CLD早产鼠肺组织内TGF -β1的动态表达及其对细胞外基质的影响(英文)

目的 近年来发现慢性肺疾病 (CLD)早产儿支气管肺泡灌洗液中转化生长因子 β1(TGF β1)及I型胶原等细胞外基质 (ECM )水平增高 ,但由于临床研究的局限性 ,缺乏与肺组织ECM的对照研究。因此探讨TGF β1在早产鼠CLD发生、发展中的变化规律及对ECM的影响对完善早产儿CLD的发生机制有重要意义。 方法 将 6 0例早产鼠随机分为模型组和对照组 ,于实验后 1,3,7,14和 2 1d ,应用免疫组织化学和酶联免疫吸附法 ,分别观察及测定肺组织TGF β1分布、表达强度及I型胶原、纤维连接蛋白 (FN)及透明质酸 (HA)的含量。 结果 正常肺组织TGF β1仅在支气管上皮细胞或血管内皮细胞有微弱表达 ;而模型组 1d和 3d时 ,TGF β1表达同正常对照组 ,7d时少量肺泡巨噬细胞、肺泡上皮细胞及肺间质细胞开始表达 ,其表达强度高于对照组 ,差异有显著性(P <0 .0 5 ) ,14d时明显增强 ,差异有极显著性意义 (P <0 .0 1) ,2 1d达高峰 ;1,3和 7d时 ,两组肺组织I型胶原含量无差异 (P >0 .0 5 ) ,而 14d时 ,模型组高于对照组 ,差异有显著性 (P <0 .0 5 ) ,2 1d时明显高于对照组 ,差异有极显著性意义 (P <0 .0 1) ;不同吸氧时间 ,两组肺组织FN及HA含量均差异无显著性意义 (P >0 .0 5 ) ;模型组在 14d和 2 1d时 ,肺组织TGF β1表达与I型胶原含?

caspase-3基因在高氧致早产鼠慢性肺疾病中的表达及其作用

目的:探讨caspase-3在高氧致早产鼠慢性肺疾病(CLD)中的表达及其对肺上皮细胞(AEC)凋亡的影响。方法:将60例早产鼠随机分为模型组和对照组,分别于建立模型后1,3,7,14,21d应用TUNEL和RT-PCR技术,动态检测AEC的凋亡指数(AI)和肺组织caspase-3基因表达。结果:暴露于高氧后3dAEC的AI及肺组织的caspase-3 mRNA水平开始升高(P<0.05),7～21d维持高水平(P<0.01),且肺组织caspase-3 mRNA表达与AEC的AI呈显著相关性(γ=0.69,P<0.01)。结论:高氧诱导的肺组织caspase-3基因过度表达可能是CLD早产鼠肺上皮细胞凋亡的重要机制之一。

结缔组织生长因子在高氧致早产鼠慢性肺疾病中的表达及其作用

目的肺纤维化是高氧致慢性肺疾病(chroniclungdiseases,CLD)的最终结局,结缔组织生长因子(connectivetissuegrowthfactor,CTGF)是近年来发现的与纤维化形成密切相关的因子,但其在CLD肺纤维化中的作用目前尚未见报道。该实验旨在研究CTGF在高氧致CLD中的动态表达规律,并探讨其在CLD中的作用。方法将50例早产鼠随机分为实验组(高氧组)和对照组(空气组),分别于建立模型后1,3,7,14,21d应用免疫组化技术动态检测肺组织中CTGF的表达部位和强度,对肺组织纤维化程度进行病理组织学评分。结果对照组小鼠CTGF仅在血管内皮细胞、支气管、细支气管上皮细胞有微弱表达;实验组于建立模型后1,3,7d表达部位与对照组相似,表达强度与对照组无差异(P>0.05),14d表达增强(P<0.01),在部分肺上皮细胞、肺泡间隔、成纤维细胞中出现表达,21d表达明显增强(P<0.01)。高氧组14d和21dCTGF表达水平与肺组织纤维化程度呈明显正相关(分别为r=0.903,r=0.926,均P<0.01)。结论随着高氧暴露时间的延长和纤维化的发展,CTGF表达增强,其与高氧所致CLD肺纤维化的发生密切相关。

