日本血吸虫未成熟虫卵26/28kDa抗原诱导抗雌虫生殖和抗卵胚发育免疫的研究

目的 :探讨日本血吸虫未成熟虫卵的 2 6/ 2 8k Da抗原 ( SIEA2 6/ 2 8k Da)诱导小鼠产生抗雌虫生殖免疫的效果。方法 :采用纯化的 SIEA2 6/ 2 8k Da抗原以及 SIEA- I抗原 ,分别免疫BAL B/ c小鼠 ,于攻击感染后 4 6d进行粪卵、组织内虫卵定量。结果 :证明 SIEA2 6/ 2 8k Da抗原能诱导小鼠产生抑制雌虫生殖的免疫力。与对照组比较 ,SIEA2 6/ 2 8k Da抗原免疫鼠减虫虽不明显 ,但肝组织内总卵数、成熟卵数和粪卵数 ( EPG)分别减少 4 8.1%、83.6%、87.3% ,死亡卵数明显增加 ( P<0 .0 0 1)。此外 ,未纯化的 SIEA和纯化的 SIEA2 6/ 2 8k Da抗原免疫组均见雌虫子宫内虫卵数下降 ,分别达 4 0 .9%、54.8% ,而 SEA和 SIEA- I抗原免疫未见上述效应。结论 :提示抗雌虫生殖免疫和抗卵胚发育的效应 ,主要与 SIEA2 6/ 2 8k Da蛋白组分有关。

日本血吸虫未成熟虫卵67kDa分子抗原诊断血吸虫病的研究

本文通过SDS－PAGE和电渗方法，从日本血吸虫未成熟虫卵可溶性抗原（SIEA）中分离纯化出67kDa蛋白分子，以该分子包被微板进行ELISA，检测了急、慢性日本血吸虫病人血清，其阳性检出率达100％和94．6％，与60例正常人血清、30例肝吸虫和31例肺吸虫病人血清均未出现明显交叉反应，慢性血吸虫病人治疗后3个月、半年和1年的阴转率分别为58．1％，75．4％和84．6％。提示SIEA67kDa分子抗原具有较好的疗效考核价值和现场应用前景。

日本血吸虫未成熟虫卵26-28kDa抗原的分离与纯化

本文采用超凝胶AcA柱层析方法和SDS-PAGE结合凝胶洗脱方法等,分离纯化了日本血吸虫未成熟虫卵可溶性抗原(SIEA)26-28kDa组分.SDS-PAGE、免疫印迹分析(EITB)和银染色等证明,采用该方法分离纯化的26-28kDa抗原纯度高,有较强的免疫活性,并证明该抗原组分在SIEA中含量丰富.纯化的SIEA26-28kDa可作为抗日本血吸虫生殖产卵和抗卵胚发育侯选抗原,用于抗病保护性免疫的研究.

日本血吸虫未成熟卵可溶性抗原的初步分析

采用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和ＥＬＩＢ技术分析了日本血吸虫未成熟卵可溶性抗原（ＳＩＥＡ），并与可溶性成熟卵抗原（ＳＥＡ）进行比较，二者主要蛋白区带存在明显差异。同时，ＥＬＩＢ结果表明，ＳＩＥＡ中感染血清和免疫血清所识别的６７ｋＤａ、６２ｋＤａ、５４ｋＤａ、５０ｋＤａ、２８ｋＤａ和２６ｋＤａ等抗原组分不出现于ＳＥＡ，推测其在ＳＩＥＡ诱导宿主产生抗雌虫生殖及抗卵胚发育免疫应答方面起作用。

