日本沼虾表皮Serpin基因克隆及免疫功能的初步研究

丝氨酸蛋白酶级联反应介导的黑化是甲壳动物重要的免疫反应,丝氨酸蛋白酶抑制剂(serine proteinase inhibitor,Serpin)是黑化反应的重要调节因子,而甲壳动物表皮Serpin的有关研究较少.为了探索表皮Serpin在日本沼虾(Macrobrachium nipponense)免疫反应中的功能,基于前期转录组数据,利用PCR、RACE和生物信息学从日本沼虾表皮克隆并鉴定了1个新的Serpin基因,命名为MnSerpin,利用RT-qPCR和RNAi等方法,研究了该基因时空表达模式、嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)攻毒后表皮MnSerpin的转录水平以及日本沼虾死亡率的变化.结果显示,MnSerpin cDNA全长2181 bp,编码419个氨基酸,具有Serpin结构域.MnSerpin在腹背部表皮、鳃、血细胞、胃、心、肝胰腺等多种组织均有表达;表皮MnSerpin的表达与蜕皮周期有关,与蜕皮间期(C期)相比,在蜕皮后早期(A期)最高,增加6.06倍(P<0.01).嗜水气单胞菌攻毒后,表皮MnSerpin的相对表达量在6 h达到了峰值,比对照组增加3.77倍(P<0.01).在腹背部第二节的关节膜内注射3μg dsRNA溶液,每12 h注射1次,共注射3次,最后一次注射后12 h,干扰效率最高,表皮MnSerpin的相对表达量同比下降58%(P<0.01).在干扰效率最高的时间点攻毒,120 h内,干扰组虾的累计死亡率比未干扰组增加16%(P<0.01).结果表明,日本沼虾表皮MnSerpin是重要的免疫因子,MnSerpin的表达存在组织以及蜕皮周期不同阶段的差异,该基因表达下调能显著增加嗜水气单胞菌感染虾的死亡率.

日本沼虾高效生态养殖技术浅析

市场上日本沼虾的需求量不断增加,但目前日本沼虾亩产量已处于瓶颈阶段。面对不断增长的市场需求量,如何提高日本沼虾亩产量成了日本沼虾养殖的首要问题。本文通过对日本沼虾养殖的初步研究和对养殖户的随机调研等方法,研究当地的养殖流程及病害防治手段。结果发现,当地日本沼虾池塘养殖中存在近亲育苗从而导致种质退化严重、日常饲养管理过程中缺少预防意识而盲目用药、捕捞时使用溴氰菊酯赶捕等问题。针对以上问题,本研究针对性地提出了引进优质苗种、采取套养模式、树立以防为主的意识合理用药、采用轮捕与集中捕捞相结合替代赶捕等解决对策。

饲料中添加白术提取物对日本沼虾生长、健康和抗病力的影响

文章研究了饲料中添加不同水平的白术提取物(Extraction of Atractylodes macrocephala Koidz,EAMK)对日本沼虾(Macrobrachium nipponense)生产性能、器官指数、血液生化指标、抗氧化能力、消化系统健康和抗病力的影响。实验以初始体重为(0.21±0.05)g的日本沼虾为研究对象,设置6个饲料处理,白术提取物添加量为0、100、200、400、600和1200 mg/kg(Control、A100、A200、A400、A600和A1200)。每个饲料处理设6个重复,每个养殖缸放入60尾虾,实验周期为75d,每天记录采食量。养殖实验期间监测水体温度为(20±3)℃,pH为7.8—8.2,亚硝酸盐为0.16—0.2 mg/L,氨氮为0.02—0.1 mg/L,溶氧>6.0 mg/L。在实验结束后,分析日本沼虾生长性能、血清生化指标、肠道消化酶和免疫指标及肝胰腺抗氧化能力,观察日本沼虾的组织结构,用嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)进行攻毒并记录存活率。结果表明:饲料中添加200 mg/kg的白术提取物可以显著提高日本沼虾的增重率(WGR)和特定生长率(SGR),并显著降低饲料系数(FC;P<0.05)。各处理组间的肝体比、出肉率和体成分均无显著性差异(P>0.05);A100组的血清葡萄糖(Glu)含量显著高于对照组(P<0.05),并能显著降低谷丙转氨酶(ALT)活性(P<0.05);各白术提取物处理组的血清甘油三酯(TG)和总胆固醇含量(TC)均显著低于对照组(P<0.05);A400组的肝胰腺GSH-Px活性显著高于A100组和对照组(P<0.05),A600组的肝胰腺CAT活性显著高于其他各组(P<0.05),A200和400组的肠道iNOS的活性显著高于对照组(P<0.05);A400组的日本沼虾肠绒毛显著高于对照组(P<0.05),并且减轻了肝细胞的空泡化,促进了鳃的完整性;A100处理组的嗜水气单胞菌攻毒后存活率显著高于对照组(P<0.05)。综上所述,白术提取物可以提高日本沼虾的生长性能和抗氧化能力,提高抗病力,在日本沼虾饲料中适宜添加量为100—400 mg/kg。

