对无菌试验培养基灵敏度试验法准确性的初步研究

目的:研究《中国生物制品规程》(2000年版)(简称《规程》)中需氧菌和厌氧菌无菌试验培养基灵敏度试验法及真菌无菌试验培养基灵敏度试验法的准确性。方法:按照《规程》中需氧菌和厌氧菌无菌试验培养基灵敏度试验法及真菌无菌试验培养基灵敏度试验法,同时采用平皿[乙型溶血性链球菌采用血琼脂平皿,短芽孢杆菌采用营养琼脂平皿,生孢子梭状芽孢杆菌(简称生孢梭菌)采用硫乙醇酸盐软固体琼脂平皿(厌氧培养),白色念珠菌采用真菌培养基琼脂平皿]计数法,在相同稀释度及培养温度条件下平行进行1mL菌液的菌落形成单位(Colony Forming Units,CFU)计数。将菌液稀释至与标准比浊管相同之浓度,然后作10倍系列稀释。将稀释度为10-6～10-8的短芽孢杆菌、10-6-10-8的生孢梭菌,10-7～10-9的乙型溶血性链球菌菌液各1 mL,分别接种到9 mL硫乙醇酸盐培养基中;将稀释度为10-5～10-7的白色念珠菌菌液各1 mL,分别接种到9mL真菌培养基。每个稀释度至少接种3管,用未接种培养基作对照。将接种短芽孢杆菌的培养基,置35℃培养5 d,接种生孢梭菌或乙型溶血性链球菌的培养基,置35℃培养3 d,接种白色念珠菌的培养基,置25℃培养5 d,同时重复3次试验,记录结果。用每个菌种,按照需氧菌和厌氧菌无菌试验培养基灵敏度试验法及真菌无菌试验培养基灵敏度试验法重复进行3次灵敏度试验。结果:按照《规程》中需氧菌和厌氧菌无菌试验培养基灵敏度试验法及真菌无菌试验培养基灵敏度试验法,同一种培养基,用同一质控菌种重复3次灵敏度试验,结果往往不同,尤其是用乙型溶血性链球菌进行质控时,更为明显。平皿CFU计数与比浊菌数常有显著差异。结论:《规程》中需氧菌和厌氧菌无菌试验培养基灵敏度试验法及真菌无菌试验培养基灵敏度试验法准确性欠佳。

水稻有机营养试验供试无菌苗的筛选和培育方法

对水稻有机营养试验供试无菌苗准备过程中种子灭菌、检菌、无菌苗筛选及培育等技术环节作一探讨．采用本试验方法，水稻种子的灭菌率可达６６％以上，发芽率可达８１％以上，可为水稻无菌培养试验提供大量符合试验要求的无菌苗．

荷叶铁线蕨的无菌培养

荷叶铁线蕨(Adiantum reniforme var.sinense)属稀有单叶型铁线蕨,目前仅存于四川万县及邻近县的少数地区,种群小,濒临灭绝,为国家二类保护植物。它在学术、医药和观赏等各方面具有一定价值。为保护和发展这种植物,陈卓良等(1988)进行了引种栽培,证明在武汉和万县等地可移植成功,并可分兜繁殖,但速度很慢。林尤新(1989)首先报道在温室中用孢子繁殖获得成功。为了更好的保护和大量繁殖这种植物我们进行了无菌培养试验。