六味地黄丸治疗早发性卵巢功能不全模型小鼠的分子机制

背景:在临床上,大多数治疗早发性卵巢功能不全的方剂均以六味地黄丸为基础方演变而来,并且取得了较好的疗效。目前对六味地黄丸的实验研究大多为体内动物模型的形态学观察及生理生化指标的检测,而分子机制方面的研究报道较少。目的:探讨六味地黄丸治疗早发性卵巢功能不全的分子作用机制。方法:环磷酰胺120 mg/kg联合白消安12 mg/kg腹腔注射制备早发性卵巢功能不全小鼠模型,然后用六味地黄丸混悬液对早发性卵巢功能不全小鼠进行干预,干预12周采用ELISA法检测小鼠血清中促卵泡刺激素、促黄体生成素、雌激素、抗苗勒氏管激素、8-羟脱氧鸟苷、总抗氧化能力、活性氧水平;苏木精-伊红染色观察小鼠卵巢形态学改变;透射电镜观察小鼠卵泡颗粒细胞超微结构及颗粒细胞线粒体的凋亡情况;免疫组化法检测六味地黄丸对小鼠卵巢颗粒细胞中核受体转录辅激活因子(receptor gamma coactivator-1 alpha,PGC-1α)、线粒体转录因子A(mitochondrialtranscriptionfactorA,TFAM)的表达水平。结果与结论:①与模型组比较,实验组小鼠血清促卵泡刺激素、促黄体生成素、活性氧、8-羟脱氧鸟苷水平降低(P<0.05),雌激素、抗苗勒氏管激素、总抗氧化能力水平升高(P<0.05);②苏木精-伊红染色发现模型组小鼠卵巢组织中闭锁卵泡和黄体较多,个别可见次级卵泡,间质纤维化增生;实验组小鼠卵巢组织可见大量闭锁卵泡,黄体较少,边缘可见原始卵泡,次级卵泡较少,未见明显成熟卵泡;③透射电镜发现实验组小鼠卵巢颗粒细胞内细胞器较完整;④免疫组化结果显示,实验组小鼠卵巢组织PGC-1α的表达水平在第4周稍有升高至第8,12周无明显变化,与模型组有明显差异;实验组小鼠卵巢组织TFAM的表达水平在第4周时短暂升高,然后稍有所下降,但结果均与模型组有明显差异;⑤结果表明,六味地黄丸通过PGC-1α-TFAM-ROS信号通路在一定程度上抑制早发性卵巢功能不全小鼠卵巢颗粒细胞凋亡,从而改善卵巢的内分泌功能,提高机体抗氧化能力,减轻氧化应激损伤程度。

基于6种机器学习算法的早发性卵巢功能不全影响因素分析

目的:通过机器学习算法对早发性卵巢功能不全(POI)的影响因素进行特征排序,找出对POI影响较大的因素。方法:先制定纳入和剔除标准,选取因月经不调就诊的500例患者,根据中医证型进行年龄和职业差异性分析。再通过逻辑回归、支持向量机、决策树、随机森林、极端梯度提升和K-最近邻6种机器学习算法对患者进行POI预测分类,根据算法求得的马修斯相关系数和AUC进行预测精准度比较。通过随机森林中的准确度和基尼不纯度下降对POI影响因素进行特征排序,结合逐步剔除法得到对POI影响程度排序前五的特征因素。结果:随机森林的算法在马修斯相关系数、准确率和AUC中均获得了最大值,分别为0.399、0.717和0.908。POI的影响因素有子宫或盆腔手术史、受教育程度、年龄、减肥史和吸烟史,这些因素的Borda计数得分依次为手术史(2.446)、受教育程度(2.924)、年龄(4.060)、减肥史(5.303)、吸烟史(6.429)。结论:随机森林的性能在预测POI患者中优于其他5种算法,当患者的数据信息不足时,医生可先通过这5个特征因素的指标对月经不调患者进行初步干预。