日本血吸虫未成熟卵可溶性抗原诱导抗卵免疫的初步研究

采用日本血吸虫未成熟虫卵可溶性抗原（ＳＩＥＡ）及成熟虫卵可溶性抗原（ＳＥＡ）分别免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，发现ＳＩＥＡ诱导小鼠产生显著的抗生殖及抗卵胚发育的免疫力；与对照组比较，ＳＩＥＡ免疫鼠在攻击感染后４６天，肝、肠组织内总虫卵数明显下降，成熟虫卵数和粪卵数分别降低了５９．９８％，６６．８６％和６６．９７％；粪卵下降程度与肝、肠组织中成熟虫卵的减少相一致，ＳＥＡ免疫后未呈现上述效应。

日本血吸虫未成熟虫卵糖蛋白抗原生物学特性的初步分析

目的 分析日本血吸虫未成熟卵糖蛋白抗原的生物学特性。方法 利用 SDS- PAGE、银染色、PAS及脂类染色对 SIEA组分进行分析 ,并根据标准分子量迁移率 Rf值 ,用半对数坐标纸绘图 ,测算各区带的分子量。结果 SIEA有 10种糖蛋白分子 ,其分子量为 10 1、97、91、87、77、74、6 6、6 2、5 6、5 0 k Da;1条 37k Da脂蛋白区带。结论 SIEA含有蛋白、糖蛋白、脂蛋白等抗原分子 。

日本血吸虫未成熟卵单链抗体库的构建、筛选及初步应用

运用噬菌体展示技术构建日本血吸虫未成熟虫卵可溶性抗原(SIEA)单链抗体(scFv)表达文库,以天然分子候选疫苗SIEA26～28ku为靶抗原筛选SIEA单链抗体库,获得特异性单链抗体.并将该scFv基因亚克隆至原核高效表达载体PET32a,诱导SIEA26～28ku特异性scFv大量表达.随后以此为探针筛选日本血吸虫尾蚴cDNA文库,以期获得SIEA26～28ku天然分子候选疫苗相关的编码基因.结果显示,所获得的SIEA26～28ku特异性scFv,表达量高,采用该探针初步筛选出相关基因核糖体蛋白S4.SIEA26～28ku特异性scFv的获得,为进一步筛选、分析鉴定抗日本血吸虫病天然分子候选疫苗SIEA26～28ku的编码基因奠定了基础.

日本血吸虫未成熟虫卵卵壳的超微结构

应用透射电镜和扫描电镜观察了日本血吸虫（Ｓｃｈｉｓｔｏｓｏｍａｊａｐｏｎｉｃｕｍ）未成熟虫卵卵壳的超微结构。初产期和胚胎期虫卵卵壳形态结构相似，均有形态多样的微管道贯通卵壳内外，管道内含一些分泌颗粒，管壁由单位膜构成；致密的微棘沿卵壳均匀分布，微棘纵切呈长三角形，横切呈星形，中央有小空腔；卵壳由电子密度低且较厚的外层和电子密度高且较薄的内层构成；卵壳表面有丰富的网样纤维基质。推测卵壳的微管道、微棘和网样纤维基质的形成时期是同步的，皆在雌虫卵模内形成。本文讨论了微管道的结构、功能与意义。

简便快速分离日本血吸虫未成熟虫卵方法的研究

目的探讨一种快速的日本血吸虫卵分离纯化方法,解决虫卵常规分离法存在耗费时间长、纯度不高及结构破坏等问题。方法在前人的工作基础上,对虫卵分离方法进行改进,采用反复过筛、加胰酶消化并结合离心去上清的方法。结果在短时间内获得了纯净的虫卵,所得虫卵结构完整,虫卵得率显著提高。结论该方法适宜于血吸虫卵的快速分离、纯化,为虫卵抗原制备及其抗原分析、鉴定提供了条件。

抗日本血吸虫未成熟虫卵单克隆抗体的制备和鉴定

采用日本血吸虫来成熟卵抗原（SIEA）免疫BALB／c小鼠，制备抗SIEA单克隆抗体。获得一株强阳性、高特异的抗未成熟虫卵的单抗（2B2），免疫球蛋白为IgG1类。免疫印迹分析表明该单抗单一识到日本血吸虫未成熟虫卵抗原中的50kDa分子。免疫荧光染色表明，与雌虫子宫内虫卵呈现强阳性反应，而不与成虫抗原交叉。

