学习记忆过程中即刻早期基因c-fos、c-jun在纹状体边缘区的表达

目的研究大鼠在学习记忆过程中即刻早期基因c-fos、c-jun在纹状体边缘区内的表达。方法将动物首先在Y-宫中进行学习记忆训练,然后应用免疫细胞化学方法检测c-Fos、c-Jun蛋白在纹状体边缘区内的表达。结果大鼠经迷宫训练1h后,纹状体边缘区内即有c-Fos、c-Jun蛋白的明显表达,尤其c-Jun在边缘区的表达较纹状体其他部位为集中。迷宫训练组动物纹状体边缘区内c-Fos、c-Jun蛋白的表达数量明显高于假训练组或对照组(P<0.01)。此外,在马、扣带回等处也有c-Fos、c-Jun蛋白的阳性表达。结论大鼠进行Y-迷宫厌暗学习时,纹状状边缘区内的即刻早期因c-fos、c-jun参与学习记忆的信号转导过程。

单纯疱疹Ⅰ型病毒即刻早期基因上游调控序列分析

感染人体的单纯疱疹病毒(HSV)在宿主细胞中,以级联反应的方式表达病毒蛋白.作为最早表达的立即早期基因,其上游都具有相似的调控序列.通过α4基因上游转录相关元件的依次递减,以CAT作为报告基因,评估了在病毒感染细胞早期阶段中,各DNA序列对立即早期基因转录所发挥的可能作用.实验数据表明,HSV立即早期基因在细胞中的表达受到多种元件的共同调控,这些成簇分布的调控元件的排列分布将为深入了解HSV的复制周期提供有益的线索.

转化生长因子β1和即刻早期基因及p27在中耳胆脂瘤上皮中的表达

目的 研究转化生长因子 β1(transforminggrowthfactor β1,TGF β1)、即刻早期基因 (c fos)、周期素依赖性激酶抑制蛋白 p2 7在中耳胆脂瘤上皮中的表达及相互之间的关系 ,探讨其表达对胆脂瘤侵袭能力的影响。方法 应用免疫组化链霉菌抗生物素蛋白 过氧化酶染色法检测TGF β1、c fos和 p2 7在 31例胆脂瘤上皮、11例胆脂瘤患者外耳道上皮和 10例正常外耳道上皮中的表达 ,应用计算机图像分析系统对其阳性表达进行定量分析。结果 TGF β1和c fos在胆脂瘤上皮中表达阳性率分别为 87 1%和 83 9% ,与胆脂瘤患者外耳道上皮和正常外耳道上皮相比表达差异有显著性。而p2 7在胆脂瘤上皮和外耳道上皮组上皮中均未见阳性表达。胆脂瘤上皮中c fos与TGF β1表达无相关性 (r =0 339,P =0 331) ;胆脂瘤侵袭能力与c fos表达有高度显著相关关系 (r =- 0 96 5 ,P <0 0 1) ,与TGF β1表达也有高度相关关系 (r =- 0 4 0 6 ,P <0 0 1)。 结论 即刻早期基因c fos在胆脂瘤中表达显著增强 ,且与胆脂瘤的侵袭能力有高度显著相关性 ,提示高c fos表达是胆脂瘤高增殖特征的因素之一。TGF

大蒜新素抑制人巨细胞病毒即刻早期基因表达在抗人巨细胞病毒机制中的作用

目的研究大蒜新素抑制人巨细胞病毒(HCMV)复制的作用环节和机制。方法采用时间依赖的药物添加和移除实验分析大蒜新素在HCMV病毒复制周期中的作用环节。用Southern blot检测大蒜新素处理后感染细胞中HCMV DNA负荷量变化。用Northern blot和Western blot检测大蒜新素对HCMV即刻早期(ie)基因转录和翻译的影响,并与相应浓度更昔洛韦(GCV)的作用效应作比较。结果时间依赖的药物添加和移除实验发现大蒜新素只有在HCMV感染复制周期的早期存在时才能发挥对病毒增殖的抑制作用。大蒜新素对ie 1 mRNA的抑制率达30．4％-46．6％。在感染后24 h 病毒表达IE蛋白的高峰期时,大蒜新素对IE72表达的抑制率为42．6％-64．9％,对IE86表达的抑制率为50．7%- 70．6％。到感染后72 h时(子代病毒表达IE蛋白的时期),大蒜新素对IE蛋白仍然有抑制作用,对IE72的抑制率为 36.4％-49．3％,对IE86的抑制作用更为明显,抑制率达77．9％-87．7％,接近于对IE72抑制率的2倍。而GCV对一个 HCMV复制周期内的ie 1 mRNA和IE蛋白表达均无抑制作用。Southern blot结果显示,在感染后72 h(HCMV完成一个复制周期的时间点),大蒜新素和GCV均能减少HCMV DNA负荷量,两药相当剂量的抑制效应比较,差异无统计学意义(P> 0．05)。结论大蒜新素抑制HCMV ie基因的转录和翻译,进而抑制病毒的复制增殖,是其抗HCMV的重要作用机制。

