灯盏花素对宫内炎症致早产大鼠脑损伤的保护作用及其机制探讨

目的探讨灯盏花素对宫内炎症致早产大鼠脑损伤的保护作用及其机制。方法向孕鼠腹腔内注射脂多糖制备宫内炎症致早产大鼠脑损伤模型,孕鼠和仔鼠分别随机分为对照组、模型组、灯盏花素低剂量(45 mg/kg)组、灯盏花素高剂量(90 mg/kg)组、灯盏花素高剂量(90 mg/kg)+ML385[核因子E2相关因子2(nuclear factor erythroid 2-related factor 2,Nrf2)抑制剂,30 mg/kg]组(n=10)。测定各组孕鼠产出的仔鼠存活数和体重;苏木精-伊红染色法观察各组孕鼠子宫、胎盘病理形态及仔鼠脑组织病理形态;免疫荧光染色法检测各组仔鼠脑皮质离子钙接头蛋白分子-1(ionized calcium-binding adaptor molecule-1,IBA-1)与核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(nucleotide-binding oligomerization domain-like receptor protein 3,NLRP3)共表达情况;酶联免疫吸附法检测各组仔鼠脑组织中白细胞介素(interleukin,IL)-6、IL-8、IL-1β水平;免疫印迹法检测各组仔鼠脑组织中Nrf2通路相关蛋白表达。结果与对照组相比,模型组孕鼠子宫、胎盘组织及仔鼠脑组织产生病理损伤,仔鼠脑皮质产生严重小胶质细胞焦亡,仔鼠存活数和体重、脑组织中Nrf2及血红素加氧酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)蛋白表达水平降低(P<0.05),仔鼠脑组织中IBA-1和NLRP3共表达相对荧光强度、炎性因子IL-6、IL-8及IL-1β水平、NLPR3及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1(caspase-1)蛋白表达均升高(P<0.05);与模型组相比,灯盏花素低、高剂量组孕鼠子宫、胎盘组织及仔鼠脑组织病理损伤均减轻,仔鼠存活数和体重、Nrf2及HO-1蛋白表达水平均升高(P<0.05),仔鼠脑组织中IBA-1和NLRP3共表达相对荧光强度、炎性因子IL-6、IL-8及IL-1β水平、脑组织中NLPR3及caspase-1蛋白表达均降低(P<0.05);且灯盏花素高剂量组效果优于灯盏花素低剂量组,差异有统计学意义(P<0.05);ML385可显著抑制灯盏花素高剂量组的干预效果(P<0.05)。结论灯盏花素可通过激活Nrf2通路而抑制宫内炎症致早产大鼠脑组织炎症反应,抑制小胶质细胞焦亡,减轻早产大鼠脑损伤。

85%高浓度氧长期暴露诱发早产大鼠肺损伤(英文)

目的探讨长期高浓度氧(85％)暴露对早产新生大鼠肺组织的损伤作用。方法早产SD大鼠生后第2天被随机分为Ⅰ空气组、Ⅱ高氧组(置85％O2中)。分别于暴露3,7,14 d后,检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中总蛋白(TP)、丙二醛(MDA)、羟脯氨酸(HYP)含量和细胞总数及分类,肺组织湿重/干重(W/D),肺组织胶原含量;于暴露3,7,14,21 d后,行肺组织病理学检查和辐射状肺泡计数(RAC)。结果3 d时Ⅱ组仅MDA含量增加(P<0.05);7,14 d时,Ⅱ组BALF中MDA,TP,HYP含量、细胞总数、细胞分类中性粒细胞所占比例及肺W/D均明显增加(P<0.05或<0.01)。两组肺胶原含量差异无显著性(P>0.05)。除3 d外,Ⅱ组肺组织病理学检查可见不同程度的肺泡炎改变和肺发育滞后。7 d时Ⅱ组RAC值较Ⅰ组明显减少[(5.9±0.9)vs(7.1±0.9)](P<0.05);14,21 d时RAC值Ⅱ组较Ⅰ组[(7.0±0.8)vs(9.9±0.6);(7.3±0.9)vs(10.5±0.8)]减少更明显(P<0.01)。结论85％O2长期暴露,可引起早产新生大鼠亚急性炎症性肺损伤和肺发育受抑。

