜相似,无明显咽腔狭窄。随访24个月以上10例，其中1例肿瘤复发，再次手术后健在。结论：ADM具有良好的组织相容性、塑形性和易操作性，与受区组织可以完全无差别融合，可用于喉咽癌术后组织缺损修复，利于发音、呼吸、吞咽等功能恢复，与肌皮瓣及其他颈部修复材料联合应用亦能取得满意疗效。

组织工程膀胱细胞外基质生物相容性的实验研究

目的制备兔膀胱细胞外基质材料,检测其生物相容性,探讨其作为组织工程泌尿道修复重建支架材料的可行性。方法联合应用渗透溶液法-酶消化法-去垢剂洗涤法制备兔膀胱细胞外基质,将体外培养的兔膀胱移行上皮细胞与其复合培养,观察细胞在材料表面的黏附、生长、增殖情况;MTT法检测材料浸提液对膀胱移行上皮细胞的细胞毒性;将材料植入兔背部皮下检测其组织相容性。结果兔膀胱细胞外基质冻干后呈白色半透明薄膜状,扫描电镜观察材料一面呈纤维网状结构,另一面呈平坦致密结构,两面均无细胞残留。膀胱移行上皮细胞能够在材料表面正常黏附、生长、增殖,细胞形态良好。MTT法检测材料细胞毒性分级为0级或1级。皮下植入实验中动物无异常反应,材料能在体内逐渐降解并引导新生组织长入。结论本研究制备的兔膀胱细胞外基质已完全除去组织中的细胞成份,同时保留了细胞外基质的纤维网状结构,具有良好的细胞相容性和组织相容性,可以作为组织工程泌尿道修复重建的支架材料。

膀胱癌组织中细胞周期蛋白D1和基质金属蛋白酶2的表达及与临床病理特征的关系

目的探讨膀胱癌组织中细胞周期蛋白(cyclin)D1和基质金属蛋白酶(MMP)-2的表达及与临床病理特征的相关性。方法 2010年7月至2015年1月来该院就诊的膀胱癌患者的膀胱癌组织及癌旁组织各62例,另取同期的膀胱囊肿患者术后正常膀胱组织60例进行对照,检测cyclin D1和MMP-2在各组的表达,记录并对比结果后分析二者的表达与其病理特征关系。结果膀胱癌组织的cyclin D1 mRNA与MMP-2 mRNA表达显著高于正常组织及癌旁组织的表达(P<0.05)。癌症分期为T2~T4期的cyclin D1及MMP-2基因的表达水平显著高于Tis^T1期,癌症分级为Ⅲ级的cyclin D1及MMP-2基因的表达水平显著高于Ⅰ~Ⅱ级(P<0.05)。肿瘤直径>3 cm的cyclin D1 mRNA表达显著高于≤3 cm者,肿瘤分级为Ⅲ级的cyclin D1 mRNA及MMP-2 mRNA显著高于Ⅰ~Ⅱ级者,肿瘤分期为T2~T4期的cyclin D1 mRNA及MMP-2 mRNA显著高于Tis^T1者,有淋巴结转移的cyclin D1 mRNA及MMP-2 mRNA显著高于无转移者(P<0.05)。相关性分析发现,膀胱癌组织cyclin D1 mRNA表达与肿瘤直径、分级、分期以及淋巴结呈正相关,MMP-2 mRNA表达与肿瘤分级、分期以及淋巴结转移呈正相关。结论膀胱癌组织中cyclin D1和MMP-2的表达及其与临床病理特征具有紧密的联系,因此在临床可考虑通过监测二者的表达以掌握患者的病情进展。

骨髓间充质干细胞在膀胱脱细胞基质上的生长及分化(英文)

背景：传统方法多采用平滑肌细胞和移行上皮细胞构建组织工程膀胱,并进行支架材料的双面种植,但由于平滑肌细胞取材培养困难,且体外传代有限,双面种植较为困难。目的：实验拟验证以骨髓间充质干细胞及膀胱脱细胞基质构建组织工程膀胱的可行性。设计：基础实验研究。单位：中山大学附属第二医院林百欣医学研究中心。材料：实验于2006-03/2007-05在中山大学附属第二医院林百欣医学研究中心完成。实验室级别为卫生部部属医院开放实验室。1月龄SD大鼠,雌雄不限,体质量80~100g,由中山大学实验动物中心提供。新鲜猪膀胱取自南方医科大学动物实验中心。方法：采用全骨髓培养连续贴壁法体外培养大鼠骨髓间充质干细胞,并应用流式细胞仪检测其表面抗原。采用去污剂洗涤法制备猪膀胱脱细胞基质,并测定其纯度及特性。将第3代骨髓间充质干细胞接种到膀胱脱细胞基质上,以添加25ng/L血管内皮生长因子（VEGF165）的培养液进行体外、体内复合培养,检测其相容性。体内实验以细胞单独培养为对照,体外实验以未植入细胞的材料为对照,并模拟合适的微环境诱导骨髓间充质干细胞生长分化,分别在4,8周后取出动物体内的复合材料行组织切片检查,并进行免疫组织化学角蛋白染色,检测上皮细胞再生情况。主要观察指标：骨髓间充质干细胞与膀胱脱细胞基质的生物相容性。结果：①采用全骨髓法成功培养出骨髓间充质干细胞,行流式细胞仪检测细胞表面抗原显示,传代第3代细胞CD29阳性细胞为99.43%。②制备的膀胱脱细胞基质具有良好的生物特性,镜下见均质状态的基质和细丝状的胶原纤维。体内外相容性实验表明骨髓间充质干细胞与膀胱脱细胞基质具有良好的相容性,细胞生长状态良好。③4周后组织切片检查可见组织中较多炎症细胞浸润,胶原及弹性纤维排列紧密,免疫组织化学角蛋白染色见有薄层、不连续的单层上皮生长,8周后可见组织中已无明显炎症细胞浸润反应,胶原及弹性纤维排列紧密,免疫组织化学角蛋白染色见有薄层、连续的多层上皮生长。结论：骨髓间充质干细胞与膀胱脱细胞基质具有良好的生物相容性,并且在体内与周围组织有良好的生物相容性,可以作为构建组织工程膀胱的材料。