动物性食品源大肠杆菌O血清型鉴定及其K88菌毛基因检测

本研究对河北省冀东地区农贸市场和超市采集的生猪肉、生鸡蛋和生羊肉等分离得到的20株大肠杆菌进行大肠杆菌血清型鉴定;并检测不同血清型大肠杆菌的K88菌毛基因。采用常规方法进行大肠杆菌的O血清型鉴定,用PCR方法检测K88菌毛基因。分离鉴定的20株大肠杆菌有7种血清型,包括O38、O78、O88、O11、O107、O91、O9,其中O38、O78为优势血清型菌,均占分离菌株的25%(5/20)。在分离的动物性食品源大肠杆菌中有30%(6/20)的菌株K88菌毛基因扩增呈阳性。结果表明,O78、O38为冀东地区动物性食品源大肠杆菌常见血清型,30%(6/20)的菌株K88菌毛基因扩增阳性。

无血清悬浮分离培养法分离、培养、鉴定脊髓源性神经干细胞

背景:目前临床上尚未发现完全治愈脊髓损伤,使其达到结构及功能恢复的治疗方法。已有的神经营养因子治疗方法促进神经细胞再生的效果有限,而干细胞移植治疗可能是现阶段修复脊髓损伤的有效方法之一。目的:无血清悬浮分离培养法培养胎鼠脊髓源性神经干细胞,采用形态学、免疫荧光技术和多向分化能力进行神经干细胞鉴定。方法:应用悬浮分离培养法,培养纯化孕13.5 d C57BL/6胎鼠的脊髓源性神经干细胞。倒置显微镜观察细胞形态学变化;CCK-8法检测细胞的增殖能力。免疫荧光技术检测Nestin和Sox2表达;使用自然分化法验证第4代脊髓源性神经干细胞多向分化特性,明确其分化能力。结果与结论:采用无血清悬浮分离培养法可以顺利获取脊髓源性神经干细胞。培养的脊髓源性神经干细胞增殖活性良好,高表达Nestin和Sox2,且两种标记物与DAPI核染高度均匀吻合,说明细胞纯度高。进一步诱导分化显示,细胞可以向GFAP和Tuj1阳性细胞分化,证明脊髓源性神经干细胞分化潜能较好。该实验可建立一套体外培养脊髓源性神经干细胞分离、培养、纯化及鉴定体系,为后续神经干细胞的应用研究奠定基础。

三种培养基对人尿源性干细胞生长和增殖的影响

背景:人尿源性干细胞研究较少,目前尚无稳定高效的培养方法。目的:比较3种培养基对人尿源性干细胞生长和增殖的影响,优化其培养方法。方法:离心、提纯尿液获取人尿源性干细胞,利用贴壁法分别在角质细胞无血清培养基、祖细胞培养基以及尿源性细胞培养基(角质细胞无血清培养基和祖细胞培养基以等比例混合而成)进行培养,观察细胞生长状态,MTT法检测细胞增殖情况,绘制生长曲线。结果与结论:3种培养基均能够培养出尿源性干细胞,尿源性干细胞在角质细胞无血清培养基中缓慢生长,在祖细胞培养基中生长较快,在尿源性细胞培养基中生长最好。结果表明,尿源性细胞培养基为人尿源性干细胞最佳生长培养基,能够快速、高效的培养出人尿源性干细胞。

动物源肠外致病性大肠杆菌毒力因子研究进展

动物源肠外致病性大肠杆菌（Extraintestinal pathogenic Escherichia coli,ExPEC）是一种能够引起动物肠道外严重感染的病原体,包括新生儿脑膜炎致病性E.coli（Neonatal meningitis E.coli,NMEC）,尿道致病性E.coli（Uropathogenic E.coli,UPEC）,败血症E.coli（如禽致病性E.coli,