高氧对早产大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞转分化的影响

目的:探讨高氧对早产鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞(typeIIalveolarepithelialcells,AECⅡ)转分化的影响。方法:原代培养早产大鼠的AECⅡ,建立高氧细胞损伤模型。利用倒置相差显微镜和透射电镜观察细胞的形态变化。用免疫细胞化学染色法检测AECⅡ特异性肺泡表面活性蛋白-C(surfactantproteinC,SP-C)及Ⅰ型肺泡上皮细胞(typeⅠalveolarepitheli-alcells,AECⅠ)特异性水通道蛋白5(aquaporin5,AQP5)的表达。用RT-PCR和流式细胞术分别检测SP-C、AQP5mRNA及蛋白的表达。结果:随着给氧时间的延长,原代培养的AECⅡ伸展变平,失去其板层体及微绒毛,丧失AECⅡ的特性,获得AECⅠ样外观。伴随其形态学改变,AECⅡ逐渐停止表达其特异性蛋白SP-C,开始表达AECⅠ特异性蛋白AQP5。高氧组给O2后24、48及72h,SP-CmRNA、SP-C+细胞的表达率及荧光指数(fluorescenceindex,FI)较同时间点的空气组明显降低,AQP5的上述指标在24h和48h则较空气组明显增加。高氧组给O2后72h,AQP5的表达开始减弱,与同时间点的空气组相比较无明显差异。结论:高氧诱导的早产大鼠AECⅡ转分化在肺泡上皮细胞损伤的修复中起重要作用。

维甲酸通过MAPKs信号通路减轻早产大鼠AECⅡ高氧性损伤

目的:探讨高氧暴露对原代培养的早产大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(AECⅡ)增殖和凋亡的影响以及维甲酸(RA)的保护作用机制。方法:建立原代培养的早产大鼠高氧暴露AECⅡ模型,采用流式细胞术(Annexin V-PI双标记)检测AECⅡ凋亡,Western blotting检测其磷酸化和总的ERK1/2、JNK1/2和p38表达以及增殖细胞核抗原(PCNA)和caspase-3表达。结果:高氧暴露12h,Annexin Ⅴ(+)PI(-)和Annexin Ⅴ(+)PI(+)标记的AECⅡ数均显著高于空气组(P<0.01),RA具有明显下调作用;同时,高氧暴露显著提高AECⅡ磷酸化ERK1/2、JNK1/2和p38表达以及caspase-3活性片段表达(P<0.01),明显降低其PCNA表达(P<0.01);RA则显著下调高氧暴露下AECⅡ磷酸化JNK1/2和p38表达以及caspase-3活化片段表达(P<0.01),明显提高磷酸化ERK1/2和PCNA表达(P<0.01)。结论:高氧暴露,导致AECⅡ大量凋亡、坏死,增殖受到抑制;RA通过下调JNK1/2和p38磷酸化水平、上调ERK1/2磷酸化水平,降低AECⅡ坏死、凋亡,促进其增殖,从而发挥拮抗高氧肺损伤的作用。

高氧、维甲酸对早产大鼠肺成纤维细胞MMP-2及TIMP-2表达的调控

目的:探讨维甲酸(RA)对高氧暴露下早产大鼠肺成纤维细胞(LFs)基质金属蛋白酶-2(MMP-2)及其特异性组织抑制物-2(TIMP-2)表达的影响。方法:建立原代培养的早产大鼠LFs高氧暴露模型,采用半定量RT-PCR方法检测MMP-2和TIMP-2 mRNA表达,明胶酶谱法检测MMP-2酶原和活酶表达,Western blot-ting检测其磷酸化和总的ERK1/2、JNK1/2、p38和c-Jun表达。结果:(1)与对照组比较,高氧可促进早产大鼠LFsMMP-2 mRNA及其酶原和活酶表达(P<0.05,P<0.01),同时使其p-ERK1/2、p-JNK1/2、p-p38和p-c-Jun表达水平显著提高(P<0.01,P<0.05);(2)RA能不同程度下调高氧诱导的早产大鼠LFsMMP-2 mRNA高表达和明显降低其p-JNK1/2、p-p38和p-c-Jun表达(P<0.01,P<0.05),但进一步提高p-ERK1/2表达;(3)高氧、RA对TIMP-2 mRNA和总ERK1/2、JNK1/2、p38及c-Jun表达无明显影响。结论:高氧暴露通过激活MAPKs信号转导通路(主要是JNK和p38)使c-Jun磷酸化水平提高,促进MMP-2表达和激活;RA通过抑制JNK和p38磷酸化,下调MMP-2表达与活化,从而拮抗高氧诱导的肺损伤。

