早期生长反应-1蛋白和第10号染色体缺失的磷酸酶张力蛋白同源物基因在老年垂体瘤中的表达及其临床意义

目的探讨早期生长反应(Egr)-1蛋白和第10号染色体缺失的磷酸酶张力蛋白同源物基因(PTEN)在老年垂体瘤中的表达和意义。方法回顾性收集25例病理学诊断为非侵袭性垂体瘤,10例诊断为侵袭性垂体瘤的老年患者垂体瘤病理组织学样本及35例正常垂体组织标本。免疫组化法SP法检测Egr-1和PTEN在老年垂体瘤中的表达,并分析其意义。结果 35例老年性垂体瘤患者组织标本Egr-1和PTEN水平明显增高,与健康垂体组织差异具有统计学意义(P<0.05);侵袭性垂体瘤中Egr-1水平明显高于非侵袭性垂体瘤(P<0.05);与非侵袭性垂体瘤相比,侵袭性垂体瘤PTEN的表达明显降低(P<0.05)。结论 Egr-1和PTEN两者联合检测对评价老年垂体瘤的预后有重要作用。

转化生长因子β1和即刻早期基因及p27在中耳胆脂瘤上皮中的表达

目的 研究转化生长因子 β1(transforminggrowthfactor β1,TGF β1)、即刻早期基因 (c fos)、周期素依赖性激酶抑制蛋白 p2 7在中耳胆脂瘤上皮中的表达及相互之间的关系 ,探讨其表达对胆脂瘤侵袭能力的影响。方法 应用免疫组化链霉菌抗生物素蛋白 过氧化酶染色法检测TGF β1、c fos和 p2 7在 31例胆脂瘤上皮、11例胆脂瘤患者外耳道上皮和 10例正常外耳道上皮中的表达 ,应用计算机图像分析系统对其阳性表达进行定量分析。结果 TGF β1和c fos在胆脂瘤上皮中表达阳性率分别为 87 1%和 83 9% ,与胆脂瘤患者外耳道上皮和正常外耳道上皮相比表达差异有显著性。而p2 7在胆脂瘤上皮和外耳道上皮组上皮中均未见阳性表达。胆脂瘤上皮中c fos与TGF β1表达无相关性 (r =0 339,P =0 331) ;胆脂瘤侵袭能力与c fos表达有高度显著相关关系 (r =- 0 96 5 ,P <0 0 1) ,与TGF β1表达也有高度相关关系 (r =- 0 4 0 6 ,P <0 0 1)。 结论 即刻早期基因c fos在胆脂瘤中表达显著增强 ,且与胆脂瘤的侵袭能力有高度显著相关性 ,提示高c fos表达是胆脂瘤高增殖特征的因素之一。TGF

早期生长反应基因1在急性胰腺炎肝脏损害机制中的作用

目的研究早期生长反应基因1(Egr-1)在急性胰腺炎肝脏损害机制中的作用。方法24只雄性Wistar大鼠随机分为4组,分别用生理盐水,1%、3%及5%牛磺胆酸钠溶液进行相应处理,观察各组大鼠肝组织Egr-1免疫组化染色结果并进行胰腺病理评分,检测血清AST、LDH及TNF-α和IL-1β水平。从正常Wistar大鼠分离培养肝细胞,观察原代培养肝细胞在TNF-α刺激及PD98059预处理后Egr-1mRNA表达情况。结果肝组织Egr-1表达与急性胰腺炎肝损害程度呈正相关,且原代培养肝细胞Egr-1mRNA表达水平与肝细胞损害程度呈正相关。结论Egr-1可能参与急性胰腺炎肝损害过程,并且其作用机制部分依赖于细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)。