日本血吸虫天然抗病分子疫苗的结构与功能分析 Ⅰ.未成熟卵28kDa分子的快速分离纯化与鉴定

为了进一步研究日本血吸虫天然抗病分子(SIEA 28 kDa)的结构与功能,采用SDS-PAGE制备电泳和电洗脱法从日本血吸虫未成熟卵可溶性抗原(SIEA)中快速分离纯化了SIEA 28 kDa抗原分子,纯化后抗原分子经梯度凝胶电泳分离,重复测定其分子量。同时,采用Western blot和ELISA检测SIEA 28 kDa分子的免疫活性及其生化纯度。证实获得的提取物SIEA 28 kDa抗原分子的纯度高、活性好;用该抗原分子免疫家兔获得的单特异性抗血清可同时识别日本血吸虫未成熟虫卵、雌虫和雄虫的28 kDa抗原组分。说明该分子与日本血吸虫成虫(AWA)28 kDa组分具有部分交叉抗原性。

日本血吸虫未成熟卵抗血清对日本血吸虫cDNA文库的免疫筛选

目的为了获得抗雌虫生殖和卵胚发育相关抗原的血吸虫基因。方法通过采用抗日本血吸虫未成熟卵SIEA26—28kDa免疫血清对日本血吸虫成虫cDNA文库进行筛选。结果共获得阳性克隆23个,经重复筛选之后,随机挑取其中的5个阳性克隆,分别进行PCR扩增,琼脂糖凝胶电泳显示获得单一扩增条带,其大小位于150bp～1.5kb之间。结论从SjcDNA文库中筛选出抗卵相关阳性克隆,有关分析鉴定在进一步进行中。

不同数量日本血吸虫尾呦感染家兔后未成熟虫卵得量的实验观察

家兔感染日本血吸虫尾蚴后23d雌虫开始产卵,在宿主肝脏组织中,虫卵自产出到发育成熟需要10—11d.按卵胚的发育过程,分为单细胞期、细胞分裂期、器官发生期、毛蚴成熟期4个阶段,通常把前3期虫卵称为未成熟卵.据何毅勋等报道,小鼠感染尾蚴后26—33d每条雌虫平均每天产卵150个,而44d后,每条雌虫平均每天产卵高达2029个.因此,一般认为收集成熟虫卵,每兔感染1500—2000条尾蚴为宜,既可使家兔存活到45d以后,又可以从肝脏中获得最大卵量.但收集30d左右未成熟虫卵,以多少尾蚴感染家兔,才能获得最大卵量,至今未见报道.我们在进行抗卵胚发育免疫原的筛选实验中发现,以感染尾蚴后30d未成熟虫卵作为免疫原可获得抗卵免疫的满意效果(另文报道).因此,对感染尾蚴数量和30d未成熟虫卵得量之间的关系,进行了实验观察,现将结果报告如下.

日本血吸虫未成熟卵免疫血清抗卵胚反应的观察

目的研究日本血吸虫未成熟卵免疫血清在抗卵胚方面的作用。方法采用多途径免疫新西兰家兔的方法,制备日本血吸虫未成熟虫卵可溶性抗原的免疫兔血清,通过免疫酶染色定位观察免疫血清与未成熟卵胚的反应。结果证明未成熟卵免疫血清能特异地识别虫卵早期胚胎抗原,与未成熟虫卵卵胚出现较强的免疫反应。结论未成熟虫卵可溶性抗原免疫产生的抗卵胚作用与未成熟虫卵胚胎抗原所诱导的保护性免疫应答有关。