高氧诱导早产鼠肺纤维化中结缔组织生长因子的表达及其意义

目的结缔组织生长因子(CTGF)是新近发现与纤维化发生密切相关的一种因子,但其与早产儿慢性肺疾病(CLD)的肺纤维化有何关系,迄今未见报道。该文旨在阐明CTGF在高氧致早产鼠CLD发生、发展的表达规律,并探讨其在纤维化中表达及意义。方法采用高浓度氧诱导早产鼠CLD模型,应用酶联免疫吸附法(ELISA)、免疫组织化学及反转录聚合酶链反应(RT-PCR)等技术,动态观察CTGF mRNA表达,并同时测定肺成纤维细胞的增殖性细胞核抗原(PCNA)指数及肺组织Ⅰ型胶原的含量和TGF-β1蛋白表达水平。结果生后1d,3d,两组Ⅰ型胶原、PCNA指数、TGF-β1蛋白及CTGF mRNA表达水平无差异(P>0.05);实验组肺组织TGF-β1蛋白表达7d升高(P<0.05),Ⅰ型胶原、PCNA指数及CTGF mRNA表达14d升高(P<0.05),21d均达高峰(P<0.01);肺组织CTGF mRNA表达与Ⅰ型胶原呈明显正相关(γ=0.89,P<0.01)。结论高氧致CLD早产鼠肺组织CTGF mRNA表达水平与肺组织纤维化的程度相一致,CTGF与CLD的肺纤维化密切相关。

高氧致慢性肺疾病早产鼠肺组织细胞周期依赖蛋白激酶-4、p21表达及其对纤维化的影响

目的研究慢性肺疾病(CLD)早产鼠的肺组织细胞周期依赖蛋白激酶-4(CDK4)及细胞周期依赖蛋白激酶抑制因子(p21)动态表达规律及其意义。方法将80只早产鼠随机分为模型和对照组(每组40只),采用高体积分数氧诱导CLD模型,于实验后1、3、7、14、21 d分别应用酶联免疫吸附法及免疫组织化学技术检测其肺组织Ⅰ型胶原和CDK4、p21蛋白表达。结果与对照组比较,实验组14和21 d Ⅰ型胶原水平及CDK4表达增加,而p21表达水平降低。实验组14和21 d CDK4表达水平与肺纤维化程度呈明显正相关;p21与肺纤维化程度呈明显负相关。结论高氧诱导早产鼠肺组织CDK4及p21异常表达,可能是CLD肺纤维化发生的机制之一。

慢性肺疾病早产鼠肺组织转化生长因子β_1基因及蛋白表达的动态变化(英文)

目的近年来研究发现慢性肺疾病(CLD)早产儿支气管肺泡灌洗液中转化生长因子-β1(TGF-β1)水平明显升高,但其表达在CLD发生、发展中动态变化规律及与CLD的肺泡发育障碍的关系尚不明确。该研究探索高氧致CLD肺组织TGFβ1基因及蛋白表达特点及对其肺发育的影响。方法采用高浓度氧诱导早产鼠CLD模型,应用反转录聚合酶链反应(RTPCR)、免疫组织化学及图像分析等技术,动态观察肺系数、放射状肺泡计数(RAC)的变化,并同时测定肺组织TGF-β1mRNA及蛋白表达水平。结果生后1d,3d,两组肺系数、RAC无差异(P>0.05),7d和14d时实验组肺系数、RAC低于对照组(P<0.05),21d时RAC明显降低(P<0.001),但两组肺系数无差异;实验组肺组织TGFβ1mRNA水平3d高于对照组(P=0.005),14d达高峰(P<0.001),21d稍有下降,但仍高于对照组(P=0.005);实验组肺组织TGFβ1蛋白表达7d增高(P=0.036),21d达高峰(P<0.001);肺组织TGF-β1蛋白表达与RAC呈显著负相关(P=0.003)。结论暴露高氧环境中早产鼠肺组织TGF-β1蛋白表达的动态变化与其肺发育障碍的程度相一致,TGF-β1是抑制肺泡发育的重要因子。

