芍药苷对人黑素瘤细胞株A375增殖凋亡的影响

目的:研究不同浓度芍药苷(PF)对人黑素瘤细胞A375增殖抑制及早期凋亡的影响。方法:将体外培养的人黑素瘤细胞株A375分为6组,5个实验组分别加入不同浓度PF(2、1、0.5、0.1、0.01 mg/mL),对照组不加PF。光镜下观察细胞密度及形态、MTT法测定细胞增殖抑制率,Annexin V/PI染色法检测细胞早期凋亡率。结果:镜下观察可见随着PF浓度的增加,黑素瘤细胞株A375数量降低,贴壁能力渐差,细胞形态渐圆钝,甚至出现皱缩。与对照组相比,不同浓度PF处理A375细胞24 h、48 h和72 h后,PF对细胞有浓度依赖性的增殖抑制作用(P<0.05),但未见明显的时间依赖性(P>0.05)。不同浓度PF干预24 h时A375细胞的早期凋亡率,对照组和各实验组差异无统计学意义(P<0.05)。结论:PF能抑制人黑素瘤细胞株A375的增殖,这种抑制作用呈浓度依赖性而非时间依赖性,但对A375细胞早期凋亡率无明显影响。

不同光照时长对体外培养人视网膜色素上皮细胞光损伤凋亡的影响

目的研究不同光照时长对体外培养的人视网膜色素上皮细胞(hRPE)凋亡的影响,筛选出最佳建造光损伤模型的光照时长,为后续研究视网膜光损伤机制及光损伤保护提供必要的实验基础。方法体外培养人视网膜色素上皮细胞(hRPE),用三基色冷光灯模拟自然光源,选取(2500±500)Lux作为基础光照强度,以不同光照时长(2、4、6h)对细胞进行照射,建立光损伤模型。分别采用MTS法和流式细胞术检测细胞活力及早期凋亡率,比较给予不同光照时长后,hRPE的活力及早期凋亡率的差异。结果与空白对照组比较,不同光照时长(2、4、6h)均能抑制细胞活力及引起细胞凋亡;光照时间越长,细胞损伤越严重,光照6h组细胞活力下降明显(P<0.05);光照组细胞早期凋亡率较空白对照组升高(P<0.05),光照组间比较,光照4h组早期凋亡率升高明显(P<0.05)。结论不同光照时长均可造成hRPE不同程度的损害;给予4h时长光照后,hRPE损伤以早期凋亡为主,同时又保有较高的细胞活力,故选取4h作为最佳建造光损伤模型的光照时长。

赤芍总苷对过氧化氢所致H9c2心肌细胞损伤的保护作用

目的探讨赤芍总苷(TPG)对叔丁基过氧化氢(tBHP)所致心肌细胞损伤的保护作用。方法以叔丁基过氧化氢加入培养24h的H9 c2细胞造成氧化损伤模型,对比分析正常对照组、tBHP损伤组、不同剂量赤芍总苷保护组的细胞形态、乳酸脱氢酶(LDH)和肌酸激酶(CK)活性、丙二醛(MDA)含量及细胞早期凋亡情况。结果 tBHP损伤组与正常对照组相比,细胞皱缩变圆,数目明显减少,CK和LDH活力及MDA的含量明显升高(P<0.05),细胞凋亡率增大。与tBHP损伤组相比,TPG保护组细胞数目增多,CK、LDH及MDA均有不同程度降低(P<0.05),早期凋亡细胞减少。结论 TPG对tBHP造成的心肌细胞损伤具有一定的保护作用,其机理可能与稳定心肌细胞膜、清除自由基和抑制心肌细胞早期凋亡有关。

气血并治方有效组分对缺氧/复氧损伤心肌保护作用的机制研究

目的:观察气血并治方组分配伍(Components of water extract from Qixue Bingzhi Recipe,CWQB)对缺氧/复氧(Hypoxia/Reoxygenation,H/R)损伤心肌细胞的保护作用,探讨其改善心肌能量代谢从而防止细胞凋亡的相关性机制。方法:分离、提取、培养出生1-2天的SD乳鼠原代心肌细胞,缺氧3 h复氧2 h制作H/R模型,分为Control组(正常氧组)、H/R组(缺氧/复氧模型)、TMZ组(缺氧/复氧模型+100μmol/L曲美他嗪(Trimetazidine,TMZ))和CWQB组(缺氧/复氧模型+1mmol/L气血并治方有效组分)。采用高效液相色谱分析法(HighPerformance Liquid Chromato-graph,HPLC)测定各组细胞高能磷酸化合物-一磷酸腺苷(Adenosine mono-phosphate,AMP)、二磷酸腺苷(Adenosine diphosphate,ADP)、三磷酸腺苷(Adenosine triphosphate,ATP)的含量并计算总腺苷酸量(Total adenylic acid,TAN)、能荷(Energy charge,EC)水平;酶联免疫吸附法(Enzyme linkedimmuno sorbent assay,ELISA)法检测心肌细胞损伤标志物肌酸激酶同工酶(Creatine kinase-MB,CK-MB)、肌钙蛋白T(Troponin,c Tn T)水平,流式细胞术检测心肌细胞早期凋亡率。Pearson相关性检验分析心肌损伤标志物、早期凋亡率与高能磷酸化合物含量之间的关系。结果:与H/R组比较,TMZ组、CWQB组AMP含量下降,ADP、ATP含量和TAN、EC水平均有所升高,其中TMZ组ADP、ATP、TAN升高程度较CWQB组更为显著(p<0.05);TMZ组、CWQB组CK-MB、c Tn T含量显著下降,其中CWQB组c Tn T含量下降更为显著(p<0.05);TMZ组、CWQB组早期凋亡率有所下降,TMZ组下降更为显著(p<0.05)。相关性分析显示,CK-MB水平与ADP浓度呈显著负相关;早期凋亡率与AMP浓度呈显著正相关,与ADP、ATP浓度呈负相关(P<0.01)。结论:CWQB能够在降低H/R心肌细胞AMP浓度,升高ADP、ATP浓度和TAN、EC水平的同时,减轻心肌损伤标志物CK-MB、c Tn T含量,抑制心肌细胞的早期凋亡率,从而发挥对H/R损伤心肌细胞的保护作用。

粘结剂对人中性粒细胞活力影响的实验观察

目的探讨3种固定修复用粘结剂影响人中性粒细胞(polymorph nuclear neutrophils,PMNs)的存活率、早期凋亡率以及坏死率。方法采用流式细胞术检测PMNs与玻璃离子水门汀、聚羧酸锌水门汀、光固化树脂3种粘结剂直接接触4 h后其存活率、早期凋亡率以及坏死率的变化。结果流式细胞仪观察3组粘结剂的PMNs早期凋亡率、坏死率均高于空白对照组,3组粘结剂存活率均低于空白对照组,其中聚羧酸锌水门汀组早期凋亡率、坏死率最高,存活率最低;玻璃离子组早期凋亡率,坏死率最低,存活率最高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 3种粘结剂促进PMNs的早期凋亡、坏死,导致存活的PMNs的数目减少,从而可能使局部炎症产生以及抗菌性下降。