超高效液相色谱-串联质谱法定量检测日本沼虾不同组织中氨基脲含量

目的建立超高效液相色谱-串联质谱法(ultra performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry,UPLC-MS/MS)测定日本沼虾(Macrobrachium nipponense)不同组织部位中不同形态氨基脲(semicarbazide,SEM)的检测方法。方法样品用66.7%甲醇溶液洗脱后,经盐酸酸化水解,2-硝基苯甲醛过夜衍生,调pH至7.3~7.4后,用乙酸乙酯提取,分析物采用UPLC-MS/MS定性检测,稳定同位素内标法进行定量测定。结果SEM在0.25~20.00μg/kg范围内线性关系良好,相关系数大于0.999,肌肉、头壳、背壳、头足胸、眼柄和鳃6个组织的方法检出限为0.25μg/kg(S/N≥3),定量限为0.50μg/kg(S/N≥10),肝胰腺的方法检出限为0.5μg/kg,定量限为1.0μg/kg,相对标准偏差不大于5.20%。虾壳中SEM含量最高,肌肉中含量最低,肌肉中SEM主要以游离态形式存在,虾壳中SEM主要以结合态形式存在。结论本方法灵敏度高、重现性好,可用于日本沼虾不同组织中不同形态SEM的定量测定。日本沼虾不同组织中SEM的存在形态与含量均存在巨大差异。

放养模式对日本沼虾生长性状与肌肉营养成分的影响

对3种放养处理[T1,与中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)和少量鱼类共养;T2,与沙塘鳢(Odontobutis obscura)共养;T3,与鳙(Aristichthys nobilis)共养]条件下日本沼虾(Macrobrachium nipponense)虾体的生长性状和肌肉营养成分进行分析与比较,以期为淡水经济虾类养殖模式的优化提供参考。结果发现:日本沼虾的全长、头胸甲长、体长和体重在不同放养模式下差异显著(P<0.05),肌肉中的粗蛋白、粗脂肪、粗灰分和水分含量分别为16.54%~17.97%、1.86%~2.25%、0.95%~1.12%和78.69%~80.56%,粗灰分含量在各处理间差异显著。共检出氨基酸17种,其中,必需氨基酸7种,必需氨基酸指数为70.88~73.13,不同处理间丙氨酸含量差异显著;共检出脂肪酸16种,不同处理间脂肪酸种类组成和C18:2 n-6、多不饱和脂肪酸的含量差异显著;检测的9种矿物质元素(Na、K、Ca、Mg、Fe、Cu、Zn、Mn、Cr)中,Na、Mn、Fe、Zn含量在不同处理间差异显著。研究表明,放养模式对日本沼虾的生长性状和肌肉营养具有显著影响,可能与不同放养结构和管理措施造成的养殖环境和食物资源差异有关,生产中需根据放养模式调节营养成分的添加。相较之下,日本沼虾与中华绒螯蟹和少量鱼类共养时,虾肉的鲜美程度、营养价值和保健价值相对更高,可选择该模式来改善养殖虾的营养品质。