中性粒细胞数在高氧肺损伤早产鼠肺泡内的变化

目的:探讨早产鼠吸入高浓度氧所致肺损伤时肺泡内中性粒细胞(PMN)数量的变化。方法:生后6 h的SD早产鼠120只,随机分为空气组和高氧组,每组60只。空气组常规饲养,高氧组置常压高氧箱内,吸入氧体积分数>900 mL/L,两组分别于实验进行24 h、3、5、10、14 d取肺组织观察病理变化,肺泡灌洗获取肺泡灌洗液(BALF),离心,取沉淀做PMN计数。结果:①空气组随着日龄增加肺泡结构逐渐分化;高氧组3 d起可见小血管扩张、充血,肺泡及间隔内有炎性细胞浸润,肺泡腔内有红细胞渗出;随着吸氧时间延长,肺间隔增厚,大量PMN浸润,肺发育受阻,肺泡简化。②从第3天起,高氧组BALF中PMN增多,与相应同日龄空气组比较,差异有统计学意义(均P<0.01)。结论:PMN参与了高氧肺损伤的发生发展过程,是导致高氧肺损伤的重要炎症细胞。

早产鼠高氧肺损伤中肺泡内IL-8的含量变化

目的探讨早产鼠高氧肺损伤时肺泡内白介素8(IL-8)的含量变化。方法生后6 h的SD早产鼠120只,随机分为空气组和高氧组,每组60只。空气组常规饲养,高氧组置常压高氧箱内,吸入氧体积分数>900 ml/L,两组分别于实验进行24 h、3 d、5 d、10 d、14 d取肺组织观察病理变化,用双抗体夹心法检测肺泡灌洗液(BALF)中IL-8含量。结果空气组随着日龄增加肺泡结构逐渐分化;高氧组3 d始见小血管充血扩张,红细胞渗出至肺泡腔,肺泡及间质见炎性细胞浸润;随着吸氧时间延长,肺发育受阻,肺泡结构紊乱,肺泡数量减少。从第3天起,BALF中IL-8含量显著增高,与相应同日龄空气组比较,差异有统计学意义(P均<0.01)。结论 IL-8参与了高氧肺损伤的发生发展过程,是导致高氧肺损伤的重要炎症介质。

宫内炎性暴露对早产鼠巨核细胞及血小板稳态的影响

目的探索宫内炎性暴露对新生鼠的巨核细胞和血小板稳态的影响,为解析宫内感染致新生儿血小板减少症的分子机制提供动物实验依据。方法按怀孕时间将SD孕鼠共24只随机分为内毒素(LPS)组和对照组各12只。将LPS(0. 79mg/kg)和等量0. 9%氯化钠注射液分别在孕8d、10d和12d给LPS组和对照组孕鼠进行腹腔注射。在孕21d(预产期为22d)剖宫产娩出早产鼠,其中LPS组娩出118只早产鼠,对照组娩出144只,在两组中分别随机抽取早产鼠23只,纳入LPS早产鼠组和对照早产鼠组,在其出生后1h内采集外周血、骨髓、肺组织、肝脏及肾脏组织标本,再运用全血细胞分析和血浆凝集培养方式分别检测早产鼠循环中巨核细胞数和骨髓巨核细胞集落单位(CFU-MK)及运用流式细胞分析方法检测循环中血小板表面标志物CD62P的表达。运用ELISA分别检测早产鼠肝脏和肾脏血小板生成素(TPO)水平和TPO的表达。同时,通过电镜观察肺毛细血管血小板聚集现象。结果相对于对照早产鼠组(n=23),LPS早产鼠组的外周血小板计数较低[LPS早产鼠组和对照早产鼠组:(239.22±63.00)×10~9/L vs.(377.96±79.90)×109/L,P<0.001],循环中MK计数低[(5.78±1.70)/mL vs.(8.30±1.90)/mL, P <0.001]和CFU-MK[(9.52±2.80)/10~5 cell vs.(15.83±3.60)/10~5 cell,P<0.001];血小板表面标志物CD62P阳性率较低[(43. 05±6.30)%vs.(34. 91±12.10)%,P <0.001];血浆TPO水平显著增高[(482.44±91.20) pg/mL vs.(294.70±68.20) pg/mL,P<0.001],肝脏TPO mRNA表达增多,肾脏TPO mRNA表达显著减少。通过电镜在LPS早产鼠组可观察到肺毛细血管内血小板聚集现象,而在对照组早产鼠肺内没观察到类似现象。结论宫内炎性暴露可能损害了早产鼠巨核细胞和血小板稳态。其可能影响机制为:(1)损害了骨髓巨核细胞稳态;(2)增加血小板的活化;(3)反馈性促进了TPO的生成。