AMH联合卵巢超声影像学参数对早发性卵巢功能不全的预测价值

目的 探讨育龄期女性不同年龄的性激素、抗苗勒氏管激素(anti-Müllerian hormone, AMH)水平和卵巢超声影像学参数的变化,分析其对早发性卵巢功能不全(premature ovarian insufficiency, POI)的预测价值并建立预测模型。方法 选择2018年2月至2022年6月就诊于西安交通大学第一附属医院的1 968名育龄期女性为研究对象,检测其性激素、AMH、窦卵泡计数(antral follicle count, AFC)、卵巢总体积、卵巢皮质体积、卵巢髓质体积、卵巢总面积、卵巢皮质面积、卵巢髓质面积,分析不同年龄各项指标的变化及其对POI的预测价值,采用AMH联合卵巢超声影像学参数建立预测POI的模型。结果 1 968名研究对象中POI患病率为3.10%,30~39岁年龄组POI的患病率显著高于20~29岁年龄组(P<0.05)。30~34岁组血清AMH水平显著低于20~24岁组和25~29岁组(P<0.05),35~39岁组血清卵泡刺激素(follicle stimulating hormone, FSH)、黄体生成素(luteinizing hormone, LH)水平显著高于30~34岁组(P<0.05),而血清雌二醇(estradiol, E2)和AMH水平、AFC、卵巢体积、卵巢皮质体积、卵巢面积、卵巢皮质面积均显著低于30~34岁组(P<0.05)。POI组患者的血清FSH、LH水平显著高于同龄女性卵巢功能正常者(P<0.05),而血清E2、AMH水平显著低于同龄女性卵巢功能正常者(P<0.05)。POI组患者的AFC、卵巢体积、卵巢皮质体积、卵巢髓质体积、卵巢面积、卵巢皮质面积和卵巢髓质面积均显著低于同龄女性卵巢功能正常者(P<0.05)。对POI的预测价值分析结果显示,激素水平中AMH的预测价值最高(AUC=0.957),其次为E2(AUC=0.840)。超声影像学参数中AFC的预测价值最高(AUC=0.867),其次为卵巢皮质体积(AUC=0.835)。AMH联合卵巢超声影像学参数建立的模型对POI具有较好的预测价值,其灵敏度为94.86%,特异度为91.23%,AUC为0.960,截断值为12分。结论 育龄期女性中30~39岁年龄组POI的患病率较高,AMH联合卵巢超声影像学参数建立的模型对POI具有一定的预测价值,特别对隐匿期女性获得临床关注。

基于德尔菲法的早发性卵巢功能不全生活质量量表的研制与条目筛选

【目的】基于德尔菲法进行早发性卵巢功能不全生活质量量表的条目筛选,为量表的研制提供依据。【方法】成立量表研制核心小组,构建量表理论框架,在前期文献分析、病历回顾及患者访谈的基础上建立原始条目池。制定专家咨询问卷,遴选专家,运用德尔菲法进行两轮专家咨询,将调查结果进行统计分析,整理专家意见,筛选条目。【结果】遴选得到的15名专家来自9个省或直辖市,具有一定的学科代表性及权威性。两轮德尔菲法各发放15份问卷,专家积极系数均为100%,专家权威系数分别为0.970和0.963,肯德尔和谐系数(Kendall’s W系数)分别为0.236和0.381(P<0.05),最终确定了31个条目(生理领域18个,心理领域8个,社会领域5个)及2个总体评价。【结论】参与德尔菲法的专家权威性、积极性较高,第二轮肯德尔和谐系数较第一轮提高,专家意见趋于一致,结果较可靠。该早发性卵巢功能不全生活质量量表条目筛选的结果可为后续量表的考评与研究提供参考。