饲料中添加过氧化氢酶对日本沼虾生长性能、抗氧化能力、免疫性能和肠道菌群结构的影响

本试验旨在研究饲料中添加不同水平过氧化氢酶(CAT)对日本沼虾生长性能、抗氧能力、免疫性能和肠道菌群结构的影响。试验共配制6种饲料,分别在基础饲料中添加0(CAT1,对照组)、75(CAT2组)、150(CAT3组)、300(CAT4组)、600(CAT5组)和1200 U/kg(CAT6组)的CAT,饲喂1080只初始体重为(0.10±0.03)g的日本沼虾,每组3个重复,每个重复60只虾。试验期为8周。结果显示:1)各试验组日本沼虾的存活率未受到饲料CAT添加水平的显著影响(P>0.05),但当饲料添加150 U/kg CAT时,日本沼虾的增重率显著高于对照组(P<0.05)。2)各试验组日本沼虾肝胰腺超氧化物歧化酶(SOD)活性均无显著差异(P>0.05);CAT2、CAT3和CAT4组肝胰腺丙二醛(MDA)含量显著低于其余各组(P<0.05);随着饲料中CAT添加水平的增加,肝胰腺CAT活性呈现出先上升后下降的趋势,并在CAT2组其活性达到最高。同时,日本沼虾肝胰腺中多酚氧化酶(PPO)活性随着饲料中CAT添加水平呈先增加后降低趋势,CAT3和CAT4组肝胰腺PPO活性显著高于CAT5组(P<0.05);肝胰腺碱性磷酸酶(AKP)活性具有一定的波动,CAT3组肝胰腺AKP活性显著高于CAT1、CAT2和CAT4组(P<0.05)。3)日本沼虾各组之间肠道菌群的α多样性均无显著差异(P>0.05)。对日本沼虾肠道菌群进行β多样性分析发现,在门水平上,日本沼虾肠道菌群优势菌门为变形菌门、厚壁菌门和蓝藻菌门,CAT3和CAT4组中变形菌门的相对丰度显著低于对照组(P<0.05),而厚壁菌门相对丰度显著高于对照组(P<0.05);在属水平上,日本沼虾肠道菌群优势菌属为Tyzzerella、气单胞菌属和不动杆菌属,CAT4组中Tyzzerella相对丰度显著高于对照组(P<0.05),而CAT3、CAT4和CAT5组中气单胞菌属相对丰度显著低于对照组(P<0.05)。综上所述,饲料中添加150~300 U/kg的CAT可提高日本沼虾生长性能、抗氧化能力和免疫性能,增加肠道有益菌群的丰度,促进日本沼虾的健康养殖。

四川省不同流域日本沼虾群体遗传多样性分析

【目的】四川省河流众多,野生日本沼虾资源丰富,深入了解四川省日本沼虾种质资源现状,开展不同流域日本沼虾遗传多样性评估具有重要意义。【方法】基于线粒体Cytb序列,对四川省巴河(BH)、涪江(FJ)、嘉陵江(JLJ)、岷江(MJ)和思蒙河(SMH)5个日本沼虾野生群体的遗传多样性进行分析。【结果】所有群体的201尾日本沼虾中共检测出36种单倍型,单倍型多样性(H_(d))值为0.345~0.959,Hd均值为0.802,其中JLJ群体的Hd值最高(0.959),而MJ、SMH和BH群体的Hd值相对较低,H_(d)值均小于0.5。所有群体的核苷酸多样性(P_(i))值为0.00225~0.01547,P_(i)均值为0.01583,其中JLJ群体的P_(i)值最高(0.01547),BH群体的P_(i)值最低(0.00225)。日本沼虾的遗传变异主要来自群体间(68.20%),群体间存在显著的遗传分化,系统发育树分析显示所有群体呈现3个较明显分支。单倍型MJ网络图显示所有单倍型也呈现3个明显谱系,其中谱系A包含优势单倍型Hap 14,谱系B包含优势单倍型Hap 16,谱系C包含优势单倍型Hap 1。【结论】日本沼虾群体遗传多样性总体上处于较高水平,但不同流域的群体间遗传多样性水平差异较大,其中MJ、BH和SMH群体的遗传多样性相对较低,对这些流域内日本沼虾种质资源的保护有待进一步加强。本研究为四川省日本沼虾种质资源的保护与合理开发利用提供了参考依据,有利于促进四川省日本沼虾产业的可持续发展。