动力相关蛋白和视神经萎缩症蛋白在高氧诱导早产鼠肺损伤中的作用

目的研究动力相关蛋白(DRP1)和视神经萎缩症蛋白(OPA1)在高氧诱导早产大鼠肺损伤时细胞凋亡中的作用。方法随机将早产Wistar大鼠48只分为高氧组(吸入95%的氧)和对照组(吸入21%氧)。1、3、7d分批离断早产鼠处死后取肺组织做石蜡切片。观察早产鼠肺组织的病理学变化及线粒体形态变化相关的蛋白;评价各组早产大鼠肺组织细胞凋亡情况。结果DRP1和OPA1表达于肺组织细胞的胞质,与对照组相比,高氧组DRP1/OPA1的表达呈时间依赖性,1d时开始增加,7d时表达最高;高氧组1d时OPA1表达有所减少,7d最少;高氧组1d时DRP1表达开始增加,7d时表达显著升高。高氧组可见大量末端转移酶标记技术(TUNEL)阳性细胞,随着高氧暴露时间延长,凋亡指数呈逐渐增高趋势。7d时凋亡细胞数达高峰。在高氧组,DRP1/OPA1比值表达与细胞凋亡指数相比,呈显著正相关(r=0.725,P<0.01)。结论高氧暴露可致早产鼠肺组织产生时间依赖急性肺损伤改变。

人重组促红细胞生成素在早产鼠脑室周围白质损伤模型鼠脑白质中的促血管新生作用及机制

目的探究人重组促红细胞生成素(rh-EPO)在早产鼠脑室周围白质损伤模型鼠脑白质中的促血管新生作用及机制。方法选取繁育的3日龄早产大鼠126只,随机分为rh-EPO组、缺血缺氧组以及对照组。对照组:不建立脑损伤模型,假手术后腹腔注射0.12 ml/g生理盐水;缺血缺氧组:建立脑损伤模型,术后腹腔注射0.12 ml/g生理盐水;rh-EPO组:建立脑损伤模型,术后予5 U/g rh-EPO腹腔注射。三组术后第2天、第4天,应用实时荧光定量PCR、免疫组织化学以及Western blot法测定微血管密度(MVD)、EphB4、CD34蛋白以及epbrinB2表达情况。结果术后2 d:未见微血管的形成;rh-EPO组的EphB4、CD34蛋白以及epbrinB2含量均较缺血缺氧组和对照组高,差异具有统计学意义(P<0.001)。术后4 d:rh-EPO组MVD、CD34蛋白、EphB4、epbrinB2均较缺血缺氧组和对照组高(P<0.001)。结论rh-EPO具有促进早产大鼠血管新生的作用。

