大鼠胃黏膜损伤修复时早期应答基因c-Jun及c-met的表达

目的建立无水乙醇急性胃黏膜损伤大鼠模型并观察早期应答基因c-Jun和c-met对胃黏膜损伤修复的影响。方法采用无水乙醇1 ml胃饲诱发急性胃黏膜损伤大鼠模型,并于伤后0,4,8 d分别处理一组大鼠,观察损伤模型自然修复过程,免疫组织化学技术检测早期应答基因c-Jun和c-met的表达。结果在损伤模型自然修复过程中,损伤后4,8 d组大鼠胃黏膜损伤指数(LI)为32±7,18±3,均显著低于损伤模型组75±11,(P<0.05);免疫组织化学显示损伤后8 d组大鼠胃黏膜c-Jun的阳性表达率为87.5%,显著高于正常对照组的12.5%,c-met的阳性表达率为62.5%,均显著高于正常对照组的0及损伤模型组的0(P<0.05)。结论早期应答基因c-Jun和c-met的表达能促进急性胃黏膜损伤的修复,对黏膜损伤的自愈具有重要作用。

早期应答基因产物表达对移植静脉平滑肌细胞增殖的影响

目的 探讨c fos、c jun、c myc等早期应答基因与移植静脉平滑肌细胞 (SMC)增殖的影响。方法 建立Wistar大鼠 (6 0只 )自体血管移植模型 ,移植后 2h、6h、2d、1周、2周、4周分别切取移植静脉 ,应用免疫组织化学方法动态观察早期应答基因的变化情况。结果 正常血管平滑肌细胞中鲜有早期应答基因表达 ,c fos、c jun于移植后 2h达高峰 ,吻合口处为 (13.1± 3.3) %、(12 .8±2 .9) % ,中段静脉为 (10 .3± 2 .8) %、(10 .0± 1.9) % ,与术后 1周相比差异有显著性 (P <0 .0 1) ;c myc于 2h有少量表达 ,于 1周时达高峰 [吻合口 (16 .2± 3.8) %、中段静脉 (11.2± 2 .3) % ],与术后 4周相比差异有显著性 (P <0 .0 1)。结论 在移植静脉中 ,早期应答基因是SMC增殖的早期反应基因 ,参与DNA复制 ;c myc可能参与了细胞的持续增殖。

PMA激活内皮细胞早期应答基因谱分析

血管内皮细胞具有一系列重要生理功能 ,内皮细胞受外界刺激时可转录众多的mRNA ,体现了它们的生物学重要性 .内皮细胞的极早期应答基因 (Immediateearlyresponsegene ,ERG)是一类重要的介导基因 ,决定了外界刺激条件下细胞的最后反应模式 .以包含 40 96条各种人体基因的DNA芯片观察了血管内皮细胞受分化诱导剂PMA(phorbolmyristateacetate)激活后早期应答基因的表达谱 ,证实 17条ERG属已知基因 .数据处理聚类结果表明 ,多数ERG属蛋白质激酶及转录调控因子 ,2 3条上调新基因从功能上归类为ERG ;并且报道了其中的一条新基因的序列特征及其染色体位置和基因结构 ,为研究这个基因的功能提供了有力的实验依据 .

受PVY诱导的烟草NtERD1的基因分离与表达分析

通过抑制差减杂交和cDNA芯片法从受PVY诱导的烟草抑制差减杂交文库中筛选得到一段长为745 bp的基因EST片段,经Blast同源性比对分析,该序列与植物脱水诱导早期应答基因(ERD)在核苷酸和氨基酸水平上高度同源。ORfinder分析表明,该序列包含一个492 bp的开放读码框,编码163个氨基酸。氨基酸Blastp比对显示,该氨基酸序列与其他植物脱水诱导早期应答蛋白具有很高的同源性。所以筛选得到的这个新基因属于烟草脱水诱导早期应答基因,被命名为NtERD1(GenBank登录号为GU144573)。实时荧光定量PCR分析表明,NtERD1在PVY接种早期上调表达,因此NtERD1受PVY侵染诱导,可能对烟草抗病毒具有重要作用。