日本沼虾StAR基因克隆及其低氧胁迫下表达分析

为了研究类固醇激素合成急性调节蛋白(steroidogenic acute regulatory protein, StAR)在日本沼虾应答低氧胁迫过程中所发挥的作用,实验应用c DNA末端快速扩增(RACE)PCR技术克隆了日本沼虾StAR全长cDNA序列,并利用在线软件对其序列特征进行生物信息学分析,采用半定量RT-PCR方法分析StAR在日本沼虾不同组织的分布情况,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)与免疫印迹(Western blot)技术对其在不同低氧胁迫阶段中的表达规律进行检测,观察低氧胁迫下精巢组织中StAR蛋白免疫组化定位。结果显示,日本沼虾StAR其cDNA全长3 361 bp (NCBI登录号:MW263908),包括5′-UTR 323 bp,3′-UTR 2 129 bp,开放阅读框909 bp,编码302个氨基酸。氨基酸序列比对及系统进化分析结果显示,日本沼虾StAR基因与三疣梭子蟹等甲壳动物StAR聚类一支,具有最近的亲缘关系。半定量RT-PCR检测结果显示,StAR在日本沼虾不同组织中均有表达,其表达量在肝胰腺和心脏组织中最低,在精巢组织中表达处于较高水平。使用qRT-PCR技术检测日本沼虾精巢中StAR在低氧胁迫下时空表达情况,结果表明,与对照组相比,低氧处理组精巢中StAR基因表达量在1~48 h均显著上调,而在低氧处理组96 h显著降低。此外,本实验对StAR进行了原核表达及抗血清制备,采用Western blot检测StAR蛋白表达丰度基本与基因表达模式相似,免疫组化结果显示,StAR蛋白在精细胞与间质细胞中均有表达。综上所述,长期低氧胁迫显著降低了StAR基因的转录表达水平,并且该基因可能在类固醇合成路径及精子发生过程中均发挥重要作用。本研究结果为进一步解析日本沼虾类固醇激素合成分子机制奠定基础。

日本沼虾Bax基因克隆及其在低氧胁迫过程中的作用

为探究细胞凋亡相关基因Bax(B-cell lymphoma-2 associated X protein)在日本沼虾低氧胁迫过程中所发挥的作用,实验采用cDNA末端快速扩增(RACE)PCR技术获得日本沼虾细胞凋亡相关基因Bax的cDNA全长序列,采用半定量RT-PCR与实时荧光定量PCR(qPCR)分析其在日本沼虾不同组织、不同低氧阶段的表达情况,同时采用Western blot与免疫组化分析了低氧下日本沼虾Bax蛋白的表达与定位。日本沼虾Bax基因cDNA全长2287 bp(NCBI登录号:MZ823353),包括5'非编码区(UTR)为42 bp,3'UTR为814 bp,开放阅读框(ORF)1431 bp,编码476个氨基酸。通过软件和生物信息网站对其序列进行分析,氨基酸相似度比对显示,日本沼虾细胞凋亡基因Bax富含高度保守的BH1、BH2及BH3结构域。系统进化树分析显示,日本沼虾Bax基因与斑节对虾等甲壳动物Bax聚为一支,具有最近的亲缘关系。RT-PCR结果表明,日本沼虾Bax基因在肝胰腺中表达量最高,在脑中表达量最低。在低氧胁迫1~96 h时,日本沼虾鳃和肝胰腺组织Bax基因表达量均显著高于对照组,这与日本沼虾Bax蛋白表达丰度基本相似。通过构建原核表达载体获得体外重组蛋白Bax,并将纯化重组蛋白免疫兔子获得抗血清。免疫组化结果显示,鳃和肝胰腺Bax蛋白阳性信号主要定位在鳃上皮细胞和肝细胞中。最后,采用流式细胞仪分析表明,日本沼虾血细胞凋亡率在低氧胁迫96 h时显著高于对照组,这与日本沼虾Bax基因转录水平和蛋白表达丰度相吻合。研究表明,日本沼虾Bax基因在日本沼虾不同组织应答低氧胁迫分子过程中均具有促凋亡作用。本研究可为探明日本沼虾不耐低氧的分子机制提供理论参考。

