早基因c-fos反义寡核苷酸诱导豚鼠实验性近视

目的:观察早基因c-fos反义寡核苷酸对豚鼠眼球发育及视网膜c-fos表达的影响,以证明早基因c-fos在豚鼠近视形成中的重要作用,并研究其在视网膜信号转导及抑制近视的可能分子机制。方法:3周三色豚鼠31只,随机均分为3组:高浓度寡核苷酸注射组(1nmol)、低浓度寡核苷酸注射组(0.1nmol)及对照组。玻璃体注药前后分别对各组进行视网膜检影和A超测眼轴长度,分别运用免疫组织化学和RT-PCR观察各组视网膜c-fos蛋白及mRNA表达和变化。结果:高浓度和低浓度c-fos反义寡核苷酸注射眼均呈明显中度近视(-5.425D及-5.575D),视网膜c-fos表达明显下调,c-fos反义寡核苷酸注射眼与自身c-fos正义寡核苷酸注射眼、生理盐水注射眼及自然对照眼比较:屈光度、眼轴及视网膜c-fos表达差异均有统计学意义(P<0.01);高浓度与低浓度c-fos反义寡核苷酸注射眼比较:屈光度、眼轴及视网膜c-fos表达差异均无统计学意义(P>0.05);c-fos正义寡核苷酸注射眼与生理盐水注射眼及自然对照眼比较:屈光度、眼轴及视网膜c-fos表达差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:c-fos反义寡核苷酸能诱导豚鼠近视发生及发展,并抑制视网膜c-fos表达,早基因c-fos可能参与视网膜的信号转导和近视的抑制机制。

即早基因c-fos与脑血管病及学习记忆

即早基因c-fos是广泛存在于原核细胞和真核细胞的高度保守基因。在正常情况下,c-fos基因参与细胞生长、分化、信息传递、学习和记忆等生理过程,而在病理情况下c-fos基因表达及调控变化与多种疾病的发生和发展有关。C-fos在中枢神经系统的某些部位可有基础水平的表达,但表达很低,当受到如脑缺血、脑出血、痫性发作、应激等刺激后,其在数十分钟内做出反应,在对外界刺激—转录耦联的信息传递过程中起着核内第三信使的重要作用。

豚鼠形觉剥夺性近视视网膜早基因c-fos的动态表达

目的建立豚鼠形觉剥夺性近视(form-deprivationmyopia,FDM)动物模型,并对豚鼠形觉剥夺性近视形成及恢复过程中视网膜早基因c-fos的动态变化进行观察,研究豚鼠FDM中视网膜信号转导及抑制近视的可能分子机制。方法3周三色豚鼠40只,随机均分为4组:遮盖前组、单眼遮盖1周组、单眼遮盖2周组及去遮盖组。对各组进行视网膜检影和A超测眼轴,分别运用免疫组化和RT-PCR观察各组视网膜c-fos蛋白及mRNA的表达和变化。结果遮盖2周后,遮盖眼较对照眼呈高度相对近视(-8.8 D),视网膜c-fos表达明显下调,双眼屈光度、眼轴和视网膜c-fos的表达差异均有显著性(P<0.05);遮盖2周后,去遮盖1周,去遮盖眼较对照眼呈中度相对近视(-5.9 D),但去遮盖前后屈光度及眼轴差异无显著性(P>0.05),去遮盖眼较对照眼视网膜c-fos的表达明显上调,差异有非常显著性(P<0.01)。结论形觉剥夺能成功诱导豚鼠近视的发生及发展,并抑制视网膜c-fos的表达,而去除形觉剥夺可抑制近视的发展,并诱导视网膜c-fos的表达上调,证明c-fos的表达规律不仅反映外界视觉环境对眼的刺激,并与近视发展规律呈负相关,可能参与视网膜的信号转导和近视的抑制机制。

压力诱导大鼠颈总动脉即刻早基因产物c-Jun的表达

为了探讨压力在动脉重建中的作用机制 ,研究压力对动脉即早基因产物 c- Jun表达的影响。采用大鼠颈总动脉在体受力模型 ,以高压力 (16 0 mm Hg)和正常压力 (80 mm Hg)灌流颈总动脉 0 .5、1、3、6 h,免疫组织化学和计算机图像处理检测颈总动脉 c- Jun的表达。结果显示 ,正常压力作用下 ,1h组颈总动脉 c- Jun有少量表达 ,3h和6 h组有所增加。高压力作用 0 .5 h即可诱导颈总动脉 c- Jun的表达 ,随着时间的延长 ,c- Jun的表达与正常压力组相比有明显增加 (P<0 .0 1)。结果提示 ,压力可以诱导动脉 c- Jun的表达 ,这一机制可能在压力诱导动脉重建中起重要作用。