胶质瘤egr-1基因表达水平与其细胞增殖和凋亡关系的研究

目的:探讨胶质瘤细胞egr-1基因表达水平与肿瘤恶性程度、细胞增殖活性及凋亡程度的关系。方法:用原位杂交、原位细胞凋亡检测和免疫组化染色方法观察了73例不同级别的胶质瘤。结果:73例胶质瘤egr-1 mRNA和EGR-1蛋白阳性表达率均为100%,这两种阳性肿瘤细胞密度均随肿瘤恶性程度升高而相应增加,不同级别组间比较差异均有显著性(P<0.01)。73例胶质瘤增殖细胞核抗原(PCNA)阳性肿瘤细胞和凋亡肿瘤细胞检出率均为100%。随肿瘤恶性程度升高,PCNA阳性肿瘤细胞密度增加而凋亡肿瘤细胞密度减少,不同级别组间比较差异均有显著性(P<0.05～0.01)。经直线相关分析证实,egr-1 mRNA、EGR-1蛋白和PCNA阳性肿瘤细胞密度彼此间均呈显著性正相关(r=0.685～0.999,P<0.01),前三种阳性肿瘤细胞密度均与凋亡肿瘤细胞密度呈显著性负相关(r=-0.758～-0.775,P<0.01)。结论:egr-1基因表达水平对评价胶质瘤生物学行为有重要参考价值。胶质瘤细胞egr-1基因表达异常增加可能是促进肿瘤细胞增殖和抑制其凋亡的重要因素,并在胶质瘤发生及恶性进展过程中均起重要作用。

大鼠野生型Egr-1基因及Egr-1 shRNA真核表达质粒的构建及鉴定

目的:构建大鼠野生型早期生长应答基因-1(early growth responsegene-1,Egr-1)及其特异性短发夹状小干涉RNA(shRNA)真核表达质粒,并观察Egr-1在大鼠肾小球系膜细胞(GMC)中过表达及沉默Egr-1基因的情况。方法:用DNA重组技术将针对大鼠Egr-1基因的CDS区序列和针对其不同位点所设计的3对shRNA序列分别克隆到真核表达质粒pcDNA3.1-myc-his-A和pGCsi.U6.neo.GFP中。经酶切分析及序列测定正确后,用GenEscortTMⅢ转染试剂将上述两种质粒分别转染至大鼠GMC中,随后进行Western blot检测Egr-1蛋白的表达及筛选最佳沉默效率的shRNA。结果:限制性内切酶酶切及核酸序列分析证明,两种重组质粒均构建正确。Westernblot分析表明,构建的pcDNA3.1/Egr-1质粒在大鼠GMC中能够表达;Egr-1shRNA-2具有最佳沉默效率。结论:成功构建了大鼠野生型Egr-1基因和其特异性的shRNA真核表达质粒,为进一步研究Egr-1基因的生物学功能提供了必要的实验工具。

自体静脉移植术后血管平滑肌细胞内c-fos、c-myc和c-jun的表达

目的探讨自体静脉移植术后血管平滑肌细胞(VSMC)早期应答基因的变化。方法利用显微外科技术制作64只大鼠颈动脉自体静脉移植模型,采用免疫组织化学染色方法观察VSMC增殖与c-mycc、-fosc、-jun的变化。结果手术后2 h即可出现c-myc、c-fos、c-jun阳性表达,且c-fosc、-jun于移植后6 h达到高峰,c-myc于手术后1周达到高峰。结论c-mycc、-fosc、-jun表达状态与VSMC的增殖状态密切相关,对VSMC的增殖起到调控作用,尤其是始动阶段。

钙离子与肌细胞代谢的关系

钙离子(Ca2 + )具有多种生理功能。近年来随着实验技术的改进与发展 ,人们对Ca2 + 的作用有了进一步了解。Ca2 + 作为第二信使参与肌细胞活动的调节 ,开始引起广泛的重视。肌细胞内Ca2 + 浓度的变化 ,可能是肌细胞增殖的启动因子。它启动“早期应答基因”(c -myc,c -fos)和细胞膜受体(如CaM,β-受体)的高表达 ,引起肌细胞有丝分裂 ,最终实现蛋白质在细胞内沉积 。