日本沼虾桩蛋白基因的克隆与镉胁迫对其表达的影响

镉(Cd)是蓄积性和毒性较强的生物非必需重金属元素之一,会对水生生物造成较大的危害。为更好地了解镉对日本沼虾的分子毒性作用,为水环境镉污染的生态风险预警和评估提供生物标志物,克隆了日本沼虾(Macrobrachium nipponenes)桩蛋白(paxillin)基因MnPXN,并检测了镉胁迫对其表达的影响。MnPXN基因全长为3655 bp,包含1491 bp的编码区,编码496个氨基酸;MnPXN蛋白具有6个低复杂区域和3个保守的LIM结构域,与凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)聚成一支,与家蚕(Bombyx mori)、赤拟谷盗(Tribolium castaneum)等昆虫的亲缘关系较近,与线虫(Nematoda)亲缘关系最远。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)结果显示,MnPXN在日本沼虾的肝胰腺、胃、鳃中表达水平较高,在心脏和肌肉中表达水平较低。在0.2427 mg·L^(-1)CdCl_(2)中暴露24 h,肝胰腺中MnPXN基因表达水平较对照组均显著升高,0.0200 mg·L^(-1)CdCl_(2)胁迫6 h后MnPXN基因表达水平显著升高,24 h表达量达到最大值,96 h恢复至起始水平。RNA干扰能显著(P<0.05)降低MnPXN在肝胰腺中的表达水平,显著(P<0.001)增加日本沼虾的死亡率,表明MnPXN基因能够降低镉胁迫对日本沼虾的毒性作用,其作用机理尚需进一步研究。

四川省日本沼虾养殖现状综述

日本沼虾味道鲜美,营养丰富,深受广大消费者喜爱,是我国重要的淡水名优品种。据《2021年中国渔业统计年鉴》统计,2020年全国有24个省(自治区、直辖市)进行日本沼虾养殖,全国养殖年总产量22.88万t,已成为我国淡水养殖的主要品种之一,在促进农业增效、农民增收方面发挥着重要作用。近十年来,尤其是2020年自然流域十年禁捕政策的正式实施,显著带动了日本沼虾的消费量,消费者数量和人均消费量持续增长。在养殖产量逐年增加的情况下,日本沼虾市场价格仍长期坚挺并呈现上升之势。本文就四川省日本沼虾产业发展状况、存在问题及其对策建议作一概述。

不同群体日本沼虾的线粒体COI基因序列分析

采集钱塘江(QT)、武义(WY)、高塘湖(GT)、肇庆(ZQ)和南宁(NN)5个不同群体的日本沼虾(Macrobrachium nipponense)样本,并对每个群体的线粒体COI基因进行测序和分析,以此了解各群体间的遗传差异。结果表明,日本沼虾COI基因序列中,保守位点420个,变异位点222个,简约信息位点123个,碱基缺失或插入位点27个,平均转换与颠换比值2.78。COI基因序列中(A+T)的含量明显高于(G+C)的含量,碱基组成具有明显的AT偏倚性。在67个个体中定义了65种单倍型,来自NN群体和QT群体的单倍型形成了2个主要分支。基于遗传距离构建的系统发育树和聚类树表明,QT群体和GT群体遗传距离较近,与ZQ群体和NN群体相比遗传距离较远,WY群体与QT、GT群体的遗传距离较小。研究结果可为日本沼虾种质资源的合理开发利用提供分子生物学依据。