早产鼠高氧暴露后肺组织血管内皮生长因子和一氧化氮合酶的动态变化及相互关系

目的最近研究表明,血管内皮生长因子(VEGF)及内皮型一氧化氮合酶(eNOS)功能的缺失,在支气管肺发育不良(BPD)发病机制中发挥了重要的作用。该文通过动态观察持续中浓度高氧暴露(60%O2)对早产大鼠肺内VGEF蛋白及mRNA和eNOS蛋白及mRNA表达的影响,探讨BPD的发病机制。方法将21d孕早产鼠随机分为高氧暴露组(简称高氧组)和空气对照组(简称空气组),分别置于常压高氧仓中(60%O2)和正常空气中暴露。分别于生后1,4,7,11,14d每组各处死6只大鼠,留取肺组织标本。苏木精-伊红染色观察病理改变,免疫组化检测VEGF和eNOS蛋白表达,逆转录-聚合酶链反应方法检测VEGF和eNOS mRNA表达。结果早产鼠高氧暴露4d后出现肺泡间隔减少,微血管发育异常,间质纤维化,且病变随着高氧暴露时间的延长而加重。高氧组大鼠第4,7天时肺组织VEGF蛋白表达明显低于相应空气对照组(P<0.05),VEGF mRNA表达亦显著减少(P<0.05)。随着暴露时间的延长,VEGF蛋白和mRNA进行性降低。高氧组大鼠在高氧暴露过程中肺组织eNOS蛋白和mRNA表达亦随着暴露时间的延长而降低。结论高氧暴露导致早产鼠肺组织VEGF和eNOS表达持续性减少,微血管发育异常和肺泡化受阻。这些由高氧暴露诱导产生的BPD样损害,可能与VEGF和eNOS的表达下调有关,且二者之间存在着密切的联系。

联合应用促红细胞生成素和粒细胞集落刺激因子对早产鼠缺氧缺血性脑损伤的保护作用

目的探讨联合应用促红细胞生成素(EPO)和粒细胞集落刺激因子(G-CSF)对早产鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)模型的神经保护作用。方法将7日龄早产鼠结扎右侧颈总动脉,置80 mL/L氧环境中放置2 h,制备HIBD模型。实验分为假手术组、对照组、EPO治疗组、G-CSF治疗组和EPO加G-CSF联合治疗组。EPO、G-CSF及EPO加G-CSF治疗组分别于进缺氧仓前30 min、出缺氧仓后即刻及以后1次/d腹腔注射EPO(5 000 IU/kg),G-CSF(50μg/kg),以及EPO(5 000 IU/kg)加G-CSF(50μg/kg),连续1周。假手术组不予任何药物,对照组为相同时间点腹腔注射磷酸盐缓冲液(PBS)。通过测量各组脑质量、脑损伤比率、组织学检查及姿势反射实验观察EPO、G-CSF及EPO加G-CSF联合应用的疗效。采用SPSS10.0软件进行统计学分析。结果对照组一般情况无明显改变,术后1周及3周脑质量减低明显,脑损伤比率明显大于假手术组(P<0.001,0.01),形态学发现大脑半球出现明显萎缩,有神经元变性坏死。术后3周姿势反射正常率明显低于假手术组(P<0.001)。经EPO,G-CSF及EPO加G-CSF处理后,与对照组比较,各治疗组早产鼠脑质量有所增加(P<0.05,0.01),脑损伤比率明显减小(P<0.05,0.01),形态学发现大脑皮质萎缩程度均有不同程度的减小,神经元变性及脱失较对照组减轻。术后3周姿势反射实验正常率明显提高(P<0.05)。结论EPO和G-CSF对早产鼠HIBD具有一定神经保护作用,二者联合应用可达到更好保护效果。

硫氧还蛋白在早产鼠高氧肺损伤中的动态表达及其临床意义

目的研究高氧肺损伤早产鼠肺组织硫氧还蛋白(Trx)的表达及其临床意义。方法早产新生SD大鼠128只,生后d1随机分为空气组和高氧组,每组64只。分别于d1、4、7、10、14提取肺组织总RNA,采取半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)测定Trx mRNA水平;免疫组织化学方法检测肺组织切片凋亡蛋白半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3);HE染色观察肺组织病理变化。结果高氧组肺发育明显受阻,与空气组比较,高氧暴露后Trx mRNA表达显著增强,且于d10时达高峰(P<0.05,0.01)。Caspase-3表达显著升高(P<0.05,0.01)。结论高氧上调早产鼠肺组织Trx mRNA的表达;肺组织Trx mRNA的表达增高可能在早产鼠高氧肺损伤的发生发展中发挥重要保护作用。

