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日本脑炎病毒WHe株全长cDNA的长链RT-PCR法的扩增 被引量:2
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作者 唐青海 乔宪凤 +6 位作者 马秋明 何维明 郑新民 刘西梅 安立国 颜艳 魏庆信 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2007年第8期19-23,共5页
为深入探索日本脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)WHe株的致病机理,并为新型疫苗研发提供技术支持,采用长链RT-PCR技术对其基因组全长cDNA进行了扩增鉴定,并对含复杂二级结构的3′末端和5′末端非编码区扩增片段进行了测序分... 为深入探索日本脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)WHe株的致病机理,并为新型疫苗研发提供技术支持,采用长链RT-PCR技术对其基因组全长cDNA进行了扩增鉴定,并对含复杂二级结构的3′末端和5′末端非编码区扩增片段进行了测序分析。扩增结果表明,扩增出的JEV WHe株基因组全长cDNA分子近11 kb大小;非编码区测序分析表明,扩增产物为WHe株所特有。提示长链RT-PCR法可用于JEV WHe株基因组全长cD-NA的扩增。 展开更多
关键词 日本脑炎病毒whe株 全长CDNA 长链RT-PCR
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日本脑炎病毒WHe株NS1基因的克隆、测序及表达
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作者 乔宪凤 唐青海 +5 位作者 郑新民 熊忠良 刘西梅 华文君 周荆荣 何维明 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2007年第4期23-26,31,共5页
以日本脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)WHe株的基因组RNA为模板,采用RT-PCR技术,克隆了JEV WHe株的NS1基因,并对其进行了测序和序列分析。构建了pET28b-NS1表达载体,转化表达宿主大肠杆菌BL21(DE3),并对其进行了诱导表达,对... 以日本脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)WHe株的基因组RNA为模板,采用RT-PCR技术,克隆了JEV WHe株的NS1基因,并对其进行了测序和序列分析。构建了pET28b-NS1表达载体,转化表达宿主大肠杆菌BL21(DE3),并对其进行了诱导表达,对表达产物进行检测。结果表明,NS1基因全长1 145 bp,其核酸序列与JEV P3株同源性为99.4%,与SA14和SA14-14-2等27个JEV毒株的核苷酸序列同源性为98%,表明NS1基因的保守性很高;pET28b-NS1表达产物的相对分子质量约为43 ku,大小与预期结果相符。NS1基因克隆表达成功。 展开更多
关键词 日本脑炎 whe NS1基因 RT-PCR
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日本乙型脑炎病毒强、弱毒株非结构蛋白NS1、NS2A和NS1-NS2A诱导小鼠CD4^+T细胞应答的研究 被引量:2
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作者 杨伟 韦冠东 +8 位作者 汤德元 曾智勇 黄涛 王彬 胡玲玲 龙冬梅 黄秋涵 廖晓糠 田红宇 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第8期1693-1700,共8页
为了解日本乙型脑炎病毒(JEV)强、弱毒株非结构蛋白的免疫效果,笔者分析了JEV强、弱毒株非结构蛋白NS1、NS2A和NS1-2A真核表达的差异。通过观察JE减毒活疫苗(SA14-14-2株)和JEV贵州分离株(GZ株)分别在BHK-21细胞上出现的CPE,并收集强、... 为了解日本乙型脑炎病毒(JEV)强、弱毒株非结构蛋白的免疫效果,笔者分析了JEV强、弱毒株非结构蛋白NS1、NS2A和NS1-2A真核表达的差异。通过观察JE减毒活疫苗(SA14-14-2株)和JEV贵州分离株(GZ株)分别在BHK-21细胞上出现的CPE,并收集强、弱毒株的细胞悬液,提取总RNA,分别设计6对特异性引物,应用RT-PCR技术扩增非结构蛋白NS1、NS2A和NS1-2A的编码基因,构建真核表达质粒pcDNA3.1(+)-NS1r、pcDNA3.1(+)-NS2Ar、pcDNA3.1(+)-NS1-2Ar、pcDNA3.1(+)-NS1q、pcDNA3.1(+)-NS2Aq和pcDNA3.1(+)-NS1-2Aq,将构建成功的6种真核表达质粒免疫健康小鼠,最后采集小鼠的血液和组织分别进行JEV抗体检测和细胞免疫水平检测。研究结果显示:JEV GZ强毒株与JEV SA14-14-2弱毒株能在BHK21细胞上增殖并产生CPE现象;构建的6种真核表达质粒免疫小鼠后经血常规和T淋巴亚群检测可以极显著或显著增加CD4+和CD8+细胞的含量。表明JEV强毒株非结构蛋白所诱导的细胞免疫略优于弱毒株非结构蛋白诱导的细胞免疫,但差异不明显。本研究结果可为日本乙型脑炎病毒的病原基础研究提供参考。 展开更多
关键词 日本乙型脑炎病毒(JEV) 强毒 弱毒 非结构蛋白 真核表达差异
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日本脑炎病毒(JEV)内蒙古分离株M73-1E基因的5′端克隆及部分序列分析
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作者 张彤 秦毅强 +2 位作者 张鹤龄 张丽英 郭志荣 《内蒙古大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 2000年第5期513-516,共4页
根据国外报道的 JEV( Japanese encephalitis virus)基因组全序列 ,针对 JEV E基因 5′端设计合成一对特异引物 ,以日本脑炎病毒内蒙古分离株 M73-1 RNA为模板 ,经 RT-PCR扩增 ,获得 366bp的 JEV E基因 c DNA片段 .将此片段重组于质粒 p... 根据国外报道的 JEV( Japanese encephalitis virus)基因组全序列 ,针对 JEV E基因 5′端设计合成一对特异引物 ,以日本脑炎病毒内蒙古分离株 M73-1 RNA为模板 ,经 RT-PCR扩增 ,获得 366bp的 JEV E基因 c DNA片段 .将此片段重组于质粒 p UC1 9中 ,并转化大肠杆菌DH5α.经 PCR扩增 ,酶切及序列分析 ,结果表明 JEV M73-1 5′端 1 2 6个核苷酸序列与 JEV日本 Nakayama株和 Ja OAr S982株的同源性分别为 96.8%和 96.8% ,氨基酸序列同源性均为 99.2 % .通过对病毒基因组结构分析从分子水平上进一步证实了 1 973年在呼和浩特市流行的脑炎是由 JEV引起的流乙脑炎 .E基因编码 JEV的囊膜糖蛋白 ,是其重要表面抗原 .JEV M73-1 E基因 5′端克隆和部分序列分析对 JEV的分子生物学研究。 展开更多