咪唑类物质KK-42对日本沼虾表皮矿化的影响

甲壳动物为了生长必须周期性地褪去旧表皮,新表皮的形成及矿化与蜕皮周期密切相关.前期研究发现,KK-42能够缩短日本沼虾蜕皮周期、加速表皮的形成.为了进一步探究KK-42对表皮矿化的影响,以矿化相对稳定的蜕皮间期(C期)头胸甲表皮为参照,选择蜕皮后3,6,12 h的头胸甲,采用扫描电镜/能谱仪法(SEM/EDX),在超微水平初步研究了表皮的矿化进程及KK-42处理对表皮矿化的影响.结果显示,对照组头胸甲表皮中钙、镁、磷信号在蜕皮后3 h开始出现,6 h钙、磷信号在上/外表皮的边缘处密集分布,此后逐渐向表皮内侧延伸.镁信号一直呈弥散状分布.半定量数据分析显示,与蜕皮后3 h相比,6,12 h及C期表皮中,钙原子比例分别提高了67.86%(P<0.01),402.78%(P<0.01),2191.67%(P<0.01);镁原子比例分别提高了95.92%(P<0.05),122.45%(P<0.05),165.31(P<0.05);磷原子比例分别提高了82.46%(P<0.05),205.26%(P<0.01),591.23(P<0.01).在KK-42处理组,蜕皮后3,6,12 h,表皮中的钙、磷信号分布一直呈离散状,钙原子比例分别比对照组降低了16.67%(P>0.05),45.54%(P<0.05),52.5%(P<0.01),磷原子比例分别比对照组降低了15.79%(P>0.05),45.19%(P<0.05),50%(P<0.01);C期表皮中的钙、磷信号出现密集现象,但信号强度比相应对照组分别低31.88%(P<0.01)和5.08%(P>0.05).KK-42处理后镁信号的分布和强度与对照组均无明显差异.结果表明:日本沼虾表皮的矿化始于蜕皮后3 h,KK-42处理能明显抑制日本沼虾头胸甲表皮的矿化,表皮中钙、磷的沉积显著降低.

基于测序分型方法开发日本沼虾微卫星分子标记

利用无参考基因组SSR开发方法筛选微卫星序列并结合测序分型方法对分离的微卫星序列进行基因分型。利用两个样本的全基因组测序数据,通过ebwt2InDel软件从这两个样本的测序数据中寻找包含InDel标记的序列。基于包含InDel标记的序列,利用MISA软件搜索包含SSR的序列并删除非SSR型InDel标记的序列,最终得到包含完美型SSR的序列111条。利用测序分型软件SSRgenotyper对30尾日本沼虾(Macrobrachium nipponense)测序样本进行多态性分析,111条含SSR的序列中,共有19个SSR可以成功分型,分型成功率为17.12%。分型成功的19个SSR位点均为3碱基重复4~6次,其中以ATC/ATG为单位的重复序列占比最多,为6个(31.58%)。19个SSR中,低度信息含量的标记2个,中度信息含量的标记17个。本研究制备的19个微卫星标记可用于评估日本沼虾种群的遗传参数,为日本沼虾种质资源的开发提供有用的遗传标记。

发酵饲料对日本沼虾生长性能、抗氧化能力及肠道微生物的影响

为探究发酵饲料在日本沼虾中的养殖效果,设计5个试验组,分别投喂L1(100%基础饲料组)、L2(87.5%基础饲料+12.5%发酵饲料)、L3(75%基础饲料+25%发酵饲料)、L4(50%基础饲料+50%发酵饲料)和L5(100%发酵饲料)。试验选取大小相近的日本沼虾(0.09±0.01)g进行为期56d的养殖试验,评估日本沼虾生长性能,抗氧化指标和肠道微生物组成。结果显示,饲料经过发酵后可溶蛋白和小肽含量得到显著提高(P<0.05),饲料有益菌含量增加,霉菌得到抑制。养殖试验表明各组存活率均在80%以上,增重率呈先上升后下降趋势,L3和L4组增重率显著高于对照组(P<0.05),饵料系数显著低于对照组(P<0.05)。L3、L4和L5组超氧化物歧化酶(SOD)活性显著高于L1组(P<0.05),L2、L3和L4组丙二醛(MDA)含量显著低于L1组(P<0.05),L2和L5超氧阴离子清除率显著高于L1组(P<0.05)。各试验组血清谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)含量均显著低于对照组(P<0.05)。肠道微生物测序结果显示,L3组α-多样性指数高于L1组,在属水平上,L1组的气单胞菌属丰度显著高于L3组(P<0.05),而L1组分歧杆菌属和芽孢杆菌属丰度显著低于组L3组(P<0.05)。结果表明,发酵饲料能够增加饲料中营养物质含量,提高日本沼虾增重率,降低饵料系数,增强抗氧化能力,可以改善日本沼虾肠道微生物群落结构,对致病菌属有抑制作用,适宜的发酵饲料添加比例为25%。