关元命门序贯针刺激活FSHR/cAMP/PKA通路促进早发性卵巢功能不全模型大鼠颗粒细胞增殖的机制研究

【目的】观察关元命门序贯针刺方案对早发性卵巢功能不全(POI)模型大鼠的治疗作用及机制。【方法】将雌性SD大鼠分为空白组、模型组、蛋白激酶A(PKA)抑制剂(H89)+针刺组、针刺组各12只。除空白组,其他3组大鼠采用雷公藤多苷片灌胃制备POI模型。模型成功建立后,空白组和模型组每日捆绑一次;针刺组大鼠在动情间期取关元穴针刺,在动情前期取命门穴针刺;H89+针刺组按照针刺组针刺方案干预,在每次针刺前30 min内腹腔注射H89。连续干预20 d。各组大鼠分别在干预后第1个动情间期和动情前期取材。酶联免疫吸附分析(ELISA)检测动情间期促卵泡激素(FSH)、雌二醇(E2)水平,Western Blot法检测动情间期促卵泡激素受体(FSHR)、芳香化酶P450(P450arom)蛋白表达,细胞计数试剂盒8(CCK-8)法检测动情间期和动情前期颗粒细胞活性,免疫组织化学法检测动情前期增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白表达水平。【结果】(1)与空白组比较,模型组和H89+针刺组血清FSH水平显著升高(P<0.01),E2水平显著降低(P<0.001);H89+针刺组FSH水平与模型组无差异(P>0.05),E2水平低于模型组(P<0.05);针刺组FSH水平低于模型组和H89+针刺组(P<0.05),与空白组无差异(P>0.05),E2水平显著高于模型组和H89+针刺组(P<0.01),仍低于空白组(P<0.05)。(2)模型组和H89+针刺组FSHR、P450arom蛋白表达均低于空白组(P<0.01);H89+针刺组FSHR蛋白表达水平与模型组无差异(P>0.05),P450arom蛋白表达水平低于模型组(P<0.05);针刺组FSHR、P450arom蛋白表达水平均高于模型组和H89+针刺组(P<0.05),但仍低于空白组(P<0.05)。(3)模型组和H89+针刺组GCs活性和PCNA平均光密度值均低于空白组(P<0.05);H89+针刺组GCs活性和PCNA平均光密度值均低于模型组(P<0.05);针刺组的GCs活性和PCNA平均光密度值显著高于模型组和H89+针刺组(P<0.05或P<0.01)。【结论】关元命门序贯针刺方案可通过上调促卵泡激素受体(FSHR)/环磷酸腺苷(cAMP)/蛋白激酶A(PKA)通路FSHR、P450arom蛋白的表达,调控性激素水平,提高GCs活性和促进GCs细胞增殖,从而改善POI。

分期针刺任督经穴治疗早发性卵巢功能不全的临床观察

目的观察分期针刺任督经穴治疗早发性卵巢功能不全(POI)的临床疗效。方法选取2021年6月至2022年12月就诊于上海市静安区中医医院的104例POI患者作为研究对象,按照完全随访化方法分为分期组、任脉组、督脉组、西药组,各26例。比较各组患者治疗前后血清性激素水平、窦卵泡计数(AFC),以及治疗和随访过程中共5个访视点的Kupperman(K)表和月经不调症状分级量化(MDQ)表评分。结果治疗后,四组血清卵泡刺激素(FSH)水平下降,雌二醇(E_(2))水平上升(P<0.05);西药组、督脉组和分期组AFC升高(P<0.01),分期组AFC改善优于任脉组(P<0.05)。西药组K表和MDQ表评分在治疗期间下降(P<0.01);随访期间K表不再下降(P>0.05),MDQ表上升(P<0.01)。任脉组K表评分在1MC和随访期间下降(P<0.05),MDQ表评分在3MC下降(P<0.01)。督脉组K表和MDQ表评分在3MC下降(P<0.01);随访期间MDQ表评分下降(P<0.05)。分期组K表评分在每个访视点均下降(P<0.05),MDQ表评分在3MC和随访期间下降(P<0.01)。结论分期针刺任督经穴治疗POI的临床疗效显著。

间充质干细胞来源的外泌体治疗早发性卵巢功能不全的研究进展

早发性卵巢功能不全(POI)是一种常见的妇科疾病,影响许多年轻女性的生活质量和生育能力。临床上常用的激素替代治疗只能暂缓POI患者的症状,无法修复受损的卵巢组织。最近的研究表明,间充质干细胞来源的外泌体在治疗POI中展现出巨大潜力。本文总结了人间充质干细胞来源的外泌体在治疗POI方面的研究进展,为未来在POI诊疗中应用外泌体提供实验基础和相关理论依据。

针灸联合六味地黄丸序贯治疗肾精亏虚型早发性卵巢功能不全临床观察

目的探究针灸联合六味地黄丸序贯治疗对肾精亏虚型早发性卵巢功能不全(POI)的临床效果。方法将63例POI患者纳入试验,于月经期、经后期口服六味地黄丸,排卵期、经前期行灸法序贯治疗,针刺治疗贯穿后三期,隔日1次,每周治疗3次;连续治疗3个月经周期。观察序贯治疗对患者促卵泡生成激素(FSH)、促黄体生成素(LH)、雌二醇(E2)水平及中医证候积分的影响。结果治疗3个月后,患者E2增高,FSH、LH均降低,中医证候得到有效改善(P<0.05)。结论采用针灸联合六味地黄丸序贯治疗肾精亏虚型POI,能较好地改善性激素水平及临床症状,且具有良好安全性。