电磁场刺激对骨髓间充质干细胞即刻早期基因表达的影响

背景:细胞受刺激后即刻早期基因在细胞核内快速表达,其编码的核蛋白作为反式作用因子,通过激活某些基因的转录而调控细胞的增殖、分化等生物学行为。目的:观察电磁场刺激对大鼠骨髓间充质干细胞c-fos、c-myc和c-jun即刻早期基因表达的影响。设计、时间及地点:电刺激干预的体外细胞学观察,于2006-10/2007-01在同济医院矫形外科实验室完成。材料:清洁级健康Sprague-Dawley大鼠6只,由华中科技大学同济医学院动物实验中心提供。电磁场发生器由海军工程大学电机系设计制造。方法:贴壁筛选法体外分离培养大鼠骨髓间充质干细胞,传至第4代按2×103个/孔接种,每孔均加入200μL含10%胎牛血清的DMEM-F12培养基,分为2组,对照组细胞置于普通培养箱中培养3d,暴磁组在培养箱中安装电磁场发生器,频率50Hz、强度1mT的正弦波,每次刺激30min,间隔11.5h,2次/d,共刺激5d。主要观察指标:MTT法检测细胞增殖活性,考马斯亮蓝法测定细胞碱性磷酸酶活性,RT-PCR检测即刻早期基因的表达。结果:电磁场刺激3d后,暴磁组MTT产物吸光度值明显高于对照组(P<0.01);电磁场刺激5d后,暴磁组细胞碱性磷酸酶活性明显高于对照组(P<0.01)。与对照组比较,暴磁组c-fos和c-myc基因表达均有不同水平的上调(P<0.01),c-jun基因无明显变化。结论:电磁场刺激可上调骨髓间充质干细胞中c-fos和c-myc即刻早期基因的表达,可能通过该途径来促进骨髓间充质干细胞的增殖活性,诱导其向成骨细胞分化。

温胆汤对焦虑性失眠大鼠即刻早期基因表达的影响

目的:观察温胆汤对焦虑性失眠大鼠脑皮层和海马部位c-fos和c-jun的影响。方法:健康SD大鼠90只,随机分为正常组、空白模型组、西药组及中药大、中、小剂量组,每组各15只。空白模型组、西药组和中药组分别给予蒸馏水、地西泮和温胆汤煎剂灌胃。空白模型组、西药组、中药大中小剂量组接受不确定性空瓶饮水刺激并采用对氯苯丙氨酸腹腔注射建立焦虑性失眠模型,并行行为学测试。末次测试24h后,用免疫组化法测大鼠海马区c-fos及cjun含量。结果:西药组及中药大中小剂量组失眠大鼠的焦虑行为较空白模型组减少;中药大中小剂量组大鼠海马区c-fos和c-jun含量较空白模型组降低(P<0.05)。结论:温胆汤大中小剂量同地西泮均具有一定的抗焦虑作用,c-fos和c-jun基因很可能参与了焦虑性失眠大鼠细胞凋亡过程,温胆汤可能是通过抑制脑组织c-fos和c-jun的表达上调,而发挥脑保护作用。

甲基汞神经毒性检测和评价效应指标——即刻早期基因研究

论述了甲基汞神经毒性研究现状,通过分析即刻早期基因(IEG)在甲基汞神经毒性机制中的作用,得出即刻早期基因 能作为甲基汞神经毒性检测和评价的效应指标。同时也简要介绍即刻早期基因的研究方法,并指出利用基因芯片技术能够初步筛 选出甲基汞对大鼠脑基因表达影响的相关基因。

甲基汞对大鼠大脑皮层即刻早期基因c-FOS蛋白表达影响

为了探讨甲基汞对大鼠大脑皮层损伤的分子机制,应用免疫组织化学方法研究了甲基汞暴露后(对照组为w=0.009的生理盐水,暴露组浓度分别为0.05、0.5、5μg/g;取样时间分别为20、60、240、1 440 m in),大鼠大脑皮层即刻早期基因c-FOS蛋白表达变化.结果表明,大鼠脑c-FOS蛋白表达优先于汞的蓄积,甲基汞对大鼠大脑皮层c-FOS蛋白表达与其浓度之间有一定的剂量-效应关系;c-FOS参与了甲基汞对大鼠大脑皮层损伤毒性过程,即刻早期基因c-FOS可以作为甲基汞神经毒性检测评价效应指标.