不同沉水植物对日本沼虾生长存活及水环境影响特征

为揭示沉水植物对日本沼虾(Macrobrachium nipponense)生长过程影响效应,进行为期90 d的微宇宙控制实验,研究轮叶黑藻(Hydrilla verticillata)、菹草(Potamogeton crispus)和苦草(Vallisneria natans)单独及两两组合的种植系统对日本沼虾生长存活及水环境变化的影响。结果显示,轮叶黑藻、苦草及其组合能较好地提高系统空间异质性,且水体pH、DO及水体透明度均保持在较稳定波动范围,但轮叶黑藻及轮叶黑藻+苦草组后期透明度明显升高、叶绿素a含量显著下降(P<0.05)。轮叶黑藻、苦草及其组合中日本沼虾存活率高于对照组,且虾存活率及生物量与轮叶黑藻生物量呈极显著正相关关系(P<0.01),表明轮叶黑藻对日本沼虾生长存活具有显著促进作用。本研究可为草虾共作生态养殖模式的优化及日本沼虾养殖提质增效提供依据。

日粮中不同核黄素水平对日本沼虾生长性能和代谢机能的影响

采用单因素实验设计,探究了日粮中不同水平核黄素对日本沼虾生长性能和代谢机能的影响。挑选1 200尾均重为(0.68±0.01) g的日本沼虾,随机分为6组,每组4个重复,每重复50尾。配制6组半纯化饲料,测得其实际核黄素含量分别为3.91、20.53、49.18、87.80、169.61和326.66 mg/kg。于室内循环系统中进行为期10周的正式养殖实验。结果显示:(1) 169.61 mg/kg核黄素组终末体重、增重率、特定生长率、蛋白质效率、血淋巴丙酮酸以及肝胰腺核黄素含量均显著高于其他各组,而采食量、饵料系数和血浆尿素氮含量均显著低于其他组。以增重率和肝胰腺核黄素含量为评价指标,建立回归模型分析,得出日本沼虾适宜核黄素需求量为165.25~180.31 mg/kg。(2) 169.61 mg/kg核黄素组的肝胰腺葡萄糖转运体2、己糖激酶、丙酮酸激酶、激素敏感性脂肪酶、谷氨酸脱氢酶与谷氨酰胺合酶的mRNA表达量显著高于缺乏组和过量组。丙酮酸羧化酶、脂肪酸合成酶、乙酰辅酶A羧化酶的mRNA表达量在169.61 mg/kg组达到谷值。研究表明,在饲料中添加165.25~180.31 mg/kg的核黄素能够改善日本沼虾的生长性能和饲料利用率,并显著上调糖酵解、脂肪酸β-氧化和蛋白质合成等过程。本研究初步阐明了核黄素改善日本沼虾生长性能与代谢机能的分子机制,可为日本沼虾营养需求数据库构建及高效配合饲料的研发提供技术指导。

