白细胞介素-23通过无翅基因相关整合位点/β-连环蛋白通路增强舌鳞状细胞癌抗凋亡及耐药能力

目的检测白细胞介素-23(IL-23)在舌鳞状细胞癌组织中表达水平与临床预后的关系,研究舌鳞状细胞癌细胞系SCC9经IL-23处理后抗凋亡及耐药能力的变化。方法免疫组织化学法检测28例舌鳞状细胞癌患者组织中IL-23的表达情况;实时定量聚合酶链反应(q RT-PCR)检测不同浓度的IL-23处理后,SCC9中无翅基因相关整合位点(Wnt)1及c-myc的m RNA表达水平;结合小分子干扰RNA(si RNA),Western blot法检测IL-23对SCC9细胞的β-连环蛋白(β-catenin)和B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、三磷酸腺苷结合转运蛋白G超家族成员2(ABCG2)、P-糖蛋白(P-gp)表达影响及潜在机制;甲基噻唑基四唑法检测SCC9细胞在IL-23作用下对顺铂的抗凋亡能力改变。结果舌鳞状细胞癌组织中IL-23表达强度与淋巴结转移、神经侵犯及治疗复发有相关性(P<0.05);IL-23可增强癌细胞抗凋亡蛋白Bcl-2和耐药相关蛋白ABCG2、P-gp的表达,并且与Wnt通路活化程度密切相关;IL-23能够显著加强SCC9细胞对顺铂的抵抗性(P<0.01)。结论 IL-23通过上调舌鳞状细胞癌细胞的Wnt通路增强其抗凋亡及耐药能力。

无翅型小鼠乳房肿瘤病毒整合位点家族基因与唇腭裂

无翅型小鼠乳房肿瘤病毒整合位点家族（WNT）糖蛋白是一组调控细胞增殖、分化和极性以及细胞移动的信号分子，其多种家族成员与唇腭裂发生密切相关。WNT-3基因位于17q21，其蛋白质主要通过经典WNT／β＋连环蛋白通路调节唇和腭的发生。WNT-3A基因位于1q24，主要表达于胎盘、气管、肺和结缔组织，其蛋白质通过调控神经脊细胞和腭间质细胞，影响颅面的发生进程及腭融合。WNT5A基因位于3p21～14，其蛋白质通过Ror2介导在非经典信号转导通路中调节腭发生。WNT-9B基因位于17q21，主要表达于上颌突、中鼻突和侧鼻突的外胚层，敲除该基因会出现唇裂和腭裂。WNT-11基因位于11q13．5，其蛋白质表达于腭中线缘上皮细胞，通过促进程序性细胞死亡参与腭板融合，与FGFR1b之间相互拮抗调节腭发生。研究删瑾因，可为进一步揭示唇腭裂病因及其机制提供思路。

整合素α2基因807位点基因多态性与缺血性脑卒中的相关性的Meta分析

目的系统评价整合素α2基因807位点基因多态性与缺血性脑卒中的相关性。方法计算机检索Cochrane Library、PubMed及中国知网、维普、万方数据库,搜集关于整合素α2基因807位点基因多态性与缺血性脑卒中的相关性的病例对照研究。对纳入文献进行筛选及质量评价后,采用RevMan 5.3软件进行Meta分析。结果共纳入13篇文献,4 342例研究对象。Meta分析结果显示,与携带C等位基因者比较,携带T等位基因者发生缺血性脑卒中的风险升高(均P<0.05);在纯合子、杂合子模型中,与携带CC基因型者比较,携带TT、CT基因型者发生缺血性脑卒中的风险升高(均P<0.05);在隐性基因模型中,与携带CT、CC基因型者比较,携带TT基因型者发生缺血性脑卒中的风险升高(P<0.05);在显性基因模型中,携带CT、TT基因型者发生缺血性脑卒中的风险与携带CC基因型者比较差异无统计学意义(P>0.05)。亚组分析结果显示,在等位基因模型、纯合子模型、杂合子模型和隐性基因模型中,中国人群整合素α2基因807位点多态性与缺血性脑卒中发病均存在相关性(均P<0.05);在5种基因模型中,西方人群整合素α2基因807位点多态性与缺血性脑卒中均无相关性(均P>0.05)。结论整合素α2基因807位点基因多态性与缺血性脑卒中易感性有关,携带T等位基因可能是罹患缺血性脑卒中的危险因素,而中西方人群该位点多态性对其缺血性脑卒中易感性的影响存在差异。