产前使用硫酸特布他林促进早产大鼠肺液转运的研究

目的观察β2受体激动剂硫酸特布他林对早产新生大鼠肺液转运的影响及机制。方法随机将孕鼠分为5组,对照组,早产组,特布他林低、高剂量组及地塞米松组,于受孕后第16天起以灌胃方法连续3 d分别给予不同药物。对照组取足月分娩新生鼠,其余各组大鼠于孕第19天行剖宫产,取早产鼠;新生鼠处死后取肺组织,测定肺组织湿重/干重之比、Na+,K+-ATP酶活性和环磷酸腺苷(cAMP)水平。结果五组新生鼠肺组织湿重/干重、Na+,K+-ATP酶活性以及cAMP水平的差异均有统计学意义(P均<0.01)。肺组织湿重/干重,以早产组最高,对照组最低;高剂量组低于低剂量组和地塞米松组,差异有统计学意义(P均<0.05)。Na+,K+-ATP酶活性,以早产组最低,高剂量组最高;地塞米松组、低剂量组和高剂量组均较早产组升高;高剂量组高于低剂量组和地塞米松组,差异均有统计学意义(P均<0.05)。cAMP水平,以早产组最低,高剂量组最高;地塞米松组、低剂量组和高剂量组均较早产组升高;高剂量组高于低剂量组和地塞米松组,差异均有统计学意义(P均<0.05)。结论产前使用β2受体激动剂硫酸特布他林,可降低早产新生大鼠肺组织湿重/干重之比,提高肺组织cAMP水平和增加Na+,K+-ATP酶活性。

早产大鼠的脑发育是否存在另一个关键期

目的探讨大脑发育关键期后不同的营养方案对早产大鼠学习认知能力的影响。方法通过剖宫产法获得新生SD早产大鼠,仔鼠由代乳母鼠哺乳至21日龄。断奶后的早产仔鼠随机分为3组:早产标准蛋白组、早产低蛋白组和早产高蛋白组。从第22日龄起,低蛋白组给予低蛋白饲料(含8%蛋白质)喂养至实验结束,高蛋白组给予高蛋白饲料(含30%蛋白质)喂养至实验结束,标准蛋白组给予标准蛋白饲料(蛋白质含量18%)喂养至实验结束。各组大鼠分别在第6周和第8周进行Morris水迷宫实验,检测早产大鼠学习认知能力的改变。结果(1)定向航行实验:①早产大鼠6周龄时的逃避潜伏期在第3天和第4天的变化不明显,8周龄时的逃避潜伏期则随训练天数增加逐渐缩短。②8周龄早产高蛋白组大鼠的第4天逃避潜伏期明显低于6周龄早产高蛋白组大鼠(P<0.05)。(2)空间探索实验:①各组早产大鼠6周龄的穿越原平台时间和原平台所在象限时间占总时间的百分比差异均无显著性(P>0.05)。28周龄早产高蛋白组大鼠的穿越原平台时间和原平台所在象限时间占总时间的百分比均明显大于其余两组(P<0.05)。③8周龄早产高蛋白组大鼠的穿越原平台时间和原平台所在象限时间占总时间的百分比均明显大于6周龄早产高蛋白组大鼠(P<0.05)。结论在大脑发育关键期后的发育过程中,短时间加强营养的补给仍不能弥补早产对大鼠学习认知能力造成的损害。经过长时间高蛋白营养的补充,早产高蛋白组大鼠受损的学习认知能力可以得到恢复。早产大鼠的大脑发育过程中可能存在另一个发育关键期。

角化生长因子在慢性肺疾病早产大鼠的表达

目的探讨高氧致CLD早产大鼠KGF表达的变化规律.方法 60只新生早产大鼠随机分为2组,每组30只:A组-对照组;B组-高氧组(吸入95%O2).分别采用Western Blotting及RT-PCR检测肺组织KGF及其mRNA表达.结果高氧组肺内KGF及其mRNA表达高于对照组.结论高氧引起新生早产大鼠肺内KGF及其mRNA的表达随时间发生变化.