未成熟日本血吸虫卵的组分蛋白及其免疫学特性的研究

应用SDS－PAGE对日本血吸虫4周、5周和6周－SEA进行分析，分别出现21、14和20条组分蛋白带，三者间既有共同组分又存在差异，显示出不同的分子基础。于攻击感染后0～8周作动态观察，ELIB结果表明，4周－SEA及其免疫鼠血清的免疫学特性与5周－SEA和6周－SEA存在一定差异，其中被4周－SEA免疫鼠血清识别的72．4～68．5ku蛋白宽带至攻击感染后6～8周消失，与该抗原免疫鼠肝内虫卵数减少、虫卵发育延缓及肉芽肿缩小（在6周前）及后来的恢复（8周）基本一致。

日本血吸虫成虫31/32kD抗原诱导小鼠产生抗卵免疫的初步研究

本文采用超凝胶柱层析法分离纯化日本血吸虫31/32kD抗原.免疫小鼠诱导保护性免疫力.结果表明,这种保护性免疫力仅有抗卵效果,无抗成虫作用.31/32kD免疫小鼠后可使小鼠粪卵减少63.8%—78.3%;雌虫子宫内虫卵降低53.2%;肝、肠中死卵量明显增加,说明31/32kD抗原可诱导小鼠产生抗卵免疫干扰虫卵形成,加速虫卵死亡,提示它可能是一种有希望的抗血吸虫病理疫苗的候选抗原.

日本血吸虫干卵抗原的标准鉴定血清客观指标研究

本研究通过对感染日本血吸虫的兔血清实验结果分析,证实了影响其COPT反应活性的主要因素是血清γ-球蛋白的含量水平。首次提出以感染兔血清作为COPT抗原活性检测的标准血清必须达到的客观指标以及相应的日本血吸虫干卵抗原的质量标准。实验结果表明,γ-球蛋白含量在20～30mg/ml的感染兔血清作为干卵抗原的标准鉴定血清具有测定干卵活性客观、稳定的特点。用以检测时,环沉率在30％以上的日本血吸虫干卵抗原,具有良好的敏感性(84.0～94.4％)和特异性(96.0～94.0％),适宜于作为COPT诊断抗原。

PVF抗原片环卵沉淀试验诊断日本血吸虫病敏感性和特异性的进一步观察

据80份粪检阳性的血吸虫病人血清,95份经吡喹酮治疗后3～8年的血吸虫病患者血清和90份非流行区健康人血清,按单盲法混合编号的考核实验结果:PVF—COPT使用江苏省寄研所提供的冷冻干卵抗原和热处理超声干卵抗原,对血吸虫病人血清的阳性率均为83.8％;在有血吸虫病治疗史者血清的阳性率分别为22.1％和15.8％;对正常人血清的假阳性率分别为8.9％和6.7％.此外,对肺吸虫、华枝睾吸虫病和姜片虫病人血清采用冷冻干卵抗原的交叉反应阳性率分别为8％、12％和4％。与常规法COPT的平行对比实验结果均无显著的差异.但标准化的PVF—COPT能预制定量的干卵抗原片,有利于提高COPT的稳定性.操作上较常规法COPT简便.

吡喹酮对日本血吸虫卵抗原性的影响

首次报告毗喹酮对日本血吸虫卵抗原性的影响结果。用经吡喹酮体外处理的虫卵提取可溶性卵抗原(SEA-P)。抗原按蛋白含量10～0.63μg/ml包板进行碱性磷酸酶酶联免疫吸附试验(AKP-ELISA)检测,7批SEA-P的OD值均显著低于对照;用SEA-P致敏血细胞或用SEA-P包板,分别用间接血凝试验(IHA)、AKP-ELISA和生物素-亲和素-辣根过氧化物酶酶联免疫吸附试验(ABC-ELISA)检测血吸虫病人血清,其GMRT均显著低于对照组。十二磺酸硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶板电泳(SDS-PAGE)显示,SEA-P的电泳区带较对照减少。