早发性卵巢功能不全伴睡眠障碍中医证型分布规律探析

目的探究早发性卵巢功能不全(Primary ovarian insufficiency,POI)伴睡眠障碍中医证型分布规律及不同证型间睡眠质量指数分布差异性,以期为POI伴睡眠障碍的辨证治疗和预防提供依据。方法收集符合纳入标准的600例POI患者进行流行病学调查,选取满足睡眠障碍诊断的405例患者作为研究组,采集患者一般资料、中医四诊及性激素水平信息,采用匹兹堡睡眠质量指数(Pittsburgh sleep quality index,PSQI)量表评估患者睡眠情况,分析POI伴睡眠障碍中医证型特征及影响因素。结果POI伴睡眠障碍的主要中医证型为心肾不交证(41.98%)、脾肾阳虚证(22.22%)、肾虚肝郁证(20.99%)和肾虚血瘀证(14.81%),其中心肾不交证入睡时间最长,睡眠时间最短,更依赖于催眠药物,PSQI总分最高;心肾不交证与肾虚肝郁证睡眠质量最差;脾肾阳虚证日间功能障碍得分最高;各中医证型间FSH水平无显著性差异;E 2值由低到高分布为:心肾不交证、肾虚肝郁证、脾肾阳虚证、肾虚血瘀证,多组间比较存在显著差异(P<0.05)。结论POI伴睡眠障碍患者主要中医证型为心肾不交证、脾肾阳虚证、肾虚肝郁证和肾虚血瘀证,其中最常见及睡眠质量最差的中医证型为心肾不交证,可能与雌激素E 2水平密切相关。

杨鉴冰教授治疗早发性卵巢功能不全经验探析

国家级名中医杨鉴冰教授,从《傅青主女科》“经本于肾”“经水出诸肾”的理论出发,结合临床经验,认为肾精亏虚是早发性卵巢功能不全的基本病机,肾阴阳失调是其病机特点,治疗重在补充肾精、调整阴阳,用药注重阴阳平衡,自拟补肾毓宫汤加减治疗,同时中西医结合,配合心理疏导,改善临床症状,延缓疾病进展,促进卵巢功能的恢复。

早发性卵巢功能不全远期健康后果及管理注意事项

早发性卵巢功能不全是指女性在40岁以前卵巢功能减退的临床综合征。闭经、促性腺激素升高和雌激素缺乏三种情况不仅影响到患者生殖健康,而且导致患者内分泌功能紊乱,远期可能诱发心血管疾病、骨质疏松、认知功能减退及泌尿生殖系统疾病等,严重威胁女性健康。因此,对早发性卵巢功能不全患者进行持续的健康管理十分重要。

中医药干预早发性卵巢功能不全相关信号通路研究进展

早发性卵巢功能不全(premature ovarian insufficiency,POI)是指女性在40岁之前因卵巢功能减退而导致的临床综合征。POI不仅会降低女性的生殖能力,还会对其造成巨大的心理负担和社会压力。现代医学针对POI采取的激素替代疗法(hormone replacement therapy,HRT)虽然取得了较好的临床疗效,但长期使用会增加女性罹患乳腺肿瘤、血栓栓塞症、卵巢癌等疾病的风险。近年来,中医药治疗POI因多成分、多靶点、多途径、简验廉效、不良反应小等特点备受青睐。本文查阅整理了国内外相关研究报道,发现中药单体及复方能够通过调控血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)/VEGF受体(VEGF receptor,VEGFR)通路、转化生长因子(transforming growth factor,TGF)-β/Smads通路、磷脂酰肌醇3-激酶(phosphoinositide 3-kinase,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,PKB,又称Akt)通路、核因子E2相关因子(nuclear factor erythroid-2-related factor,Nrf)-2/抗氧化应答元件(antioxidant response element,ARE)通路、核转录因子(nuclear factor,NF)-κB通路等多条信号通路,发挥调节卵巢血供、降低卵泡氧化应激及炎症反应程度、刺激卵泡增殖等作用,达到改善卵巢功能状态的效应。基于此,笔者将以信号通路作为切入点,归纳总结中药单体及复方防治POI的作用机制,以期为中医药的基础实验研究、中药临床诊疗与药物开发提供参考依据。