内质网应激与高氧诱导早产大鼠肺损伤的作用

目的探讨内质网应激在早产鼠高氧肺损伤中的作用。方法 48只新生早产Wistar大鼠在生后12 h随机分为对照组和高氧组,高氧组吸入95%的高浓度氧建立高氧肺损伤模型,对照组置于同一条件常压空气中。在处理后1、3、7 d分批断颈放血处死大鼠后取肺组织。每个时间点取动物8只,左肺制作石蜡切片,采用HE染色观察肺组织病理变化;免疫组织化学链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结(SP)法检测内质网应激相关指标,内质网蛋白57(ERp57)、CCAAT增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)在肺组织中的表达;采用原位末端标记法(TUNEL)检测肺细胞凋亡情况。结果高氧组肺组织呈典型的急性肺损伤改变。除了暴露3 d,其余时间点,高氧组ERp57和CHOP表达均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。随高氧暴露时间延长,高氧组ERp57表达呈增高趋势,差异有统计学意义(P<0.05);但CHOP表达在各时间点差异无统计学意义(P>0.05)。肺组织细胞凋亡指数随时间延长呈渐升趋势,在暴露1 d、3 d、7 d之间的差异有统计学意义(P<0.01);在各时间点,高氧组凋亡指数均高于对照组,差异有统计学意义(P均<0.01)。ERp57、CHOP表达与高氧组肺组织细胞凋亡指数呈显著正相关(P均<0.01)。结论内质网应激启动的凋亡途径参与高氧肺损伤,并发挥重要作用。

SOX9及WNT信号通路分子在高氧暴露致早产大鼠肺损伤中的表达及意义

目的观察SOX9及WNT信号通路分子在高氧暴露早产鼠肺组织中的表达,探讨高氧暴露早产大鼠肺组织损伤的发病机制。方法将72只1日龄早产SD大鼠随机均分为高氧组和空气组,每组36只,各组再随机均分为生后3 d组、5 d组、9 d组,每组12只。高氧组早产鼠置于氧体积分数为95%的氧箱中。各组分别在相应的时间处死动物后收集肺组织标本。采用苏木精-伊红(HE)染色法观察肺组织的病理改变,采用RT-PCR及Western blot法检测SOX 9及WNT信号通路中关键因子β-连环蛋白(β-catenin)及下游因子淋巴增强因子(LEF-1)、肺泡表面活性蛋白C(SPC)、α-平滑肌激动蛋白(α-SMA)在早产大鼠肺组织中的mRNA和蛋白表达水平。结果空气各组肺组织结构基本正常,高氧3d组肺组织见明显渗出、大量炎症细胞浸润、出血性改变及肺泡压缩,高氧5 d组和9 d组可见肺间隔增宽及肺泡结构紊乱。与空气组比,高氧组β-catenin、LEF-1、SPC及α-SMA mRNA及蛋白表达均增加(P<0.05),且随着高氧暴露天数的增加而增加;SOX9因子在高氧暴露3 d和5 d时mRNA和蛋白表达均高于空气组(P<0.01),且高氧暴露3 d组核酸2017-12-14接收及蛋白表达量高于高氧暴露5 d组,高氧暴露9 d时与空气组无明显变化(P>0.05),且表达量低于高氧5 d组。结论高氧暴露通过激活WNT信号通路致早产大鼠肺组织损伤;SOX 9基因在高氧暴露早产大鼠肺组织中可能通过抑制WNT信号通路来参与高氧肺损伤。

早产大鼠高氧暴露下肺组织TNF-αCaspase-3表达时相研究

目的探讨肿瘤坏死因子α(TNFα)及半胱氨酸蛋FB白酶3(Caspase3)在早产大鼠高氧肺损伤中的动态表达及其意义。方法孕21d的SD早产大鼠生后第2天,随机分为空气组和高氧组(均n=40)。高氧组大鼠予以85%高氧持续暴露,空气组大鼠置于空气中。于高氧暴露1d、4d、7d、14d和21d每组各处死8只大鼠,收集肺组织标本,苏木精-伊红染色观察肺组织病理形态学变化,双抗夹心ELISA法检测TNFα含量,免疫组化和Westernblot检测Caspase3表达。结果高氧暴露4d、7d和14d肺组织TNFα和Caspase3含量明显增高(均P<0.01),且两者之间具有显著相关性(r=0.93,P<0.01)。结论TNFα诱导Caspase3过度表达导致细胞凋亡可能是早产大鼠高氧肺损伤的发病机制之一。