视网膜色素上皮细胞光损伤早期基因的差异表达

目的 分离视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞光损伤早期差异表达的基因。方法 对光损伤早期培养的 RPE细胞,应用差异显示(differential display,DD)技术和银染变性 SDS-PAGE分析方法,分离差异表达的基因。结果 获得一段长为458bp新的基因序列,在GenBank登录,登录号为:AF509472。结论 在可见光对培养的RPE细胞损伤的过程中,除一些已知基因的表达外,可能还有新的基因参与了这一过程。

杆状病毒早期基因启动子载体的构建及报道基因的表达

以ＡｃＮＰＶｐ１０基因为侧翼序列，用ＡｃＮＰＶ的ＩＥ１基因启动子构建了杆状病毒早期基因启动子载体，并将新霉素抗性基因（ｎｅｏ）插入ＩＥ１基因启动子下游，得到转移载体ｐＡｃＰＩｎｅｏ。将它和野生型ＡｃＮＰＶＤＮＡ共转染昆虫细胞Ｓｆ９，由于ｎｅｏ基因的表达，通过Ｇ４１８的选择和富集作用，得到重组病毒ｖＡｃＰＩｎｅｏ的纯培养。用酶切和Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交证明，ｎｅｏ基因整合于ＡｃＮＰＶ基因组的ｐ１０基因位相。用重组病毒感染昆虫细胞，不同时间取样提取ＲＮＡ并进行杂交，结果表明ｎｅｏ基因在受染细胞内从早期到晚期都可发生转录。

即刻早期基因c-fos与心理应激的分子机制研究进展

即刻早期基因ｃ－ｆｏｓ与心理应激的分子机制研究进展卢晓虹李凌江心理应激是个体“察觉”环境对生理心理及社会功能系统造成负担时的整体现象，所起的反应可以是适应的或适应不良的。而从察觉威胁到出现反应是通过脑机制的中介来实现的，虽然目前对“观念的”心理社会因...

体外感染后巨细胞病毒即刻早期基因转录及细胞结构变化的研究

目的：研究巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）感染后即刻早期基因转录及细胞结构的变化。方法：用ＨＣＭＶＡＤ１６９株感染人胚肺成纤维细胞，通过逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）动态检测感染后不同时间ＨＣＭＶ即刻早期基因（ＩＥＧ）ｍＲＮＡ转录，同时在电镜下观察细胞结构变化的特点。结果：ＨＣＭＶ感染细胞６ｈＩＥＧｍＲＮＡ开始转录，并持续到９６ｈ；感染初期（６～１２ｈ内）胞体肿胀，内质网（ＥＲ）囊腔膨大，１２～２４ｈ可见典型的“猫头鹰眼”样包涵体，细胞变圆，晚期（４８ｈ后）细胞灶性脱落，胞质退缩，ＥＲ少见，核中见待出核的成熟病毒颗粒。结论：ＨＣＭＶＩＥＧ在病毒复制过程中持续转录，并伴有细胞结构的病理变化，因此ＨＣＭＶＩＥＧ可作为病毒活跃复制的监测指标。

电针刺激下即刻早期基因和前脑啡肽基因在中枢神经系统中的表达及定位研究

采用免疫组织化学、Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交与原位杂交等方法，观察到２／１５Ｈ电针刺激可诱导大鼠中枢神经系统内即刻早期基因ｃ－ｆｏｓ、ｃ－ｊｕｎ的ｍＲＮＡ与免疫阳性物质以及前脑啡肽（ＰＥＮＫ）ｍＲＮＡ的生成。Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交显示，电针在１～２ｈ内引起即刻早期基因ｃ－ｆｏｓｍＲＮＡ的表达，继之以ＰＥＮＫｍＲＮＡ的表达，在４８ｈ内方达顶点；形态学结果表明，电针诱导ｃ－ｆｏｓ、ｃ－ｊｕｎ与ＰＥＮＫｍＲＮＡ及其蛋白产物的生成在中枢的分布具有明显的一致性。提示Ｆｏｓ／Ｊｕｎ可能作为ＰＥＮＫ基因的转录调节因子。