肝细胞生长因子对高氧暴露早产鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞增殖与凋亡的影响

目的:观察肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)对高氧暴露体外培养的早产鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(TypeⅡalveolar epithelial cells,AECⅡ)增殖、凋亡及功能的影响,探讨HGF对高氧肺损伤保护作用的机制。方法:原代培养早产鼠AECⅡ,纯化后随机分为4组:空气组(Air)、高氧组(HO)、空气+HGF组(Air+HGF)、高氧+HGF组(HO+HGF)。采用流式细胞术及免疫印迹(Westernblot)法观察AECⅡ的增殖和凋亡情况,RT-PCR分析各组肺泡表面活性物质蛋白(surfactant associated protein,SP)SPA,SPB,SPCmRNA表达。结果:(1)各组细胞周期比例及细胞凋亡显示,与Air组比,HO组Sub G1(代表凋亡细胞比例),G0期/G1期细胞比例明显增高(P<0.01),G2期/M期细胞比例明显降低(P<0.01);Air+HGF组S期细胞比例明显增高(P<0.01)。与HO组比,HO+HGF组G0期/G1期细胞比例显著降低(P<0.01),S期和G2期/M期细胞比例明显增高(P<0.01)。(2)各组增殖细胞核抗原表达显示,HO组显著低于Air组(P<0.01),Air+HGF组明显高于Air组(P<0.05);HO+HGF明显高于HO组(P<0.05)。(3)各组SPA,SPB,SPCmRNA表达显示,HO组强度较Air组弱(P<0.01),而HO+HGF组较HO组明显增加(P<0.05)。结论:高氧导致早产鼠AECⅡ增殖抑制,凋亡增加,SPA,SPB,SPC mRNA表达降低,HGF可部分抑制这种变化,提示HGF对高氧肺损伤起一定的保护作用。

灯盏花素对宫内炎症致早产大鼠脑损伤的保护作用及其机制探讨

目的探讨灯盏花素对宫内炎症致早产大鼠脑损伤的保护作用及其机制。方法向孕鼠腹腔内注射脂多糖制备宫内炎症致早产大鼠脑损伤模型,孕鼠和仔鼠分别随机分为对照组、模型组、灯盏花素低剂量(45 mg/kg)组、灯盏花素高剂量(90 mg/kg)组、灯盏花素高剂量(90 mg/kg)+ML385[核因子E2相关因子2(nuclear factor erythroid 2-related factor 2,Nrf2)抑制剂,30 mg/kg]组(n=10)。测定各组孕鼠产出的仔鼠存活数和体重;苏木精-伊红染色法观察各组孕鼠子宫、胎盘病理形态及仔鼠脑组织病理形态;免疫荧光染色法检测各组仔鼠脑皮质离子钙接头蛋白分子-1(ionized calcium-binding adaptor molecule-1,IBA-1)与核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(nucleotide-binding oligomerization domain-like receptor protein 3,NLRP3)共表达情况;酶联免疫吸附法检测各组仔鼠脑组织中白细胞介素(interleukin,IL)-6、IL-8、IL-1β水平;免疫印迹法检测各组仔鼠脑组织中Nrf2通路相关蛋白表达。结果与对照组相比,模型组孕鼠子宫、胎盘组织及仔鼠脑组织产生病理损伤,仔鼠脑皮质产生严重小胶质细胞焦亡,仔鼠存活数和体重、脑组织中Nrf2及血红素加氧酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)蛋白表达水平降低(P<0.05),仔鼠脑组织中IBA-1和NLRP3共表达相对荧光强度、炎性因子IL-6、IL-8及IL-1β水平、NLPR3及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1(caspase-1)蛋白表达均升高(P<0.05);与模型组相比,灯盏花素低、高剂量组孕鼠子宫、胎盘组织及仔鼠脑组织病理损伤均减轻,仔鼠存活数和体重、Nrf2及HO-1蛋白表达水平均升高(P<0.05),仔鼠脑组织中IBA-1和NLRP3共表达相对荧光强度、炎性因子IL-6、IL-8及IL-1β水平、脑组织中NLPR3及caspase-1蛋白表达均降低(P<0.05);且灯盏花素高剂量组效果优于灯盏花素低剂量组,差异有统计学意义(P<0.05);ML385可显著抑制灯盏花素高剂量组的干预效果(P<0.05)。结论灯盏花素可通过激活Nrf2通路而抑制宫内炎症致早产大鼠脑组织炎症反应,抑制小胶质细胞焦亡,减轻早产大鼠脑损伤。