早发性卵巢功能不全患者外周血Tfh占比、功能相关细胞因子表达变化及其与性激素水平的相关性

目的观察早发性卵巢功能不全(POI)患者外周血滤泡辅助性T细胞(Tfh)占比、功能相关细胞因子表达变化,并分析其与性激素水平的相关性。方法POI患者29例(观察组),同期健康体检者31例(对照组),采用流式细胞术检测全血Tfh占比,免疫印迹实验检测外周血单个核细胞(PBMC)CXCR5、BCL-6蛋白,酶联免疫吸附法检测血清IL-6、IL-21,电化学发光法检测血清促卵泡刺激素(FSH)、促黄体生成素(LH)、泌乳素、孕酮、睾酮、雌二醇(E_(2))、抗缪勒管激素(AMH)水平,Spearman相关分析法分析Tfh、CXCR5蛋白、BCL-6蛋白、IL-6、IL-21与性激素的相关性。结果与对照组比较,观察组全血Tfh占比增加,血清IL-6、IL-21水平升高,PBMC CXCR5、BCL-6蛋白表达升高,血清FSH、LH水平升高,血清E_(2)、AMH水平降低,P均<0.05。全血Tfh占比与血清FSH、LH水平呈正相关(r分别为0.75、0.63,P均<0.05),与血清E_(2)、AMH水平呈负相关(r分别为-0.35、-0.82,P均<0.05);血清IL-6水平与血清FSH、LH水平呈正相关(r分别为0.75、0.62,P均<0.05),与血清E_(2)、AMH水平呈负相关(r分别为-0.47、-0.77,P均<0.05);血清IL-12水平与血清FSH、LH水平呈正相关(r分别为0.68、0.56,P均<0.05),与血清E_(2)、AMH水平呈负相关(r分别为-0.25、-0.73,P均<0.05);PBMC BCL-6蛋白表达与血清FSH、LH水平呈正相关(r分别为0.73、0.60,P均<0.05),与血清E_(2)、AMH水平呈负相关(r分别为-0.27、-0.76,P均<0.05);PBMC CXCR5蛋白表达与血清FSH、LH水平呈正相关(r分别为0.72、0.58,P均<0.05),与血清E_(2)、AMH水平呈负相关(r分别为-0.27、-0.70,P均<0.05)。结论POI患者全血Tfh占比增加,PBMC CXCR5、BCL-6蛋白表达升高,血清IL-6、IL-21、FSH、LH水平升高及E_(2)、AMH水平降低,Tfh及其相关因子与性激素呈正相关或负相关,Tfh及其相关因子可能参与了POI发生过程。

何氏养巢方通过ERβ/PCG1α/TFAM通路提高颗粒细胞线粒体生物发生以改善早发性卵巢功能不全

目的:探究何氏养巢方(简称“养巢方”)提高卵巢颗粒细胞线粒体功能的机制。方法:取36只6~8周龄C57BL/6J雌鼠随机分为空白对照组,模型对照组,养巢方小、中、大剂量组和阳性对照组。均予环磷酰胺90 mg/kg单次腹腔注射以建立原发性卵巢功能不全(POI)模型后,分组灌胃21 d后处死。另取6只6~8周龄C57BL/6J雌鼠造模后获取原代颗粒细胞,分为养巢方组、PHTPP(一种雌激素受体阻滞剂)组、养巢方+PHTPP组,分别予养巢方含药血清或PHTPP或同时给予两者干预培养24 h。分别采用苏木精-伊红(HE)染色观察卵巢组织病理学变化;荧光素酶法检测颗粒细胞腺苷三磷酸(ATP)水平;定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测线粒体DNA(mtDNA)的拷贝数;透射电镜观察线粒体结构变化;蛋白质印迹法检测雌激素受体β(ERβ)、过氧化物异酶体增殖物激活受体γ共激活因子1α(PGC1α)、线粒体转录因子A(TFAM)、超氧化物歧化酶2(SOD2)蛋白表达;qRT-PCR检测Erβ、Pgc1α、Tfam、Sod2 mRNA表达。结果:模型对照组卵巢组织次级及三级卵泡较少,养巢方各剂量组及阳性对照组次级及三级卵泡较多。与空白对照组比较,模型对照组颗粒细胞ATP和mtDNA水平均下降(均P<0.01),线粒体嵴消失或空泡化结构异常比例增加,ERβ、PGC1α、TFAM、SOD2蛋白及其mRNA表达均下降(均P<0.01)。养巢方中、大剂量组及阳性对照组颗粒细胞内ATP生成增多、mtDNA拷贝数增加(P<0.05或P<0.01);颗粒细胞内结构异常线粒体减少,ERβ、PGC1α、TFAM、SOD2蛋白及其mRNA表达均增加(P<0.05或P<0.01)。体外实验中,与PHTPP组比较,养巢方+PHTPP组线粒体结构正常比例更高,线粒体ATP含量增加(P<0.05或P<0.01),mtDNA拷贝数增加(P<0.05或P<0.01);ERβ、PGC1α、TFAM、SOD2蛋白及其mRNA表达均上升(P<0.05或P<0.01)。结论:养巢方可以通过ERβ/PGC1α/TFAM通路提高线粒体生物发生从而改善POI小鼠卵巢功能。