杆状病毒早期基因的结构与功能

杆状病毒早期基因的结构与功能王家旺，齐义鹏（武汉大学病毒学研究所武汉４３００７２）在感染的昆虫细胞中，杆状病毒基因的表达和ＤＮＡ的复制是级联式的￣［１，２］。用受染细胞脉冲标记的特异性蛋白、蛋白质合成抑制剂（如放线菌酮）和ＤＮＡ复制抑制剂（如Ａｐｈｉ...

类毒素-A激活PC12细胞时胞内即刻早期基因的表达

目的探讨即刻早期基因在类毒素A激活PC12细胞烟碱受体过程中的调控作用。方法运用逆转录聚合酶链反应方法测定类毒素A激活PC12细胞烟碱受体时胞内cfos,cjun,NGFIA和NGFIB四个即刻早期基因的mRNA基因表达情况。结果当10-9、10-8、10-7molL类毒素A激活PC12细胞烟碱受体1小时,或10-7molL类毒素A激活PC12细胞30、60、120分钟时,细胞内cfos和NGFIAmRNA基因表达均显著高于对照组(P<005),是对照组的2～6倍,且cfos基因表达呈剂量反应和时间效应关系。而此间cjun和NGFIB基因表达与对照比较没有明显变化。结论cfos和NGFIA可能参与调控类毒素A激活PC12细胞烟碱受体的作用。

EB病毒早期基因BHRF1转基因模型鼠的建立

目的构建稳定表达EB病毒早期基因BHRF1蛋白的重组载体,通过显微注射法建立BHRF1转基因鼠模型。方法自EBV阳性细胞系B95-8提取总RNA,应用RT-PCR扩增BHRF1基因,然后与pcDNA3.1(+)连接,构建pcDNA3.1-BHRF1重组载体。重组载体用NruⅠ和DraⅢ双酶切,电泳后纯化回收长约2000 bp的目的片段溶于显微注射缓冲液。从超排小鼠取健康受精卵,通过显微注射技术,将纯化的CMV+BHRF1+polyA DNA片段注射入小鼠受精卵,短暂培养后选择健康受精卵移入假孕母鼠输卵管内。采用PCR检测子鼠鼠尾组织DNA,鉴定筛选BHRF1阳性首建鼠。结果经PCR、限制性内切酶鉴定及测序证实pcDNA3.1-BHRF1重组载体构建成功,DraⅢ和NruⅠ双酶切获得长约2 000 bp的CMV+BHRF1+polyA DNA片段。自18只见栓超排小鼠获取健康受精卵480枚,分别注入纯化的目的片段,经短暂培养后390枚受精卵仍健康,移入14只假孕母鼠输卵管内,11只受孕,产下74只子鼠。PCR检测子鼠鼠尾DNA获得16只阳性首建鼠,阳性率为21.6%(16/74)。结论本实验首次建立了BHRF1转基因鼠模型,为深入研究BHRF1的生物学特性及其在EBV相关肿瘤发生发展中的作用提供了理想的动物模型。

EB病毒早期基因BHRF1转基因小鼠纯合子建立及建系

目的构建整合有EB病毒(EBV)早期基因BamHI-H右向读码框1(BHRF1)基因纯合子转基因小鼠。方法通过显微注射技术构建BHRF1阳性首建鼠F0共16只,将转基因小鼠与正常小鼠交配,得到子代F1小鼠,PCR技术检测子鼠鼠尾组织DNA,鉴定筛选BHRF1阳性鼠。阳性鼠再与同系阴性鼠杂交得到F2小鼠,筛选出F2小鼠中的阳性鼠近交得F3小鼠。筛选出F3小鼠中的纯阳性鼠进行近交,得到纯阳性F4小鼠。F4小鼠再近交得到纯阳性F5小鼠。结果经PCR及测序证实,F4、F5小鼠均为BHRF1阳性鼠,测序结果经blast比对,与BHRF1基因完全相同。结论本实验首次建立了BHRF1转基因鼠模型,并成功筛选出纯阳性BHRF1转基因小鼠,为深入研究BHRF1的生物学特性及其在EBV相关肿瘤发生发展中的作用提供了理想的动物模型。