苦杏仁甙对高氧暴露早产鼠肺泡Ⅱ型细胞的保护作用

目的探讨苦杏仁甙对体外高氧暴露早产鼠肺泡Ⅱ型细胞( type 2 alveolar epithelial cell,AECⅡ)的保护作用机制.方法原代培养早产鼠AECⅡ,建立高氧细胞模型,采用MTT比色法、流式细胞术、免疫印迹(Western blot)、逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)等方法,观察苦杏仁甙对高氧暴露早产鼠AECⅡ增殖及表面活性物质蛋白(surfactant associated protein, SP)mRNA表达的影响.结果高氧暴露导致早产鼠AECⅡ增殖抑制,AECⅡSPs mRNA表达降低.MTT试验显示,苦杏仁甙50～200μmol/L时呈剂量依赖方式促进早产鼠AECⅡ细胞增殖,200 μmol/L浓度时,其作用最强,400 μmol/L浓度时反而呈抑制作用.200 μmol/L苦杏仁甙可显著促进体外高氧暴露AECⅡ增殖,提高其SP mRNA表达水平.结论高氧暴露导致早产鼠AECⅡ增殖抑制及SP mRNA表达降低,200 μmol/L苦杏仁甙对体外高氧暴露的早产鼠AECⅡ有一定保护作用.

上皮-间充质转化在高氧诱导大鼠支气管肺发育不良模型中的作用及机制研究

目的探讨上皮-间充质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)在大鼠支气管肺发育不良(bronchopulmonary dysplasia,BPD)模型中的作用及机制。方法实验分为两部分。(1)将48只早产大鼠随机分为常氧组和高氧组,每组24只。高氧组暴露于85%氧气中建立早产大鼠BPD模型,常氧组置于同一室内常压空气中,于实验第1、4、7、14天收集早产大鼠肺组织标本。(2)将大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞系(RLE-6TN)随机分为常氧组(常规空气中培养)和高氧组(在95%氧气中培养),分别于高氧暴露后12 h、24 h、48 h收集细胞标本进行检测。使用苏木精-伊红染色法观察早产大鼠肺泡化情况,免疫荧光检测早产大鼠肺组织和RLE-6TN细胞肺表面活性蛋白C(surfactant protein C,SPC)和α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)的共定位。实时荧光定量聚合酶链反应和蛋白免疫印迹法检测早产大鼠肺组织和RLE-6TN细胞EMT相关mRNA和蛋白表达水平。结果(1)与常氧组相比,高氧暴露7 d开始高氧组早产鼠可见肺泡化阻滞和肺泡结构简单化改变;肺组织中SPC和α-SMA存在明显共定位现象,高氧暴露7 d、14 d时,与常氧组比较,高氧组SPC表达减少,α-SMA表达增加;高氧暴露7 d、14 d时,与常氧组比较,高氧组TGF-β1、α-SMA、N-钙黏蛋白mRNA和蛋白表达水平升高(P<0.05),SPC、E-钙黏蛋白mRNA和蛋白表达水平降低(P<0.05)。(2)高氧暴露24 h、48 h时,与常氧组比较,高氧组SPC表达减少,α-SMA表达增加;高氧暴露48 h时,与常氧组比较,高氧组SPC、E-钙黏蛋白mRNA和蛋白表达降低(P<0.05),TGF-β1、α-SMA、N-钙黏蛋白mRNA和蛋白表达升高(P<0.05)。结论EMT破坏了BPD早产大鼠肺泡上皮细胞之间的紧密连接,造成肺泡结构简单化和发育异常,参与了BPD的发生发展。