母鼠哺乳期高蛋白饮食对早产大鼠学习能力的影响及其机制

目的探讨哺乳期高水平蛋白质供给对早产大鼠神经系统发育的影响及其机制。方法采用SPF级SD大鼠,足月组及早产组仔鼠均母乳喂养,母鼠哺乳期予以高蛋白饲料或标准蛋白饲料,分为早产高蛋白组、早产标准蛋白组、足月高蛋白组和足月标准蛋白组,每组16只仔鼠。从第22天起哺乳期结束,各组仔鼠均予标准蛋白饲料喂养。仔鼠喂养至6周或8周,采用Morris水迷宫行定位航行实验,记录逃避潜伏期。定位航行实验结束后,采用免疫组织化学方法检测脑组织海马区哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,m TOR)阳性细胞表达。采用方差分析、t检验进行统计分析。结果 (1)6周龄:随训练天数的延长,各组大鼠的逃避潜伏期均逐渐缩短。第4天,早产标准蛋白组的逃避潜伏期高于足月标准蛋白组[(40.5±11.9)与(28.3±10.2)秒],海马CA1区m TOR阳性细胞数量低于足月标准蛋白组[(35.2±2.9)与(45.7±6.5)个](P值均﹤0.05)。虽然早产高蛋白组的逃避潜伏期低于早产标准蛋白组,但差异无统计学意义[(34.4±12.8)与(40.5±11.9)秒,P﹥0.05]。早产高蛋白组与足月高蛋白组的逃避潜伏期[(34.4±12.8)与(28.1±16.4)秒]、m TOR阳性细胞数量[(36.1±3.7)与(39.4±1.7)个]比较,差异无统计学意义(P值均﹥0.05)。(2)8周龄:第4天的逃避潜伏期,早产高蛋白组与标准蛋白组比较[(29.6±13.5)与(25.2±11.0)秒],早产高蛋白组与足月高蛋白组比较[(29.6±13.5)与(23.8±11.6)秒],早产标准蛋白组与足月标准蛋白组比较[(25.2±11.0)与(23.5±10.4)秒],差异均无统计学意义(P﹥0.05)。比较海马CA1区m TOR阳性细胞数量,早产高蛋白组低于足月高蛋白组[(36.9±3.6)与(44.1±7.2)个],早产标准蛋白组低于足月标准蛋白组[(39.6±2.8)与(53.0±5.9)个](P值均﹤0.05);同胎龄中,不同蛋白组组间比较差异无统计学差异(P﹥0.05)。结论母鼠哺乳期高蛋白饮食干预,可促进早产大鼠的早期学习能力改善,但高蛋白营养对早产大鼠学习能力的影响可能需要长时间积累。

高良姜素调节AMPK/SIRT1/PGC-1α信号通路对高氧致早产大鼠肺损伤的影响

目的探讨高良姜素(Ga)对高氧致早产大鼠肺损伤及腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)/沉默信息调节因子1(SIRT1)/过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅活化因子1α(PGC-1α)信号通路的影响。方法建立高氧致早产大鼠肺损伤模型,将大鼠分为对照组(Control组)、模型组(Model组)、Ga低剂量组(Ga-L组)、Ga高剂量组(Ga-H组)、Ga-H+AMPK抑制剂Dorsomorphin组(Ga-H+Dors组);检测大鼠肺湿重/干重比值;H-E染色观察肺组织病理变化;ELISA检测支气管肺泡灌洗液(BALF)肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)水平;试剂盒检测超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和谷胱甘肽(GSH)水平;TUNEL染色检测肺组织细胞凋亡情况;Western blot检测Bcl-2相关X蛋白(Bax)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、AMPK、SIRT1、PGC-1α蛋白表达。结果与Control组相比,Model组早产大鼠肺湿重/干重比值、TNF-α、IL-6、MDA、细胞凋亡率、Bax水平升高,SOD、GSH、Bcl-2、p-AMPK/AMPK、SIRT1、PGC-1α水平降低(P<0.05);与Model组相比,Ga-L、Ga-H组早产大鼠肺湿重/干重比值、TNF-α、IL-6、MDA、细胞凋亡率、Bax水平降低,SOD、GSH、Bcl-2、p-AMPK/AMPK、SIRT1、PGC-1α水平升高(P<0.05);Dorsomorphin减弱了Ga-H对高氧致早产大鼠肺损伤的改善作用。结论Ga可能通过激活AMPK/SIRT1/PGC-1α通路,抑制炎症、氧化应激和细胞凋亡,减轻高氧致早产大鼠的肺损伤。