鹿茸干预去卵巢骨质疏松症模型大鼠的实验评价

目的依据中医学“肾藏精生髓主骨”理论、骨的生长发育与肾精-脑髓-骨髓密切相关,研究鹿茸对去卵巢骨质疏松大鼠下丘脑-肾-骨的调节机制。方法采用去卵巢造模方法建立骨质疏松症大鼠模型,随机分为正常组、模型组、仙灵骨葆组、补佳乐组、鹿茸组;连续给药12周后;以双能X线骨密度分析仪进行骨密度(BMD)检测,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测大鼠股骨、肾、下丘脑组织转化生长因子β1(TGF-β1)、TGF-β1诱导早期应答基因1(TIEG1)活性。结果连续给药12周后,与正常对照组比较,模型组大鼠骨密度显著降低(P<0.05),与模型组比较,鹿茸可明显提高大鼠骨密度;与正常组比较,模型组大鼠骨、肾、下丘脑TGF-β1、TIEG1活性显著降低(P<0.05),与模型组比较,各给药组骨、肾、下丘脑组织中TGF-β1、TIEG1活性显著升高(P<0.05)。结论骨质疏松症病理机制之一是TGF-β1与TIEG1活性异常,鹿茸对下丘脑-肾-骨反馈机制具有明显的调控作用。

力竭运动后不同时相大鼠心肌Egr-1蛋白的变化及其在运动性心肌微损伤发生中的作用

目的:探讨力竭运动后不同时相心肌早期生长应答基因Egr-1在蛋白水平的变化特点,为运动性心肌微损伤及心肌功能异常发生机制的阐释提供实验依据。方法:100只健康成年雄性SD大鼠,分为一次力竭游泳运动组、两周反复力竭游泳运动组及安静对照组,分别于力竭运动后即刻、6 h、12 h及24 h取材,应用免疫荧光组化技术和图像分析方法研究大鼠心肌Egr-1蛋白含量的变化。结果:一次力竭运动组大鼠心脏各部位Egr-1蛋白含量即刻组与对照组相比显著性升高(P<0.05),24 h组与对照组相比显著性降低(P<0.05);反复力竭运动组大鼠心脏各部位Egr-1蛋白含量即刻组与对照组相比显著性升高(P<0.05),6 h组、12 h组、24 h组大鼠心脏各部位Egr-1蛋白含量均显著低于对照组(P<0.05)。结论:不同力竭运动后心脏各部位Egr-1在运动后即刻明显升高,表明心肌细胞Egr-1对力竭运动刺激产生快速应激反应,可能诱导炎性细胞的趋化、聚集以及氧自由基的产生。而心脏各部位Egr-1在力竭运动后24 h内恢复到正常水平,说明力竭运动后心脏Egr-1改变属早期应激反应,且此反应属可复性改变。

一个新的PMA诱导相关基因在Pichia pastoris酵母系统中的表达

利用包含 40 96条各种人类基因的DNA芯片研究了代谢增强剂PMA(phorbolmyristateacetate)激活的人单核巨噬细胞HTP 1的早期应答基因 ,根据已有的旧基因信息 ,实验结果基本反映了人单核巨噬细胞早期应答基因的表达谱 .选取其中一条候选早期应答基因为后续研究对象 ,并进行蛋白质的酵母表达 ,为下游的基因功能研究奠定一定的基础 .

酵母双杂交系统筛选IEX-1相互作用蛋白

骨肉瘤恶性程度高,侵袭力强,易发生早期肺转移,预后差,严重影响青少年身心健康.近20年来,其5年生存率虽有所增加,但治疗一直处于平台期,化疗疗效没有较大提高.我们研究表明早期应答基因IEX-1与骨肉瘤相关,IEX-1在As2O3作用后,表达明显下调.进一步机制研究结果显示，As2O3干预骨肉瘤细胞株MG-63后能诱导p53蛋白表达上调，增加的p53蛋白通过与IEX-1的启动子结合，

一个新C_2H_2型锌指蛋白的功能的初步研究

通过筛选人 18周胎脑cDNA文库 ,得到一条编码 332AA的全长新基因 .生物信息学研究表明 ,该蛋白质序列有 2个C2 H2 型锌指结构 ,其中 1个锌指结构有RNA binding蛋白特异锌指的特征 .虽然同源比较发现与多种蛋白质精氨酸N端转甲基酶 (proteinarginineN methyltransferase)有一定的同源性 ,但新锌指蛋白不含转甲基酶的活性功能区域 ,属功能未知的基因 .利用基因芯片研究功能未知基因的表达是一种较好的手段 ,通过代谢增强剂PMA(phorbolmyristateacetate)刺激培养的血管内皮细胞 ,观察细胞受激活后新锌指蛋白基因的表达变化 ,结果表明新基因表达量提高了 11倍以上 ,证实新基因属内皮细胞的极早期应答基因 (Immediateearlyre sponsegene ,ERG) .