腺病毒/日本脑炎病毒复制子嵌合载体的构建

为解决日本脑炎病毒(JEV)复制子DNA疫苗载体不稳定和递送效率低的缺点,本研究利用具有高效递送效率的人5型复制缺陷性腺病毒(AdV)来递送JEV复制子,构建嵌合载体。本研究将已构建的含有增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因的JEV复制子克隆至经过改造的带有SwaⅠ酶切位点的pShuttle-CMV载体中,再将来自pCI载体的嵌合内含子插入JEV复制子中,得到转移载体pSh-JEV-In-EGFP,经SwaⅠ线性化后电转化至含有腺病毒骨架载体AdEasy-1的BJ5183感受态细胞,将所得重组腺粒经PacⅠ线性化后转染HEK293细胞,传代直至出现细胞病变,得到含有表达EGFP的JEV复制子的重组腺病毒,命名为rAdV-JEV-In-EGFP。结果表明,pSh-JEV-In-EGFP在细菌中传20代仍然保持稳定,而且在rAdV-JEV-In-EGFP感染的HEK293细胞中,JEV复制子能够自我复制,并启动EGFP蛋白稳定、高效地表达。本研究为进一步研发以腺病毒递送的JEV复制子为基础的二价新型疫苗奠定基础。