即刻早基因ZENK的基因功能及其应用进展

即刻早基因ZENK是核基因组内编码转录因子的单拷贝基因,它受多种胞外信号,如血清、生长因子、细胞因子和激素的作用在不同类型细胞内迅速、大量表达.ZENK蛋白通过C2H2型锌指识别靶基因启动子中的GC丰富序列并发生作用,从而调控靶基因的转录.ZENK基因参与细胞生长、分化、发育的调控,而且其在大脑的诱导表达与动物的学习、记忆密切关联.另有研究显示,ZENK具有很高的进化保守性,可以作为新的分子标记运用于分子系统学研究.

噪声暴露对小鼠行为学和海马区即刻早基因表达的影响

目的观察小鼠高强度噪声短时暴露后,其行为学的改变,探索噪声对小鼠行为和听力的影响及机制。方法选取生后15 d的C57小鼠,随机分为两组,噪声暴露组30只,123 dB SPL白噪声固定时间暴露2 h;对照组30只,正常喂养,2个月后,检测ABR反应阈,将两组小鼠根据是否给予MWM训练再分为两个亚组,剥离小鼠海马,检测氧化应激水平,实时荧光定量PCR法测定各组小鼠海马组织中即刻早基因IEGs的表达水平。结果强噪声单次暴露后2个月,与对照组比较,噪声暴露组动物ABR反应阈升高,小鼠的Morris水迷宫行为表现显著改变,差异有统计学意义(P<0.05);两组小鼠海马组织中氧化应激水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。小鼠海马组织中即刻早基因例如Npas4、Arc的表达量可通过学习与训练来上调,但噪声暴露组动物通过学习训练致使两基因上调的变化低于对照组(P<0.05)。结论高强度噪声短时暴露对小鼠的行为和听力有负性影响。学习训练可显著上调小鼠海马组织中即刻早基因的表达,而噪声暴露的作用在统计学上无显著性差异,这可能是噪声影响学习记忆能力的分子机制之一。

即早基因c-fos在视神经损伤大鼠外侧膝状体中的表达

目的研究大鼠视神经钳夹伤后外侧膝状体神经元的早期损伤反应.方法用70g压力的显微无创血管钳夹持SD雄性大鼠右侧视神经30s,于损伤后2h、1d、3d、7d、14d,采用c-fos和calbindinD-28k抗体行免疫组化和荧光双标检测外侧膝状体中的c-fos定位,用Western印迹法检测外侧膝状体中的c-fos表达量.结果在损伤眼同侧的外侧膝状体腹侧核内侧核团和中间核可见c-fos阳性细胞,损伤后2h开始出现,1d时达到高峰,3d时稍有减少,7d时明显减少,14d仍有少量c-fos阳性细胞.外侧膝状体的背侧核及对照组未见c-fos阳性细胞.CalbindinD-28k阳性细胞主要出现在外侧膝状体的腹侧核内侧核团和中间核内.75%～83%的c-fos都出现在calbindinD-28k阳性细胞的胞核中.结论大鼠的视神经钳夹伤诱导了即早基因c-fos在同侧外侧膝状体腹侧核内侧核团和中间核calbindinD-28k阳性投射神经元中的表达,它们可能在视神经急性损伤的病理过程中起重要作用.(中华眼科杂志,2005,41:321-324)