短链脂肪酸对早产大鼠结肠黏膜屏障功能的影响及机制

目的探讨短链脂肪酸对早产大鼠结肠黏膜屏障功能的影响及机制。方法研究时间为2021年1—12月。将早产仔鼠分为早产组及短链脂肪酸组,足月产仔鼠为足月组,每组均为12只。出生后第7天开始灌胃,短链脂肪酸组大鼠灌胃短链脂肪酸制剂,早产组及足月组灌胃等量生理盐水,连续7 d,并记录大鼠体质量。仔鼠在2周龄时麻醉处死,收集近端结肠组织。使用尤斯室测量结肠黏膜跨上皮电阻,蛋白质印迹及免疫组化法检测近端结肠黏膜紧密连接相关蛋白的表达。结果早产组、短链脂肪酸组、足月组大鼠生后7 d体质量分别为(17.5±0.7)g、(17.4±0.8)g、(19.4±0.6)g,短链脂肪酸组与足月组大鼠生后7 d体质量比较差异有统计学意义(t=5.743,P<0.05)。早产组、短链脂肪酸组、足月组大鼠生后14 d体质量分别为(28.5±0.6)g、(31.7±0.9)g、(33.6±0.7)g,短链脂肪酸组与足月组大鼠生后14 d体质量比较差异有统计学意义(t=4.827,P<0.05),短链脂肪酸组与早产组大鼠生后14 d体质量比较差异有统计学意义(t=8.276,P<0.05)。早产组、短链脂肪酸组、足月组大鼠生后7 d结肠黏膜跨上皮电阻分别为(41.4±1.9)Ω·cm^(2)、(40.9±1.6)Ω·cm^(2)、(49.8±1.6)Ω·cm^(2),短链脂肪酸组与足月组大鼠生后7 d结肠黏膜跨上皮电阻比较差异有统计学意义(t=11.060,P<0.05)。早产组、短链脂肪酸组、足月组大鼠生后14 d结肠黏膜跨上皮电阻分别为(56.9±2.4)Ω·cm^(2)、(71.7±2.2)Ω·cm^(2)、(70.4±1.8)Ω·cm^(2),短链脂肪酸组与足月组大鼠生后14 d结肠黏膜跨上皮电阻比较差异有统计学意义(t=8.635,P<0.05),短链脂肪酸组与早产组大鼠生后14 d结肠黏膜跨上皮电阻比较差异有统计学意义(t=4.085,P<0.05)。与足月组比较,短链脂肪酸组大鼠结肠黏膜中ZO-1、Claudin-8、Claudin-1蛋白表达均显著降低(均P<0.05)。与早产组比较,短链脂肪酸组大鼠结肠黏膜中ZO-1、Claudin-8、Claudin-1蛋白表达均显著升高(均P<0.05)。结论短链脂肪酸通过提高紧密连接相关蛋白ZO-1、Claudin-8、Claudin-1表达改善早产大鼠结肠黏膜屏障功能。

上皮-间充质转化在高氧诱导大鼠支气管肺发育不良模型中的作用及机制研究

目的探讨上皮-间充质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)在大鼠支气管肺发育不良(bronchopulmonary dysplasia,BPD)模型中的作用及机制。方法实验分为两部分。(1)将48只早产大鼠随机分为常氧组和高氧组,每组24只。高氧组暴露于85%氧气中建立早产大鼠BPD模型,常氧组置于同一室内常压空气中,于实验第1、4、7、14天收集早产大鼠肺组织标本。(2)将大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞系(RLE-6TN)随机分为常氧组(常规空气中培养)和高氧组(在95%氧气中培养),分别于高氧暴露后12 h、24 h、48 h收集细胞标本进行检测。使用苏木精-伊红染色法观察早产大鼠肺泡化情况,免疫荧光检测早产大鼠肺组织和RLE-6TN细胞肺表面活性蛋白C(surfactant protein C,SPC)和α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)的共定位。实时荧光定量聚合酶链反应和蛋白免疫印迹法检测早产大鼠肺组织和RLE-6TN细胞EMT相关mRNA和蛋白表达水平。结果(1)与常氧组相比,高氧暴露7 d开始高氧组早产鼠可见肺泡化阻滞和肺泡结构简单化改变;肺组织中SPC和α-SMA存在明显共定位现象,高氧暴露7 d、14 d时,与常氧组比较,高氧组SPC表达减少,α-SMA表达增加;高氧暴露7 d、14 d时,与常氧组比较,高氧组TGF-β1、α-SMA、N-钙黏蛋白mRNA和蛋白表达水平升高(P<0.05),SPC、E-钙黏蛋白mRNA和蛋白表达水平降低(P<0.05)。(2)高氧暴露24 h、48 h时,与常氧组比较,高氧组SPC表达减少,α-SMA表达增加;高氧暴露48 h时,与常氧组比较,高氧组SPC、E-钙黏蛋白mRNA和蛋白表达降低(P<0.05),TGF-β1、α-SMA、N-钙黏蛋白mRNA和蛋白表达升高(P<0.05)。结论EMT破坏了BPD早产大鼠肺泡上皮细胞之间的紧密连接,造成肺泡结构简单化和发育异常,参与了BPD的发生发展。