异体骨髓移植后早发性卵巢功能不全患者首疗程激素补充治疗月经预测模型的建立

目的:研究建立异体骨髓移植(allo-HSCT)后早发性卵巢功能不全(POI)患者首疗程激素补充治疗(HRT)的月经预测模型,为制定激素补充治疗方案提供一定参考价值。方法:选择2017年1月至2022年10月在苏州大学附属第一医院就诊的allo-HSCT后POI患者154例进行回顾性分析,根据首疗程HRT后月经来潮情况分为理想月经组(116例)和非理想月经组(38例)。单因素分析比较两组一般特征和临床资料差异后,选择纳入的预测因子。将纳入人群随机拆分为训练集和验证集后,利用随机森林算法构建训练集的月经预测模型,并通过验证集验证模型的预测效率。最后将模型制作成用户交互界面并部署至服务器共享。结果:单因素分析结果示,两组患者就诊年龄、体质量指数(BMI)、孕次、产次、血液病诊断、移植年龄、供体性别、卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)、腰椎骨密度(BMD)、HRT方案差异均有统计学意义(P<0.05)。依据平均准确度下降程度选择纳入模型的预测因子为就诊年龄、移植年龄、BMI、FSH、HRT方案、产次、孕次。初步构建随机森林模型后,优化模型参数,决策树数量(ntree)=500,特征数(mtry)=6,以80%和20%划分训练集和验证集,使模型拟合度高的同时误差率稳定,采用十倍交叉验证降低过度拟合。最终构建的月经预测模型曲线下面积为0.768,灵敏度为0.695,特异度为0.735。结论:本研究成功建立了allo-HSCT后POI患者首疗程HRT的月经预测模型,该模型假阳性率较低,提示当模型预测结果为非理想月经时,可考虑调整拟定的HRT方案,以促进早期月经来潮。

右归丸、双丹养血胶囊对早发性卵巢功能不全患者的临床疗效

目的探讨右归丸、双丹养血胶囊对早发性卵巢功能不全患者的临床疗效。方法106例患者随机分为观察组、对照组,每组53例,对照组给予激素治疗,观察组在对照组基础上加用右归丸、双丹养血胶囊,疗程28 d。检测临床疗效、卵泡雌激素(FSH)、黄体生成素(LH)、雌二醇(E_(2))、抗苗勒氏管激素(AMH)、改良Kupperman评分、中医证候评分、不良反应发生率变化。结果观察组总有效率高于对照组(P<0.05)。治疗后,2组FSH、LH、中医证候评分降低(P<0.05),E_(2)、改良Kupperman评分升高(P<0.05),以观察组更明显(P<0.05)。2组不良反应发生率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论右归丸、双丹养血胶囊可安全有效地调节早发性卵巢功能不全患者血清性激素水平及卵巢功能。