基于BDNF/TrkB通路探讨清心开窍方对APP/PS1双转基因小鼠学习记忆能力的影响

目的 基于脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor, BDNF)/原肌球蛋白相关激酶B(Tropomyosin-related kinase B,TrkB)通路探讨清心开窍方对淀粉样前体蛋白/早老素-1(APP/PS1)双转基因小鼠认知功能及神经元保护作用的影响。方法 将30只APP/PS1小鼠按照随机数字表法分为模型组、安理申组(1.67 mg·kg^(-1)·d^(-1))、清心开窍方低剂量组(4.75 mg·kg^(-1)·d^(-1))、清心开窍方中剂量组(9.5 mg·kg^(-1)·d^(-1))和清心开窍方高剂量组(19 mg·kg^(-1)·d^(-1))。选取6只雄性C57/B6小鼠记为对照组,连续90 d于每日上午9点进行灌胃。完成灌胃后,通过Morris水迷宫测试小鼠的空间学习记忆能力;通过HE染色观察小鼠海马CA1区细胞形态变化;通过尼氏染色观察小鼠海马CA1区病理形态变化;通过实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测β位淀粉样前体蛋白裂解酶1(BACE1)、TrkB、BDNF mRNA在小鼠海马中的表达;通过蛋白免疫印迹法(Western blotting, WB)检测P-TrkB、TrkB、BACE1、BDNF蛋白的表达水平。结果 与对照组相比,模型组小鼠逃避潜伏期明显增多(P<0.01),而穿越平台次数以及在原平台所在象限滞留的时间明显增多(P<0.01),其小鼠海马神经元出现严重损伤,排列松散,尼氏体数量减少,染色变浅,BACE1表达增加(P<0.01),P-TrkB、TrkB、BDNF表达降低(P<0.01);与模型组相比,清心开窍方治疗组逃避潜伏期缩短,穿越平台次数以及目标象限停留时间明显增多(P<0.05或P<0.01),小鼠海马锥体细胞排列较紧密,形态完整,尼氏体数目增加,着色加深,BACE1表达降低(P<0.05或P<0.01),P-TrkB、TrkB、BDNF表达增加(P<0.05或P<0.01)。结论 清心开窍方可能通过BDNF/TrkB通路改善APP/PS1小鼠学习记忆能力,对神经细胞起保护作用。

核桃早实基因的RAPD标记及其序列分析研究

【目的】确定RAPD标记OPB-08900与核桃早实基因的遗传距离,对该标记测序,分析其序列特征。【方法】以核桃早实优系绿园和晚实、速生优系绿丰及绿园×绿丰杂交组合的154株F1杂种后代材料的DNA为模版,OPB-08(5′-GTCCACACGG-3′)为引物,PRAD-PCR技术检测与核桃早实基因相关的RAPD标记OPB-08900在供试亲本和F1群体的分离状况,Haldane函数计算遗传距离;对OPB-08900DAN片段克隆测序;DNAMAN软件分析序列酶切位点,BLAST分析序列同源性。【结果】RAPD标记OPB-08900在早实亲本绿园上标记带出现,在70株早实后代的69株上出现;但在晚实亲本绿丰上该标记带未出现,在84株晚实后代中有82株未出现;供试杂交群体早实和晚实性状的分离比例符合1﹕1的分离比例,RAPD标记OPB-08900与核桃早实基因共分离,OPB-08900与核桃早实基因的遗传距离为1.99cM,序列全长958bp,该标记应记为OPB-08958,GenBank序列号为DQ673614;有36个限制性内切酶对OPB-08958序列有97个酶切位点,OPB-08958序列和植物基因组序列没有同源性。【结论】核桃的早实性状受多基因控制,RAPD标记OPB-08958与核桃早实基因之一相连锁,其DNA序列为核桃基因组所独有。

晚发阿尔茨海默病与早老素1基因及载脂蛋白E基因的关联分析

目的 对中国汉族人群中早老素 1(presenilin 1,PS1)基因 8号内含子多态性与晚发阿尔茨海默病 (AD)进行关联分析 ,探讨PS1与载脂蛋白E(ApoE)基因多态性有无相互作用。方法 应用聚合酶链式反应和限制性片段长度多态性方法 ,检测了 10 3例晚发AD患者和 98例正常老年人中PS1与ApoE基因多态性 ,并对AD与PS1和ApoE各等位基因及基因型进行了关联分析。结果 ①在晚发AD患者中 ,PS1等位基因 1和 1/1基因型频率显著升高 (Z =2 0 9,2 80 ,P <0 0 5 ) ,而等位基因 2的频率显著降低 (Z =2 0 9,P <0 0 5 )。②晚发AD患者与PS1等位基因 1呈正相关 (RR =1.5 8,χ2 =5 .11,P <0 0 5 ) ,与PS1等位基因2呈负相关 (RR =0 .63 ,χ2 =5 .11,P <0 0 5 ) ;晚发AD患者与PS 1/1基因型呈正相关 (RR =2 .43 ,χ2 =7 5 7,P <0 0 1) ,与 1/2及2 /2基因型无明显关联。③晚发AD与ApoEε3 /ε4基因型和等位基因ε4呈正相关 (RR =2 .95 ,χ2 =8 18;RR =3 .13 ,χ2 =13 .0 ,P均小于 0 0 1)。结论 中国南方汉族人群中PS1和ApoE基因多态性与晚发AD之间有密切相关性。

