日本裂体吸虫HMGB1基因克隆与原核表达载体构建

目的:利用RT-PCR方法扩增日本裂体吸虫HMGB1基因,构建原核表达载体。方法:日本裂体吸虫尾蚴感染纯种新西兰兔后8周,检获肠系膜下静脉血管中的成虫;匀浆成虫,提取总RNA,经RT-PCR扩增出含SjHMGB1的目标片段,克隆于pMD-19T载体,转化DH5α大肠杆菌增殖克隆,测序鉴定。以pMD-19T-SjHMGB1为模板进行二次PCR扩增,分别获得SjHMGB1、A-box和B-box片段,经BamHⅠ+XhoⅠ双酶切消化PCR产物,分别亚克隆至高效蛋白表达载体pET-26b(+)。结果:用RT-PCR从日本裂体吸虫成虫扩增出含SjHMGB1、A-box和B-box的基因片段,构建成功含目标基因的pMD-19T克隆载体,测序表明序列正确,进一步亚克隆,分别构建成功相应的融合蛋白表达载体pET-26b(+)-SjHMGB1、pET-26b(+)-SjHMGB1-Abox和pET-26b(+)-SjHMGB1-Bbox,经酶切电泳鉴定证实表达载体的构建正确。结论:克隆日本裂体吸虫HMGB1基因,并构建成功SjHMGB1的基因克隆载体和SjHMGB1、A-box、B-box的蛋白表达载体,为进一步获得目标蛋白及其相关研究奠定了基础。

血吸虫的自述

我是血吸虫家族的一员,因常在人或动物身上吸血,所以一直羞于站出来让大家认识我。我们血吸虫大家族共有10种成员,危害中国人健康的主要是日本裂体吸虫,即日本血吸虫。其为害的主要区域有中国、日本、东印度群岛和菲律宾等。除了危害人体健康,血吸虫还会侵袭其他哺乳动物,如家畜和老鼠等。