低聚半乳糖对早产大鼠肠道菌群的调节作用

目的探讨低聚半乳糖(GOS)对早产大鼠肠道菌群的调节作用。方法早产新生大鼠分为GOS组和对照组,GOS组每天滴管喂养GOS 4g/kg,共14d。于喂养GOS后7d和14d,观察大鼠一般情况并称质量,同时取大鼠直肠末端粪便,行双歧杆菌、乳酸杆菌、肠杆菌及肠球菌培养并行菌落计数。结果 GOS组与对照组在给药期间均正常生长,精神状态等未见异常。与对照组比较,GOS组体质量增长差异无统计学意义(P>0.05),使用GOS 7d时,双歧杆菌、乳酸杆菌、肠杆菌及肠球菌与同时间点对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。使用GOS 14d后,大鼠粪便中双歧杆菌、乳酸杆菌较对照组明显增加,而肠杆菌、肠球菌明显减少,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论低聚半乳糖可促进早产鼠双歧杆菌和乳酸杆菌增长,抑制肠杆菌及肠球菌生长,从而调节肠道菌群平衡。

利多卡因对高氧暴露早产大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞损伤的保护作用

目的观察利多卡因(Lido)对高氧暴露的早产大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(AECⅡ)增殖和凋亡的影响,为防治早产儿高氧肺损伤提供依据。方法原代培养的早产大鼠AECⅡ随机分为4组:空气组、高氧组、空气+Lido组、高氧+Lido组。高氧、高氧+Lido组按5 L/min通入95%O2/5%CO2高纯混合气,10 min后密封。空气+Lido、高氧+Lido组加入20μg/mL Lido。各组均置于培养箱(37℃,5%CO2)中培养24 h,收集各组细胞,采用流式细胞仪检测AECⅡ凋亡率和细胞周期;运用Western blot检测增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白表达。结果与空气组比较,高氧组AECⅡ凋亡率增高,G2/M、S期细胞比例明显降低(P<0.01);PCNA蛋白表达明显下调(P<0.01)。而Lido干预后可使AECⅡ凋亡率降低,G2/M、S期细胞比例增高,PCNA蛋白表达上调。结论高氧可使早产大鼠AECⅡ凋亡增加,增殖抑制;Lido对高氧所致的AECⅡ损伤有直接的抑制作用。

高氧暴露对早产大鼠肺组织中HO-1与iNOS表达的影响

目的探讨血红素加氧酶-1(HO-1)与诱导型一氧化氮合酶(iNOS)在高氧肺损伤大鼠中的表达及作用。方法将3日龄早产Sprague-Dawley大鼠64只随机分为高氧组、空气组(每组32只),于实验3 d及7 d时,分别检测空气组和高氧组肺组织HO-1活性、肺泡灌洗液中NO、肺组织病理学改变及HO-1、iNOS在肺内的分布和表达(免疫组织化学方法)。结果 3 d、7 d高氧组存在明显急性肺炎症性改变,iNOS在中性粒细胞的表达、灌洗液中NO含量明显高于空气组(P均<0.01),且7 d高氧组高于3 d高氧组(P<0.05);3 d、7 d时高氧组巨噬细胞HO-1表达高于空气组(分别P<0.05,P<0.01),且7 d高氧组显著高于3 d高氧组(P<0.01)。结论 HO-1与iNOS在高氧肺损伤大鼠中的表达是增高的,HO-1与iNOS均可能参与了高氧肺损伤。