转cry1C~*及cry2A~*基因早粳稻Bt蛋白的时空表达和抗螟虫性

早粳稻空育131为受体,以根瘤农杆菌介导遗传转化法创制了转ubi启动子调控下的cry1C*及cry2A*基因早粳稻空育131 (cry1C*)和空育131(cry2A*)。为了研究转基因水稻Bt蛋白的时空表达特性及抗螟虫性,将不同转化事件形成的转基因早粳稻品系种植于田间,利用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测转基因水稻不同生长发育阶段不同器官的、以及成熟期糙米的Bt蛋白量,采用室内离体茎秆法接虫鉴定转基因水稻的抗螟虫性。结果显示,转基因早粳稻不同抗虫基因Bt蛋白量不同, cry1C*基因总是低于cry2A*基因的蛋白质表达量;不同生长发育时期Bt蛋白量不同,叶片和茎鞘等器官的Bt蛋白量为分蘖期<抽穗期<灌浆期,幼穗或糙米等器官的Bt蛋白量为抽穗期幼穗>灌浆期幼穗>成熟期糙米;不同器官Bt蛋白量不同,高低次序在分蘖期为叶片、茎鞘,抽穗期为叶片、幼穗和茎鞘,灌浆及成熟期为叶片、茎鞘、幼穗和糙米;同一抗虫基因不同转基因品系间抽穗期叶片、茎鞘和幼穗等器官Bt蛋白量及抗螟虫性、糙米Bt蛋白量等性状存在差异,抽穗期各器官Bt蛋白量与抗螟虫性及成熟期糙米Bt蛋白量之间相关不显著,不论Bt蛋白量高或低的品系均表现为高抗螟虫。转基因早粳稻营养器官生长发育前期Bt蛋白量较低、后期较高,繁殖器官生长发育早期Bt蛋白量较高、晚期较低,营养器官通常比繁殖器官的Bt蛋白量高。在本研究范围内,不同基因及不同转化事件培育的转基因水稻Bt蛋白表达量高低不同,但所有的转基因早粳稻品系均表现高抗螟虫。

α1-抗糜蛋白酶基因、早老素1基因与阿尔茨海默病的相关分析

目的探讨中国汉族人中α１抗糜蛋白酶（ＡＡＣＴ）基因、早老素１（ＰＳ１）基因多态性与阿尔茨海默病（Ａｌｚｈｅｉｍｅｒｓｄｉｓｅａｓｅ，ＡＤ）的相关情况。方法应用ＰＣＲＲＦＬＰ方法，在１２３例患者和１４０例正常人中观察ＡＡＣＴ信号肽和ＰＳ１基因多态性的分布，进行关联分析。结果１ＡＤ患者与ＰＳ１基因等位基因１正关联，与等位基因２和基因型２／２负关联，但与１／１基因型无关；２ＡＡＣＴ信号肽基因多态性与ＡＤ无关联；３在三种ＰＳ１基因型中，ＡＡＣＴ信号肽基因多态性与ＡＤ均无关；４在ＡＡＣＴ基因ＡＡ、ＴＴ基因型中，ＰＳ１基因多态性与ＡＤ负关联，而ＴＡ型中ＰＳ１基因与ＡＤ无显著相关。结论中国人群中，ＡＤ与ＰＳ１基因２／２型负关联，而与ＡＡＣＴ信号肽基因多态性无关；ＡＡＣＴ信号肽和ＰＳ１基因多态性之间也无明显的相互影响。

肾移植术后受者外周血淋巴细胞的早反应基因表达谱变化

背景:同种异体免疫应答过程中有许多基因参与淋巴细胞的活化及其调控。目的:研究肾移植后受者外周血淋巴细胞差异表达基因,尤其是早反应基因。设计、时间及地点:基因水平的对照观察实验,于2003-09/2004-02在解放军第二军医大学长征医院泌尿外科及器官移植中心以及上海博星基因芯片公司完成。对象:选取无明显急性排斥反应的同种异体肾移植受者16例。方法:应用包含4096个人cDNA克隆的微矩阵芯片,分析肾移植受者移植后24h外周血淋巴细胞的基因表达谱。每位受者于移植前当日和术后24h分别抽取外周血10mL,分离外周血淋巴细胞。16例受试者同一时间点的淋巴细胞混合。按一步法抽提两个时间点细胞总RNA并纯化mRNA,分别反转录合成、标记cDNA探针,与包含4096个人cDNA克隆的微矩阵芯片杂交,结果通过生物信息学方法分析。主要观察指标:差异表达的基因。结果:肾移植后24h与移植前相比,肾移植受者外周血淋巴细胞差异表达的基因共有216个,其中下调基因103个,上调基因113个。这些基因主要涉及细胞信号转导、细胞凋亡等多个种类。结论:肾移植后24h,基因芯片技术可有效地筛选出受者外周血淋巴细胞早反应基因的差异表达。