补肾活血方对肾虚血瘀型早发性卵巢功能不全患者免疫平衡的调节作用

[目的]观察补肾活血方调节免疫平衡治疗肾虚血瘀型早发性卵巢功能不全(POI)患者的临床疗效。[方法]将123例POI患者随机分为中药组(61例)和西药组(62例)。中药组给予补肾活血方治疗,西药组给予芬吗通口服治疗,连续治疗6个月经周期。比较两组患者治疗前后血清卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)、雌二醇(E2)、抗苗勒管激素(AMH)、辅助性T细胞17(Th17)、调节性T细胞(Treg)、Th17/Treg、转化生长因子β(TGF-β)、生长分化因子-9(GDF-9)和骨形成蛋白-15(BMP-15)水平,评估月经症状疗效和中医证候疗效。[结果]1)治疗后,两组患者血清FSH水平较治疗前显著降低(P<0.01),血清E2和AMH水平较治疗前升高(P<0.05),血清LH水平差异无统计学意义(P>0.05)。2)治疗后,两组患者血清Treg水平均较治疗前升高(P<0.01),血清Th17、Th17/Treg水平均较治疗前降低(P<0.01);且中药组患者血清Th17、Treg、Th17/Treg水平改善情况优于西药组(P<0.01)。3)治疗后,两组患者血清TGF-β、GDF-9、BMP-15水平均较治疗前升高(P<0.05),且中药组患者血清BMP-15升高幅度优于西药组(P<0.05)。4)治疗后,中药组患者的月经症状疗效总有效率为60.66%,西药组为87.10%,西药组优于中药组(P<0.05)。5)治疗后,中药组患者的中医证候疗效总有效率为68.85%,西药组总有效率为48.39%,中药组优于西药组(P<0.05)。[结论]补肾活血方可有效改善肾虚血瘀型POI患者的血清性激素水平,调节Th17/Treg免疫平衡,改善临床证候。

基于网络药理学和分子对接探讨黄芪治疗早发性卵巢功能不全的机制研究

目的:基于网络药理学和分子对接方法探讨黄芪对早发性卵巢功能不全治疗作用的分子机制。方法:在中药系统药理学数据库TCMSP中筛选黄芪有效成分及药物作用靶点;在Genecards数据库中筛选早发性卵巢功能不全疾病靶点;运用Venny在线工具筛选两者的交互基因;通过Cytoscape3.7.2软件构建“药物-成分-靶点-疾病”网络关系图;采用String数据库获得蛋白互作(PPI)信息,进一步通过CytoNCA插件构建蛋白质相互作用网络,筛核心靶点蛋白;利用DAVID数据库对交互基因进行GO富集和KEGG通路富集;使用分子对接技术进一步明确其发挥治疗作用的分子;最后,采用血清饥饿法建立POI细胞模型,给予黄芪中的有效化合物槲皮素进行干预,通过Tunel染色、蛋白质印迹实验(western blotting,WB)对网络药理学预测结果进行实验验证。结果:通过TCMSP数据库筛选出黄芪的32个有效化合物及552个基因靶点,从疾病数据库中筛选出730个早发性卵巢功能不全的疾病靶点,两者共62个交集基因,其中黄芪中的主要活性成分包括槲皮素(quercetin)、异鼠李素(isorhamnetin)、山奈酚(kaempferol)、丁子香萜(Mairin)、芒柄花黄素(formononetin)和芒柄花黄素(astragaloside IV),10个POI的潜在核心靶基因为ALB、INS、AKT1、ACTB、TP53、TNF、ESR1、CASP3、STAT3和PTEN;潜在靶点基因主要参与调控JAK2/STAT3、PI3K/Akt信号通路;分子对接验证了黄芪主要活性化合物与核心蛋白STAT3和Akt1存在较强的结合作用;细胞实验结果发现,黄芪中的重要活性化合物槲皮素能促进JAK2/STAT3信号通路关键分子JAK2及STAT3的磷酸化水平,改变卵巢颗粒细胞凋亡相关蛋白表达水平。结论:网络药理学和分子对接分析表明中药黄芪能通过调节对雌二醇的反应、抑制凋亡过程以及调控JAK-STAT和PI3K-Akt信号通路治疗早发性卵巢功能不全,其机制可能与激活JAK2/STAT3信号通路,抑制卵巢颗粒细胞凋亡相关。