早产鼠高氧暴露后肺组织血管内皮生长因子和一氧化氮合酶的动态变化及相互关系

目的最近研究表明,血管内皮生长因子(VEGF)及内皮型一氧化氮合酶(eNOS)功能的缺失,在支气管肺发育不良(BPD)发病机制中发挥了重要的作用。该文通过动态观察持续中浓度高氧暴露(60%O2)对早产大鼠肺内VGEF蛋白及mRNA和eNOS蛋白及mRNA表达的影响,探讨BPD的发病机制。方法将21d孕早产鼠随机分为高氧暴露组(简称高氧组)和空气对照组(简称空气组),分别置于常压高氧仓中(60%O2)和正常空气中暴露。分别于生后1,4,7,11,14d每组各处死6只大鼠,留取肺组织标本。苏木精-伊红染色观察病理改变,免疫组化检测VEGF和eNOS蛋白表达,逆转录-聚合酶链反应方法检测VEGF和eNOS mRNA表达。结果早产鼠高氧暴露4d后出现肺泡间隔减少,微血管发育异常,间质纤维化,且病变随着高氧暴露时间的延长而加重。高氧组大鼠第4,7天时肺组织VEGF蛋白表达明显低于相应空气对照组(P<0.05),VEGF mRNA表达亦显著减少(P<0.05)。随着暴露时间的延长,VEGF蛋白和mRNA进行性降低。高氧组大鼠在高氧暴露过程中肺组织eNOS蛋白和mRNA表达亦随着暴露时间的延长而降低。结论高氧暴露导致早产鼠肺组织VEGF和eNOS表达持续性减少,微血管发育异常和肺泡化受阻。这些由高氧暴露诱导产生的BPD样损害,可能与VEGF和eNOS的表达下调有关,且二者之间存在着密切的联系。

维甲酸对高氧暴露早产大鼠胰岛素样生长因子系统表达的影响

目的探讨维甲酸(RA)对高氧暴露下早产大鼠肺组织胰岛素样生长因子Ⅱ(IGF-Ⅱ)、Ⅱ型IGF受体(IGF-2R)及IGF结合蛋白2(IGFBP-2)mRNA和多肽表达的影响及其抗损伤机制。方法260只孕21d剖宫产鼠为早产鼠,生后第2天随机分为四组,Ⅰ组:空气+生理盐水;Ⅱ组:高氧(85%O2)+生理盐水;Ⅲ组:空气+RA;Ⅳ组:高氧+RA。Ⅱ、Ⅳ组持续暴露于85%氧气中,Ⅰ、Ⅲ组置于空气中;Ⅲ、Ⅳ组从生后第3天起每日腹腔注射RA,Ⅰ、Ⅱ组每日注射生理盐水。分别于生后4、7、10、14、21d记病死率,取肺标本作辐射状肺泡计数(RAC);测IGF-Ⅱ、IGF-2R和IGFBP-2mRNA表达强度(RT-PCR)或多肽表达强度(Western印迹)。结果(1)存活率:7d内四组差异无统计学意义;7d后各时间点Ⅱ、Ⅳ组明显低于Ⅰ、Ⅲ组(P<0.05或<0.01),但Ⅳ组明显高于Ⅱ组(P<0.01)。(2)RAC结果:4d时,Ⅱ、Ⅳ组RAC值即明显减少(P<0.01);随后与对应Ⅰ、Ⅲ组比较差异有统计学意义(P<0.01),但Ⅳ组明显高于Ⅱ组(P<0.01)。(3)RT-PCR结果:IGF-ⅡmRNA表达强度:与Ⅰ、Ⅲ组相比,Ⅱ、Ⅳ组4d时表达即增强(P<0.01);14d时,Ⅱ组较Ⅰ组、Ⅳ组较Ⅲ组表达差异有统计学意义(P<0.01);其中Ⅳ组表达较Ⅱ组相对降低(P<0.01);IGF-2RmRNA表达强度在4和14d时,Ⅱ、Ⅳ组明显高于Ⅰ、Ⅲ组(P均<0.01),而Ⅳ组明显低于Ⅱ组(P<0.01);IGFBP-2mRNA表达强度:Ⅱ、Ⅳ组明显强于相应的Ⅰ、Ⅲ组,但14d时Ⅳ组表达低于Ⅱ组(P<0.01)。肽表达强度结果:IGF-Ⅱ多肽、IGF-2R膜蛋白、IGFBP-2多肽的表达强度与其各自的mRNA表达变化相似。结论RA可部分逆转高氧引发的肺发育阻滞;RA下调高氧暴露下肺组织中IGFBP-2、IGF-Ⅱ和IGF-2R的表达可能是其干预肺损伤的机制之一。