早花基因在植物教学及遗传育种中的应用

不同植物在开花时间上总是存在一定的差异,这种差异有其本身的遗传基础,也与温度和(或)光周期有密切关系,这些性状可能以数学遗传或质量遗传方式遗传下去。深入研究表明植物均不同程度地存在早花基因,Gottschal和Wellensic报道了豆类中的早花基因,报道认为早花基因是隐性等位基因;Murfet报道了在豆类中的早花基因为一个显性一个隐性组成;Bernard报道了大豆的早花基因为两个隐性等位基因;Coyne和Mattson鉴别出了菜豆的三种开花时间基因;Pinihus报道了春小麦中的一个显性早花基因;Ttai讨论了水稻上的复杂开花基因。

早胜牛A-FABP基因SNPs与胴体品质和肉质性状的关系

为研究早胜牛(Bos taurus)A-FABP基因多态性与胴体品质和肉质性状的相关性,采用PCR-SSCP方法对5个早胜牛群体(庆阳群体、平凉群体、南德温与庆阳杂种群体、西门塔尔与平凉杂种群体、秦川与平凉杂种群体)A-FABP基因型进行了测定,并分析其多态性与胴体品质和肉质性状的相关性。结果表明,A-FABP基因第2外显子区c.280A>G,并检测到3种基因型AA、AG和GG。对屠宰后胴体和肉质性状相关分析表明,基因型AG屠宰率极显著高于AA(P<0.01),而净肉率GG极显著高于AA(P<0.01);基因型AG剪切力显著低于AA(P<0.05)。由此认为A-FABP基因突变位点可作为早胜牛胴体性状和肉质性状遗传标记。

人乳头瘤病毒16型早基因E6/E7编码区序列变异研究

目的获取人乳头瘤病毒16型早基因E6/E7的编码区序列并进行变异分析,为新型分子诊断方法的研发提供目标序列。方法通过导流杂交基因芯片技术获取人乳头瘤病毒16型感染宫颈脱落细胞。设计特异性引物,扩增人乳头瘤病毒16型早基因E6/E7的编码区序列,克隆后测序并对序列进行变异分析。结果通过导流杂交基因芯片技术进行宫颈脱落细胞的分型检测,获得了人乳头瘤病毒16型感染阳性标本;选择其中3份阳性标本核酸为模板,通过特异性引物均成功扩增出大小介于750 bp和1 000 bp之间的目的序列;分别克隆到T载体上并测序,得到3条人乳头瘤病毒16型早表达基因E6/E7的编码区序列,克隆并测序后向GenBank核酸数据库提交获收录,登录号分别为EU869316、EU869317和EU869318;经BLAST分析,3条序列与GenBank序列PPH16(Accession:K02718)的E6/E7编码区序列一致性均为99%,且存在8种碱基置换,其中4种为同义突变,另4种则可引起所编码的相应氨基酸残基改变。结论本研究得到了与HPV高危型16型PPH16高度相似的E6/E7编码序列,为HPV致病机制和新型分子检测方法研究奠定了基础。

他扎罗汀对进行期银屑病增殖表皮中早幼粒细胞白血病基因的抑制作用

目的探讨他扎罗汀在进行期寻常型银屑病中的作用机制。方法将43例进行期寻常型银屑病患者随机分为他扎罗汀治疗组及对照组,用原位杂交的方法检测进行期银屑病皮损外用他扎罗汀治疗前后的早幼粒细胞白血病(PML)基因mRNA的表达。结果在银屑病治疗组皮损中,可见PML不仅表达于基底层(86.96%),且以灶状表达于基底上层(78.26%);他扎罗汀治疗后14d全层几乎无PMLmRNA表达(基底层为8.69%,基底上层为4.35%)。对照组处理前后PML基因表达无明显变化。结论他扎罗汀可能通过下调进行期银屑病表皮中PML基因的表达来抑制表皮角质形成细胞的异常增殖。