乙型肝炎病毒DNA整合与肝细胞癌发生发展的研究进展

肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)是全球发病率第6位,死亡率第3位的恶性肿瘤,其死亡率仅次于肺癌和结直肠癌,具有发病率高,病死率高,病程短,预后差的特点。根据世界卫生组织和国际癌症研究机构统计数据显示,在2021年内,全球HCC的新发病例数为905677例病例,而中国是全球HCC负担最重的国家之一,占据了410038例,约占全球新发病例的45.3%[1]。

基于Wnt1/β-catenin信号通路观察白藜芦醇对小鼠炎症相关结直肠癌的作用机制

目的基于无翅型小鼠乳房肿瘤病毒整合位点1(Wnt1)/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路观察白藜芦醇对炎症相关性结肠癌(CAC)小鼠的抑制机制。方法采用氧化偶氮甲烷(AOM)/葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导构建CAC小鼠,实验分为正常组、模型组、实验组、对照组,自造模开始,实验组每日定点腹腔注射100 mg/kg白藜芦醇,每日一次;对照组小鼠每日定点腹腔注射100 mg/kg的β-catenin通路抑制剂(iCRT14),每日一次;正常组、模型组小鼠腹腔注射等剂量的0.9%生理盐水。酶联免疫(ELISA)检测血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)的含量。免疫组化检测结肠组织中髓过氧化物酶(MPO)的表达。免疫印迹技术(Western-blot)检测小鼠结肠组织中骨髓细胞瘤原癌基因(c-Myc)、Wnt1、β-catenin的表达。结果与正常组相比,模型组小鼠血清中IL-6、TNF-α的含量,以及结肠组织中MPO、c-myc、Wnt1、β-catenin的表达明显升高(P均<0.05);与模型组相比,实验组和对照组小鼠血清中IL-6、TNF-α的含量,以及结肠组织中MPO、c-myc、Wnt1、β-catenin的表达明显降低(P均<0.05)。结论白藜芦醇能够在炎症相关结直肠癌小鼠中发挥抗肿瘤、抗炎性的作用,可能是通过抑制Wnt1/β-catenin信号的激活实现的。

血清wnt5a和LC3-Ⅱ联合MELD评分预测慢加急性乙型肝炎肝衰竭患者短期预后价值探讨

目的探讨血清无翅型MMTV整合位点5a(wnt5a)和微血管相关蛋白1轻链3-Ⅱ(LC3-Ⅱ)水平联合终末期肝病模型(MELD)评分预测慢加急性乙型肝炎肝衰竭(HBV-ACLF)患者短期预后的价值。方法2018年1月~2022年12月我院诊治的152例HBV-ACLF患者,常规内科和人工肝治疗,计算MELD评分,采用ELISA法检测血清wnt5a和LC3-Ⅱ水平,应用Logistic回归分析影响HBV-ACLF患者短期预后的因素,应用受试者工作特征(ROC)曲线评估血清wnt5a和LC3-Ⅱ联合MELD评分预测HBV-ACLF患者短期预后的效能。结果在治疗3个月内,本组HBV-ACLF患者死亡40例(26.3%);死亡组年龄、肝性脑病发生率、INR、血清总胆红素水平、MELD评分和wnt5a水平分别为(51.3±5.1)岁、70.0%、(3.2±0.9)、(441.5±89.7)μmol/L、(28.2±4.3)分和(2.8±1.5)ng/mL,均显著大于生存组【分别为(45.4±4.6)岁、20.0%、(1.7±0.3)、(280.6±73.1)μmol/L、(19.7±2.8)分和(1.3±0.2)ng/mL,P<0.05】,而外周血血小板计数和血清LC3-Ⅱ水平分别为(77.8±10.3)×10^(9)/L和(20.6±2.1)μg/mL,显著低于生存组【分别为(116.4±11.7)×10^(9)/L和(32.5±3.9)μg/mL,P<0.05】;多因素Logistic回归分析显示,年龄大、并发肝性脑病和血清wnt5a升高或血清LC3-Ⅱ水平降低为影响HBV-ACLF患者短期预后的独立影响因素(P<0.05);以MELD评分大于26.9分为截断点,其预测ACLF患者短期死亡的灵敏度和特异度分别为80.0%和92.9%,而检测血清wnt5a和LC3-Ⅱ水平也可以协助判断。结论血清wnt5a和LC3-Ⅱ联合MELD评分对HBV-ACLF患者短期预后具有较好的预测价值。