调经汤经铁死亡途径干预早发性卵巢功能不全的网络药理靶点分析及活性成分预测

目的通过网络药理学及生物信息学方法,探索临床效方调经汤通过铁死亡途径治疗早发性卵巢功能不全(premature ovarian insufficiency,POI)的有效靶点和活性药物成分预测。方法通过中药系统药理学分析平台、用于传统中药分子机制挖掘生物信息学分析工具数据库获取调经汤的活性成分和靶基因,使用人类基因综合数据库、药物靶点数据库、Drugbank获取POI的疾病靶点,并通过Venn获取交集靶点。利用铁死亡数据库、Cytoscape及STRING软件构建调经汤通过铁死亡途径治疗POI的核心靶基因网络。使用DAVID数据库对调经汤治疗POI和铁死亡相关的预测靶点进行基因本体和生物学途径富集分析。通过基因表达总表(gene expression omnibus,GEO)数据库获取POI疾病生物学差异基因进一步提取关键靶点进行分析,并通过分子对接验证活性小分子药物成分结合力。结果调经汤13种中药中共筛选出154种活性成分,与POI相关靶点101个,铁死亡相关基因共23个。富集分析显示主要涉及通路为磷脂酰肌醇3-激酶-蛋白激酶B(phosphatidylinositol-4,5-bisphosphate 3-kinase/protein kinase B,PI3K/Akt)信号通路、低氧诱导因子-1信号通路等。通过GEO数据库筛得调经汤通过铁死亡途径干预POI的关键靶点为糖原合成酶激酶3β(glycogen synthase kinase-3β,GSK-3β)、小窝蛋白-1(caveolin-1,CAV1)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)和蛋白激酶Cα(protein kinase C alpha gene,PRKCA),这些基因在POI疾病中表达量均降低。分子对接结果显示CAV1-槲皮素、GSK-3β-木犀草素具有较稳定的结合能力。结论网络药理学结果提示铁死亡途径可能是调经汤治疗POI的重要机制,GSK-3β、CAV1、mTOR和PRKCA等靶点及PI3K/Akt信号通路或在其中发挥重要作用。

Y-box结合蛋白1通过沉默信息调节因子1 mRNA稳定性调节抑制人颗粒细胞凋亡在早发性卵巢功能不全中的作用与机制

目的:探讨Y-box结合蛋白1(YBX1)调节沉默信息调节因子1(SIRT1)对颗粒细胞增殖和凋亡的影响,研究YBX1和SIRT1在早发性卵巢功能不全(POI)患者及卵巢功能正常患者间表达水平差异及临床意义。方法:留取2022年6月至2023年7月于江苏大学第四附属医院生殖医学中心进行体外受精(IVF)/卵胞浆内单精子注射(ICSI)助孕的POI患者(POI组)及卵巢储备功能正常患者(对照组)的颗粒细胞和血清,利用免疫印迹(WB)检测YBX1蛋白表达水平;利用实时荧光定量核酸扩增法(RT-qPCR)检测YBX1及SIRT1 mRNA表达水平,并分析血清中其与卵泡刺激素(FSH)、促黄体生成素(LH)、雌二醇(E_(2))、抗苗勒管激素(AMH)、窦卵泡数(AFC)的相关性;利用5-溴-2-脱氧尿嘧啶(EdU)、细胞计数试剂8(CCK8)检测细胞增殖、原位末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡;RT-qPCR检测细胞内增殖细胞核抗原(PCNA)、B细胞淋巴瘤因子-2(Bcl2)、Bcl2相关X蛋白(BAX)、胱天蛋白酶-3(Caspase-3)mRNA表达情况;RNA免疫沉淀(RIP)实验检测YBX1与SIRT1的相互作用。结果:与对照组患者相比,POI组患者颗粒细胞和血清中YBX1蛋白及SIRT1 mRNA的表达降低(P<0.05);血清中YBX1、SIRT1 mRNA表达与FSH、LH负相关(r<0,P<0.05),与E_(2)、AMH、AFC正相关(r>0,P<0.05);在颗粒细胞中上调YBX1后SIRT1蛋白表达量、SIRT1 mRNA的稳定性、EdU阳性率、细胞活性、PCNA mRNA表达量、Bcl2/BAX比值均增加(P<0.05),Caspase-3 mRNA表达量、TUNEL阳性率均降低(P<0.05)。结论:YBX1和SIRT1在POI患者中表达水平显著下调,且其表达水平与临床卵巢功能指标相关;YBX1结合SIRT1 mRNA增强其稳定性,可能促进颗粒细胞增殖,抑制细胞凋亡,提示YBX1和SIRT1有望成为POI诊疗的新靶点。