体外分离培养人源性脂肪间充质干细胞及其鉴定

目的体外分离培养人皮下脂肪来源的细胞群,依据ISCT公布的国际标准规定通过形态观察、免疫表型检测及多种分化潜能的鉴定证实体外获得的细胞群为脂肪来源的间充质干细胞。方法采用0.1%胶原酶I及0.25%胰酶双消化法进行细胞的体外分离,LG-DMEM培养基加入体积分数为10%胎牛血清,于37℃、5%CO2的饱和湿度条件下培养,待细胞生长至70%～80%融合时消化传代扩增。通过倒置显微镜观察细胞形态;流式细胞仪检测细胞免疫表型表达;取第3代细胞,于基础培养基中分别加入成骨(10%胎牛血清、0.1mmol/L地塞米松、50mg/L抗坏血酸、10mmol/Lβ-磷酸甘油)

不同动物源多杀性巴氏杆菌荚膜分子分型及其致病性研究

为了确定西南民族大学动物医学实验室分离的鸭源、猪源、牛源和山羊源多杀性巴氏杆菌(Pm),即Q1、Z1、N1、Y1株的荚膜血清型及其致病性,试验采用PCR方法对分离的这4株不同动物源多杀性巴氏杆菌的种属和荚膜血清型进行鉴定,对目的基因测序分析,并用Balb/c小鼠对分离菌的致病性进行研究。结果表明:4株菌均为多杀性巴氏杆菌;鸭源Q1株为荚膜血清A型、猪源Z1株和牛源N1株为荚膜血清B型、山羊源Y1株为荚膜血清D型;对目的基因测序后与GenBank上已公布的相应荚膜血清型比对,同源性为98%～100%;不同动物源多杀性巴氏杆菌对Balb/c小鼠的致病性研究显示,猪源荚膜血清B型多杀性巴氏杆菌对Balb/c小鼠有较强的致病力。

进出口动物源性食品中志贺氏菌检验方法优化

为建立进出口动物源性食品中志贺氏菌检验方法,从检测条件入手,通过增菌方式、分离培养基特异性和生化鉴定优化方法,以不同种类食品检测和不同实验室检测验证方法。确定的检测条件为志贺氏菌增菌液中(41.5±1)℃厌氧培养16～20h作为志贺氏菌检测的增菌方式;在分离上,同时使用MAC、XLD和HE三种平板,以提高志贺氏菌的检出率;选择了微量生化管和API20E对志贺氏菌和其他肠杆菌进行了生化鉴定和比较,效果明显。以此方法检测人工污染食品均检出志贺氏菌,各实验室也均检出志贺氏菌。

常见动物源致病性支原体概述

支原体是一类无细胞壁的细菌，能在无细胞的人工培养基中生长繁殖，该类细菌广泛分布于植物、动物和人体等自然界中，种类繁多，其中有30多种对人和畜禽具有致病性。1898年，法国Nocard及Roux首次用含动物血清的人工培养基分离培养成功，当时命名为胸膜肺炎微生物（PleuropneumoniaeOrganism，PPO），

肺炎球菌菌种复苏用无动物源性固体培养基的筛选

目的 筛选一种可复苏肺炎球菌(Streptococcus pneumoniae,Spn)菌种的无动物源性物料的固体培养基。方法 首先选取19F血清型Spn对无动物源材料的9种配方培养基进行初步筛选,再对其他23个疫苗血清型Spn进行培养测试验证。通过对传代15代的培养物进行菌种检定与荚膜多糖抗原基因序列分析,判断筛选的配方培养基对各型菌种传代稳定性的影响。用此培养基复苏的菌种按生产程序进行发酵培养,分析培养情况及荚膜多糖抗原产量及质量,确定筛选培养基的生产适用性。结果 在筛选的配方固体培养基上,各型Spn培养11~15h时活菌数量较高,15代终末代次的菌种检定、抗原基因序列与对照(羊血固体培养基培养的菌种)相比无差异。用其复苏的菌种发酵培养后,菌体生长与荚膜多糖产量略有提高,且荚膜多糖相关检定指标均符合《中国药典》三部(2020版)标准。结论 筛选的无动物源性固体培养基具有良好的适用性,可取代血液来源培养基用于Spn疫苗生产菌种复苏。