白血病融合基因EVI1的多态性与白血病发生风险的相关性

目的:探讨白血病融合基因亲嗜性病毒整合位点1(ecotropic viral integration site-1,EVI1)的多态性与白血病发生风险的相关性。方法:选取本院2017年2月~2019年2月收治的骨刺患儿90例作为研究组,同期选择健康人群83例作为对照组。清晨空腹抽取两组入选者的外周静脉血2 mL,采用PCR方法检测两组入选者EVI1的多态性情况,调查一般资料并进行相关性分析。结果:EVI1 rs17561基因共有CC、CA、AA三种基因型,两组入选者的EVI1 rs17561基因分布均符合Hardy-Weinberg平衡定律,研究对象具有群体代表性。两组入选者EVI1 rs17561基因型分布差异具有统计学意义(P<0.05),研究组的EVI1 rs17561基因CC基因型显著高于对照组(90.0%vs. 75.9%, P<0.05),研究组的等位基因C频率(显著高于对照组(96.7%vs. 80.7%, P<0.05)。在90例骨刺患儿中,6例患儿确诊为白血病,检出率为6.7%,均为CC基因型。研究组患儿EVI1 rs17561基因的CC基因型与血小板计数、危险度分层、诊断分型显著相关(P<0.05)。多元Logistic回归分析显示血小板计数、危险度分层、诊断分型为影响EVI1rs17561CC基因型的主要因素(P<0.05)。结论:白血病患儿融合基因EVI1多态性比较常见,多表现为rs17561CC等位基因,此等位基因可能与白血病患者的血小板计数、危险度分层、诊断分型显著相关,其中血小板计数、危险度分层、诊断分型为影响EVI1rs17561CC基因型的主要因素。

DKK3调控羊驼黑色素细胞中黑色素生成

Dickkopf-3(DKK3),Wnt/β-catenin信号通路中一个重要的抑制因子,可能参与调控黑色素生成过程。本文研究了DKK3在羊驼黑色素细胞中黑色素生成的作用。在羊驼黑色素细胞中,过表达DKK3显著下调Wnt1,Lef1,Myc和黑色素生成相关基因MITF及其下游基因TYR,TYRP1和TYRP2的表达,在mRNA和蛋白质水平均明显下降(P<0.05);总黑素,褐黑素和真黑素的含量分别下降80.30%、72.17%和64.60%(P<0.05)。相反,在羊驼黑色素细胞中转染siRNA-DKK3,一种小干扰RNA,可以显著上调Wnt1,Lef1,Myc和黑色素生成相关基因MITF及其下游基因TYR,TYRP1和TYRP2在mRNA和蛋白质水平的表达(P<0.05);总黑素、褐黑素和真黑素的含量分别增加1.65倍、1.25倍和1.21倍(P<0.05)。这些结果表明,DKK3可以通过Wnt/β-catenin信号通路介导MITF下调羊驼黑色素细胞中黑色素的生成。

