苏云金芽孢杆菌无质粒突变株BMB171的转化和表达性能

研究了苏云金芽孢杆菌无质粒突变株ＢＭＢ１７１的转化性能和表达ｃｒｙ１Ａｃ和ｃｒｙ１Ｃａ基因的性能．用ｐＨＴ３１０１、ｐＢＭＢ３０５、ｐＢＭＢ１７３６、ｐＢＭＢ６７１、ｐＢＴＬ１和ｐＨＶ１２４９等６种外源质粒电转化无质粒突变株ＢＭＢ１７１，其转化频率分别是Ｂｔ４Ｑ７、Ｂｔ４Ｄ１０和Ｂｔｉ．ＩＰＳ．７８／１１等３种常用受体菌相应最高转化频率的１０００、６．７、１２．５、６６．７、３５００和２倍，其每μｇＤＮＡ的最高转化子数达１０７．导入ＢＭＢ１７１的外源质粒的稳定性与其复制子类型和质粒大小有关．无质粒突变株ＢＭＢ１７１表达ｃｒｙ１Ａｃ基因的表达量高于对照受体菌Ｂｔ４Ｑ７，略低于Ｂｔ４Ｄ１０和Ｂｔｉ．ＩＰＳ．７８／１１，而ＢＭＢ１７１表达ｃｒｙ１Ｃａ基因的表达量高于这３种受体菌；对小菜蛾３龄幼虫和甜菜夜蛾初孵幼虫的毒力测定结果表明，ＢＭＢ１７１表达ｃｒｙ１Ａｃ基因的杀虫毒力高于Ｂｔ４Ｑ７和Ｂｔ４Ｄ１０，略低于Ｂｔｉ．ＩＰＳ．７８／１；

质粒消除对冠菌素产生菌T1828生物学效应的影响

采用十二烷基硫酸钠(SDS)和提高生长温度结合法消除T1828菌株质粒后,筛选到无质粒突变株ZWL-15。以原始亲株T1828和无质粒突变株ZWL-15为出发菌株,考察了两者部分生物学特性。结果表明,菌株ZWL-15生长速率快于T1828,进入对数期和稳定期的时间分别提前1h和4 h。在菌株ZWL-15发酵过程中添加0.01%的SDS有利于冠菌素的合成,最适发酵温度比T1828升高5℃,达到35℃,发酵周期提前4 h,COR相对值是T1828的两倍左右。ZWL-15传代实验表明该突变株很稳定,且对氨苄青霉素敏感,氨苄青霉素基因初步定位于该菌属质粒上。