甘南玛曲县及其周边地区鼠疫自然疫源性调查结果

目的 调查玛曲及其周边地区是否存在鼠疫自然疫源地。方法 对自然景观、宿主动物、传播媒介等进行现场调查,对所获材料进行血清学和细菌学检验。结果 未检出IHA阳性血清,未分离出鼠疫菌,检出3份RIP阳性血清,但该地区自然景观及主要宿主动物分布和媒介蚤构成表明当地具备鼠疫自然疫源地存在的基本条件。结论 玛曲及其周边地区可能存在鼠疫自然疫源地,建议加强监测,及时发现和控制疫情。

利用噬菌体防控食源性沙门氏菌

噬菌体是传统抗菌剂的天然替代品,食品工业已证明噬菌体控制细菌性病原体是有效的,导致不同种类噬菌体产品的开发。食品工业使用特定的噬菌体可防止产品腐烂和细菌性疾病的传播,最终保证食品尤其是动物源性食品生产、加工和处理的安全性。1沙门氏菌沙门氏菌的一般特征是革兰氏阴性杆菌、兼性厌氧菌。自1855年西奥博尔德·史密斯首次从猪体上发现沙门氏菌以来,已经鉴定和报告的血清型约2600多种。

本期专题：骨髓间充质干细胞的培养基

1无血清神经培养基体外培养大鼠骨髓源性神经干细胞，见2010年14卷19期3441页。 2体外无血清培养基条件下诱导人骨髓基质细胞为神经干细胞的特征．见2007年11卷20期4048页。

广西山羊乙型脑炎血清流行病学初步调查分析

日本乙型脑炎（Japanese encephalitis B,JE）又称流行性乙型脑炎、乙型脑炎或乙脑,是由乙脑病毒（Japanese encephalitis virus,JEV）引起的一种蚊媒传播的自然疫源性人兽共患病毒性传染病,是我国医学乙类法定传染病,二类动物疫病,世界动物卫生组织（OIE）规定的必须报告的动物疫病[1]。在自然条件下,JEV可以感染人和多种动物,

无血清培养Vero细胞及其传代稳定性分析

目的建立无血清无动物源性培养基(virus production-serum-free medium,VP-SFM)培养Vero细胞的工艺,并分析其传代稳定性。方法采用VP-SFM适应培养Vero细胞,建立无血清无动物源性Vero细胞库,对细胞库进行常规检定;绘制VP-SFM培养Vero细胞的生长曲线;比较140、150、160代Vero细胞在VP-SFM中培养的比生长速率(μ)和分裂次数(Cd);比较142、147、153代Vero细胞在VP-SFM中培养的狂犬病病毒滴度;比较无血清与含血清培养140、150、160代Vero细胞的μ和Cd值;分别在250 ml spinner flask中加入2 g/L cytodexⅠ、在3 L生物反应器中加入3 g/L cytodexⅠ培养Vero细胞,观察细胞贴壁和生长情况。结果建立的无血清无动物源性Vero细胞库,细胞密度为4×10~6个/ml,冻存前细胞活率为100%,复苏后细胞平均活率为(94.20±3.95)%,无菌检查和支原体检查合格;细胞在VP-SFM中复苏传代后生长良好,经过24 h潜伏期后,进入对数生长期,第8天进入平台期,第12天达最大细胞密度20.5×10~5个/ml,并维持至第14天,活细胞数开始下降,最大μ值为0.025 4 h^(-1)。Vero细胞在无血清培养基中传代稳定性较好,140、150、160代Vero细胞在VP-SFM培养的μ和Cd值差异无统计学意义(P>0.05);142、147、153代Vero细胞在VP-SFM培养的狂犬病病毒滴度差异无统计学意义(P>0.05);140、150、160代Vero细胞在无血清和含血清培养基培养的μ和Cd值差异无统计学意义(P>0.05)。在生物反应器微载体系统中,采用无血清培养基培养Vero细胞,细胞贴壁及生长状态良好。结论初步建立无血清、无动物源性物质的Vero细胞库,采用方瓶静置培养或微载体搅拌培养,细胞生长状态均良好,传代稳定性也较好。

莱姆病病原学和血清学检验

莱姆病病原学和血清学检验陈戊申综述谭丽霞（审）莱姆病（Ｌｙｍｅｄｉｓｅａｓｅ）是近２０年才被认识的自然疫源性疾病，因蝉类在吸血活动中将Ｂ．ｂｕｒｇｄｏｒｆｅｒｉ传给人而发生，小型啮齿动物是其主要的保存宿主和传染原［１］。１９８５年以来我国２０个省份证...