Sfrp5/Wnt5a在人心外膜脂肪组织中的表达及其与冠心病的关系探讨

目的分析分泌型卷曲相关蛋白5(Sfrp5)/无翅型MMTV整合位点家族成员5a(Wnt5a)在人心外膜脂肪组织(EAT)中的表达及其与冠心病(CHD)的关系。方法选取2017年4月—2020年4月于平顶山市第二人民医院诊治的CHD病人179例和同期行瓣膜置换术的非CHD病人101例,收集研究对象临床资料、血管造影检查结果、EAT标本。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)法检测EAT中Sfrp5、Wnt5a表达水平,分析Sfrp5/Wnt5a在CHD发生和病情进展中的临床意义。结果CHD组体质指数(BMI)、总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、Wnt5a高于非CHD组,高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、脂联素(APN)、Sfrp5、Sfrp5/Wnt5a低于非CHD组,差异有统计学意义(P<0.05)。Sfrp5与HDL-C、APN呈正相关,与收缩压、舒张压、高血压比例呈负相关(P<0.01);Wnt5a与HDL-C、APN呈负相关(P<0.01);Sfrp5/Wnt5a与HDL-C、APN呈正相关(P<0.05),与收缩压、舒张压、高血压比例呈负相关(P<0.01);Sfrp5与Wnt5a呈负相关(P<0.05)。Sfrp5、Sfrp5/Wnt5a是CHD的保护因素(P<0.05),Wnt5a为危险因素(P<0.05)。血管造影检查确定179例CHD病人Gensini积分轻度31例,中度57例,重度91例;冠状动脉节段权重(CAGE)≥20组82例,CAGE≥50组97例。轻度组、中度组、重度组Sfrp5、Wnt5a比较差异有统计学意义(P<0.05);CAGE≥50组和CAGE≥20组Sfrp5、Wnt5a比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论CHD病人EAT中Sfrp5降低,Wnt5a升高,Sfrp5为CHD发生和病情进展的保护因素,Wnt5a为危险因素,Sfrp5/Wnt5a保持平衡可能有助于调节机体糖脂代谢功能。

利用CRISPR/Cas9系统敲除绵羊皮肤成纤维细胞Wnt2基因的研究

为了研究无翅基因相关整合位点2（Wnt2）在绵羊毛囊发育中的作用,通过CRISPR/Cas9系统介导的基因编辑技术在绵羊原代皮肤成纤维细胞中敲除Wnt2基因,经T7E1酶切试验进行敲除结果验证,实时荧光定量PCR分析Wnt2、E-钙黏蛋白（CDH1）、半光天冬氨酸酶3（Caspase3）和成纤维细胞生长因子5（FGF5）在敲除后的表达量变化。结果显示：绵羊原代皮肤成纤维细胞中Wnt2基因敲除成功,编辑效率约14.35%;Wnt2相对表达量极显著下调（P〈0.01）,CDH1相对表达量极显著上调（P〈0.01）,Caspase3及FGF5表达上调显著（P〈0.05）。结果表明：Wnt2基因对毛囊的生长发育具有促进作用。