关键词 日本脑炎病毒 E基因 克隆 序列分析 M73-1分离
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日本乙型脑炎病毒贵州分离株NS1基因克隆及表达载体的构建 被引量:3
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作者 王凤 汤德元 +3 位作者 罗险峰 曾智勇 马萍 李春燕 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2013年第4期90-93,共4页
为了研究日本乙型脑炎病毒(JEV)NS1基因工程疫苗、生物免疫活性及细胞因子IL-2对真核表达的影响,试验采用RT-PCR方法扩增出JEV贵州分离株(GZ株)NS1 cDNA,克隆到pMD19-T载体上,再进行双酶切并回收目的片段,分别与pET32a(+)和pcDNA3.1(+)... 为了研究日本乙型脑炎病毒(JEV)NS1基因工程疫苗、生物免疫活性及细胞因子IL-2对真核表达的影响,试验采用RT-PCR方法扩增出JEV贵州分离株(GZ株)NS1 cDNA,克隆到pMD19-T载体上,再进行双酶切并回收目的片段,分别与pET32a(+)和pcDNA3.1(+)载体连接并转化入感受态细胞Top10中,构建原核表达载体pET32a(+)-NS1和真核表达载体pcDNA3.1(+)-NS1,并将NS1基因插入已经构建好的重组质粒pcDNA3.1(+)-IL-2上,构建以IL-2融合表达的真核载体pcDNA3.1(+)-IL-2-NS1,分别通过抽提阳性质粒酶切鉴定和测序后,应用DNAStar等生物软件进行序列分析,最后进行原核表达载体和真核表达载体双酶切及测序。结果表明:JEV GZ株NS1 cDNA全长为1 245 bp,可编码415个氨基酸。说明JEV GZ株NS1 cDNA克隆成功,JEV GZ株NS1基因的原核表达载体、真核表达载体以及IL-2融合表达的真核载体构建成功。 展开更多
关键词 日本乙型脑炎病毒 贵州分离 NS1基因 表达载体 构建
原文传递
近年来西尼罗热的流行现状及其流行毒株的表型和基因型特性 被引量:4
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作者 俞永新 《国外医学(流行病学.传染病学分册)》 2005年第3期129-134,共6页
关键词 西尼罗热 流行毒 流行现状 基因型 表型 日本脑炎病毒 Fever 西尼罗病毒 急性传染病 基因同源性 蚊虫传播 首次分离 病毒抗原 病毒 保护作用 乌干达 WNV 性关系
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人体病毒学(致病病毒)
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《国外科技资料目录(医药卫生)》 CAS 2002年第12期37-38,共2页
0244478 1992年兽疫流行的 IC 亚型委内瑞拉马脑炎病毒和紧密相关的 ID 亚型毒株的毒力和毒血症的特征/Wang E//AmJ Trop Med Hyg.-2001,65(1).
关键词 委内瑞拉马脑炎病毒 病毒负荷 医科 日本脑炎病毒 人体病毒 毒血症 亚型 人免疫缺陷病毒 毒力
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Cloning and Sequence Analysis of the Full-Length Genome of Japanese encephalitis virus Strain SXBJ07 Isolated from Swine
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作者 WANG Wei-hua,ZHANG Yan-ming,XU Xin-gang,XING Fu-shan and TANG Qing-hai College of Veterinary Medicine,Northwest A&F University,Yangling 712000,P.R.China 《Agricultural Sciences in China》 CSCD 2009年第11期1392-1402,共11页
A virus strain,showing cytopathic effect in BHK-21 cell,was isolated from swine brains in Shaanxi Province,China,in 2007.The isolate was confirmed as Japanese encephalitis virus(JEV) by immunofluorescence assay(IFA) a... A virus strain,showing cytopathic effect in BHK-21 cell,was isolated from swine brains in Shaanxi Province,China,in 2007.The isolate was confirmed as Japanese encephalitis virus(JEV) by immunofluorescence assay(IFA) and reverse transcription polymerase chain reaction(RT-PCR),and named SXBJ07.The complete nucleotide and deduced amino acid sequences of the JEV strain SXBJ07 were determined.Its single open reading frame has a total of 3 432 amino acid residues.An extensive E gene based phylogenetic analysis was performed,the result showed that SXBJ07 strain belongs to genotype I.Comparison of the SXBJ07 genomic sequence with those of the 24 fully sequenced JEV strains in published databases showed nucleotide homology ranging from 99.0 to 83.7%;amino acid homology ranged from 99.8 to 94.8%.Compared SXBJ07 with SA14-14-2 strain,the current live vaccine strain in China,the homology of amino acid in envelope gene was 97.0%;and there were amino acid substitutions in 13 sites of the active domains of E protein(E1-E411). 展开更多
关键词 日本脑炎病毒 病毒分离 基因组序列 序列分析 逆转录聚合酶链反应 氨基酸残基 同源性比较 长度
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