大龙虎泡野生日本沼虾遗传多样性分析

为了深入了解本地日本沼虾的遗传特性,为育种选育提供理论支撑,利用微卫星分子标记技术,对大龙虎泡日本沼虾进行遗传多样性比较分析。结果显示,12个微卫星位点均属于高多态性位点(PIC>0.5);太湖2号养殖群体的等位基因数为4~11,有效等位基因为3.6864~7.4805,观测杂合度为0.3182~0.8333,期望杂合度为0.7449~0.8848;各位点的多态性为0.6919~0.8517,属于高遗传多样性的群体。大龙虎泡野生群体等位基因数为1~2,有效等位基因为1.0000~2.0000,观测杂合度为0.0000~1.0000,期望杂合度为0.0000~0.5172,各位点的多态性为0.0000~0.3750,属于遗传多样性较低的群体。2个群体均有7个位点显著偏离Hardy-Weinberg平衡,大龙虎泡野生群体另出现3个位点无法进行Hardy-Weinberg平衡检验。太湖2号养殖群体的7个位点表现出来的是杂合子缺失,大龙虎泡野生群体的7个表现的是杂合子过剩。分子方差分析显示,有36.15%(P<0.01)的遗传变异来源于群体间,而63.85%(P<0.01)的变异来源于群体内。与太湖2号养殖群体的遗传相似度为0.2769,遗传距离为1.2843,这2个群体遗传相似度低,遗传距离远,存在很大的遗传差异。2个群体的遗传分化指数F_(ST)为0.36153(P<0.01),遗传分化程度明显。种群遗传结构分析结果显示,最佳K值为3,说明这2个种群有3个可能的祖先。大龙虎泡野生群体遗传多样性水平较低,提示对大龙虎泡野生群体种质资源的保护刻不容缓。

日本沼虾体重和出肉率联合GWAS分析

[目的]定位筛选影响日本沼虾体重及出肉率性状的候选基因。[方法]收集成熟期且表现健康的日本沼虾,记录体重、出肉率,提取DNA进行测序并进行基因分型,获得单核苷酸多态性(Single-nucleotide polymorphisms,SNP)标记数据,利用多性状联合的全基因关联分析(Genome-wide association study,GWAS)方法检验与体重、出肉率性状存在显著相关的SNP位点,根据SNP的物理信息实现候选功能基因的筛选和定位。[结果]联合分析共定位到6个SNP位点,检测效率远高于单一分析的1个SNP,根据6个显著位点共定位到5个候选功能基因,除1个功能未知的新基因外,剩余4个基因都与机体代谢、发育相关。[结论]完成了日本沼虾体重、出肉率性状相关基因的定位,可为日本沼虾生长代谢的基因组水平揭示提供理论基础,也可为日本沼虾的其他数量性状研究提供思路。

日本沼虾对6种蛋白质原料中蛋白质、氨基酸及磷的离体消化率研究

[目的]本文旨在探究日本沼虾对6种蛋白质原料中蛋白质、氨基酸及磷的离体消化率及酶解能力,为日本沼虾饲料的开发提供指导。[方法]分别以鱼粉、血粉、豆粕、棉粕、菜粕与花生粕为蛋白质原料,采用离体消化法和茚三酮法测定日本沼虾肝胰腺与胃肠道粗酶提取液对这6种原料中干物质、粗蛋白和总磷的离体消化率,以及酶解后氨基酸的生成量和酶解液中磷含量。[结果]肝胰腺粗酶提取液处理下,豆粕组中干物质的消化率最高,且显著高于血粉组(P<0.05);粗蛋白离体消化率以棉粕为最高,显著高于除豆粕外的其他原料(P<0.05);总磷消化率以花生粕最高,显著高于鱼粉组(P<0.05)。胃肠道粗酶提取液处理下,菜粕的干物质消化率最高,且显著高于棉粕和血粉组(P<0.05),而粗蛋白和总磷的消化率均以棉粕为最高。此外,在肝胰腺和胃肠道粗酶提取液处理下,6种蛋白原料生成的氨基酸含量均随消化时间的延长显著升高,而鱼粉和血粉的氨基酸生成量显著高于其他蛋白原料(P<0.05)。胃肠道粗酶液中的磷含量随时间延长呈先升高后降低的趋势,在8 h处,鱼粉组磷含量显著高于其他组(P<0.05)。[结论]日本沼虾对棉粕的离体消化率较高,而血粉在酶解过程中的氨基酸生成量较高,二者均可作为日本沼虾优质蛋白来源,在饲料生产中具有较大的应用前景。