一起鸡感染饲料源沙门氏菌的诊断

沙门氏菌是一种饲料中常见的主要肠道杆菌,能够引起动物的食源性败血症。同时,沙门氏菌还是一种人畜共患病原菌,畜禽的沙门氏菌感染主要与带菌动物及所食用的动物性饲料中的沙门氏菌的污染有关。近年来,由于抗生素大量应用于养殖业中,导致动物源沙门氏菌耐药性不断增加,对人、畜危害十分严重。现将诊断的一起病例报道如下。

广东省鼠疫静息期鼠形动物耶尔森氏菌调查

目的查明广东省鼠疫静息期鼠形动物3种致病性耶尔森氏菌感染情况。方法鼠血清56℃30min灭活供试,取肝、脾压印和增菌3周后分离培养;取舌、回盲部内容物放入PBS缓冲液中在4℃增菌3周经KOH溶液处理后涂布IN培养基28℃24h,挑取可疑菌落鉴定。结果未检出鼠疫菌和假结核菌。检出小肠结肠炎菌2株,中间型耶尔森氏菌1株。结论广东省鼠疫处于静息期。

河南省部分地区牛衣原体病血清流行病学调查

衣原体病（Chlamydiosis）是一种人畜共患病，是由衣原体引起的牛、猪、羊等多种动物均可感染的疾病。衣原体专性细胞内寄牛，是一种十分重要的自然疫源性疾病病原体。动物感染后引起流产、肠炎、结膜炎等疾患，影响动物的生产性能。近年米，牛感染衣原体也较多发生，引发牛流产，给牛场带来一定的经济损失；感染牛也可能将该病传染给饲养管理人员，对人员健康造成一定影响。

脑源性多器官功能障碍综合征模型血清内毒素及其受体基因表达

目的探讨急性前脑缺血致多器官功能障碍综合征(MODS)模型血清内毒素含量及其受体在各脏器基因表达的规律,分析脑原性多器官功能障碍综合征(CMODS)的发生机制. 方法随机将54只Wistar大鼠分为正常对照组(6只)、假手术组(8只)和前脑缺血组(40只),后者又被随机分为12 h、24 h、36 h、48 h、和72 h时相点的5个亚组,每亚组各8只;建立大鼠急性前脑缺血模型;分别采用偶氮显色法鲎试验定量法测定血清内毒素和原位杂交技术测定肺、肝、肠和肾组织CD14mRNA水平;使用CMIA真彩色医学图像分析系统,检测CD14mRNA的相对含量. 结果大鼠急性前脑缺血后12 h血清内毒素升高(0.184±0.055)Eu/L,24 h达高峰(0.639±0.064)Eu/L,72 h基本恢复至正常水平(0.117±0.024)Eu/L;肺、肝、肠和肾组织CD14mRNA的表达也在缺血后12 h升高,24～36 h达高峰,48 h后下降,并以肺脏变化最显著(P＜0.001);正常对照组和假手术组CD14mRNA在各脏器均有不同程度的表达,其中两组肺脏的表达有显著性差异(P＜0.01).内毒素与其受体在各脏器的表达均存在显著相关性(均为P＜0.01),其中与肠、肺组织CDmRNA表达相关最显著(P＜0.001). 结论急性前脑缺血致MODS大鼠存在内毒素血症;急性脑血管病→应激反应→肠道黏膜屏障损害→内毒素易位→内毒素血症→内脏器官功能障碍→MODS是CMODS发生的重要过程,肠道机制是CMODS发生的重要机制之一.