左归降糖解郁方对糖尿病并发抑郁症模型大鼠海马齿状回神经元树突及Wnt5a/RhoA信号通路的影响

目的探讨左归降糖解郁方治疗糖尿病并发抑郁症的可能作用机制。方法60只大鼠随机分为正常组、模型组、无翅型MMTV整合位点家族成员5a(Wnt5a)激动剂组、左归降糖解郁方组、左归降糖解郁方+Wnt5a抑制剂组,每组12只。除正常组外,其余各组大鼠采用高脂饲料饲养、链脲佐菌素注射和慢性温和不可预知应激联用法建立糖尿病并发抑郁症大鼠模型。造模成功后Wnt5a激动剂组大鼠给予双侧海马立体定位注射Wnt5a激动剂Foxy-5各5μl,连续7天;左归降糖解郁方组给予左归降糖解郁方20.52 g/(kg·d)灌胃;左归降糖解郁方+Wnt5a抑制剂组进行灌胃给药和双侧海马立体定位注射Wnt5a抑制剂Box5,给药剂量和注射方法同上。正常组和模型组给予10 ml/(kg·d)生理盐水灌胃。各组灌胃均连续4周。干预结束后采用强迫游泳实验(不动时间)和旷场实验(活动次数)评价大鼠的抑郁样行为;检测大鼠的血糖和胰岛素含量,并计算胰岛素抵抗指数;采用高尔基染色观察大鼠海马齿状回神经元的树突形态;采用5-溴脱氧尿嘧啶核苷(Brdu)注射及免疫荧光检测齿状回神经元增殖水平;采用RT-qPCR和Western blot法检测齿状回Wnt5a、Ras同源物基因组成员A(RhoA)和Rho同源物相关卷曲螺旋蛋白激酶1(ROCK1)mRNA和蛋白表达。结果与正常组比较,模型组大鼠血糖、胰岛素及胰岛素抵抗指数均显著升高,不动时间显著延长,活动次数显著减少,海马齿状回中Brdu积分光密度值和Wnt5a、RhoA、ROCK1蛋白及mRNA表达均显著降低(P<0.05或P<0.01);大鼠海马齿状回神经元可见树突分支明显减少或断裂,长度缩短。与模型组比较,左归降糖解郁方组和左归降糖解郁方+Wnt5a抑制剂组大鼠血糖、胰岛素及胰岛素抵抗指数显著降低(P<0.05或P<0.01);Wnt5a激动剂组和左归降糖解郁方组大鼠不动时间显著缩短、活动次数显著增加、Brdu积分光密度值显著升高,Wnt5a、RhoA、ROCK1蛋白及mRNA表达均升高(P<0.05或P<0.01),海马齿状回神经元的树突分支数量显著增加、长度延长,树突的复杂性增加。与Wnt5a激动剂组比较,左归降糖解郁方组大鼠血糖、胰岛素及胰岛素抵抗指数显著降低,不动时间显著延长,活动次数显著减少,Brdu积分光密度值显著降低;除左归降糖解郁方组Wnt5a mRNA外,左归降糖解郁方组和左归降糖解郁方+Wnt5a抑制剂组Wnt5a、RhoA、ROCK1蛋白及mRNA表达均降低(P<0.05或P<0.01)。与左归降糖解郁方组比较,左归降糖解郁方+Wnt5a抑制剂组Wnt5a、RhoA、ROCK1蛋白及mRNA表达均降低(P<0.05或P<0.01)。结论左归降糖解郁方可改善糖尿病并发抑郁症模型大鼠的高血糖和抑郁样行为,其抗抑郁作用可能与激活海马Wnt5a/RhoA信号,促进齿状回神经元树突生长有关。

小檗碱靶向Wnt5a/NPC1信号通路调节脂自噬抑制动脉粥样硬化形成

目的:探讨小檗碱(BBR)在防治小鼠动脉粥样硬化(AS)病变中对脂自噬的调节作用及分子机制。方法:采用载脂蛋白E基因敲除(ApoE-/-)小鼠50只随机分为AS模型组、阿托伐他汀组(5 mg·kg-1)、BBR低、中、高剂量组(2.5、5、10 mg·kg-1);另设10只C57BL/6J小鼠为空白组。12周后苏木素-伊红(HE)及油红O染色检测主动脉AS斑块病理学改变;生化检测血清脂质水平;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血清炎症因子白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平、氧化应激标记物活性氧(ROS)含量及血清脂自噬标记物Beclin1、微管相关蛋白1轻链3Ⅱ(LC3Ⅱ)水平;黄嘌呤氧化酶法检测血清超氧化物歧化酶(SOD)活力;免疫组化(IHC)检测主动脉无翅型MMTV整合位点家族成员5a(Wnt5a)、C1型尼曼-匹克蛋白(NPC1)分布;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测主动脉Wnt5a、NPC1蛋白表达。结果:与空白组比较,AS模型组小鼠可见显著的AS斑块形成,血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、IL-6、TNF-α、ROS、主动脉Wnt5a分布及蛋白表达均显著升高(P<0.01),血清高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、SOD、Beclin1、LC3Ⅱ、主动脉NPC1分布及蛋白表达均显著降低(P<0.01);与AS模型组比较,阿托伐他汀组、BBR中剂量组及BBR高剂量小鼠AS斑块面积明显减少(P<0.05,P<0.01),血清TC、TG、LDL-C、IL-6、TNF-α、ROS、主动脉Wnt5a分布及蛋白表达均明显降低(P<0.05,P<0.01),血清HDL-C、SOD、Beclin1、LC3Ⅱ、主动脉NPC1分布及蛋白表达均明显升高(P<0.05,P<0.01);与阿托伐他汀组比较,BBR中剂量组小鼠以上检测指标差异无统计学意义。结论:BBR可通过竞争性结合Wnt5a激活NPC1表达,上调脂自噬水平降低血脂,抑制炎症介质的释放及氧化应激损伤从而发挥防治AS功效。