CKIP-1对小鼠颅颌面软硬组织生长发育的影响

目的探讨酪蛋白激酶2相互作用蛋白1(the casein kinase 2 interacting protein-1,CKIP-1)基因对颅颌面部软硬组织的影响,为颅颌面相关疾病的机制研究和治疗提供基础。方法 6月龄雄性CKIP-1基因敲除小鼠(KO)作为实验组,野生型小鼠(WT)作为对照组,用Micro-CT对小鼠颅颌面部硬组织(顶骨、鼻骨、切牙、磨牙)的骨量进行分析,另外用HE染色和甲苯胺蓝染色分析颌面部软组织(鼻软骨、唇黏膜、舌)的组织形态差异。结果 CKIP-1基因可负调控小鼠颅颌面骨松质骨的骨量及牙齿的牙本质矿化,相较WT小鼠,KO小鼠的顶骨板障层厚度增加93%,而皮质骨未见明显差异;鼻骨松质骨厚度增加160%,皮质骨无显著差异;牙釉质厚度未见异常,但牙髓腔变小,牙本质厚度增加48%;HE及甲苯胺蓝染色分析发现KO小鼠的鼻翼软骨板厚度增加57%,并发现局部出现异常骨化;唇黏膜角化层增厚170%;舌肌肌纤维直径增加45%。结论 CKIP-1基因对小鼠颌面部多种软硬组织的生长发育均有不同程度的影响。

灸法早期干预对5XFAD转基因小鼠β淀粉样蛋白_(1-40)表达的影响

目的探讨灸法早期干预对阿尔茨海默病模型(AD)小鼠脑内Ab_(1-40)的影响,对艾灸防治AD的作用机制进行探讨。方法 PCR法鉴定转基因AD传代小鼠的基因表型,选取1.5月龄雌性转基因阳性Tg6799小鼠随机分为模型组9只和治疗组8只,同龄、同背景的C57BL/6J野生型雌性小鼠9只为正常组。治疗组进行双侧心俞、肾俞麦粒灸治疗,治疗结束后,应用免疫组化法检测小鼠额叶皮层及海马区Ab_(1-40)的表达水平。结果与模型组比较,治疗组小鼠大脑额叶皮层和海马区Ab_(1-40)表达明显减少(P<0.01,P<0.05)。结论艾灸疗法早期干预可减少AD模型小鼠脑内Ab_(1-40)的表达,延缓AD病理过程的进展。

急性胰腺炎大鼠肺组织与肺泡巨噬细胞早期生长反应基因-1的表达

目的:研究观察早期生长反应基因-1 (EGR-1)在急性胰腺炎(AP)大鼠肺组织与原代培养肺泡巨噬细胞(AM)中表达的作用.方法:将♂Wistar大鼠40只,随机均分为4组,分别于胆总管内逆行注入生理盐水或不同浓度牛磺胆酸钠溶液.3 h后处死动物,取血分离血清,并剪取胰腺及肺组织.检测血清TNF-α和IL-1β水平,胰腺组织病理评分,肺组织湿质量/干质量比,并对肺组织进行EGR-1免疫组化染色.原代培养AM分成4组,分别采用不同浓度胰弹性蛋白酶进行刺激,免疫细胞化学染色法检测EGR-1在AM的表达,并检测培养液中TNF-α和IL-1β浓度.RT-PCR分别检测AM,EGR-1,TNF-α,IL-1βmRNA表达.结果:肺组织EGR-1表达随AP病情加重而呈增强趋势,并与血清TNF-α和IL-1β水平、胰腺组织病理评分、肺组织湿质量/干质量比均呈显著正相关(r=0.63,0.58,0.59,0.61,P<0.01)AM中EGR-1蛋白.mRNA表达程度与TNF-α和IL-1β蛋白(r=0.64、0.51,P<0.01)以及mRNA水平均呈显著正相关(r=0.62,0.59,P<0.01).结论:EGR-1可能在AP并发肺损伤中起重要作用,其机制可能与其介导炎性细胞因子生成有关.

早期生长反应基因-1在急性胰腺炎大鼠肝损伤机制中的作用研究

目的研究早期生长反应基因-1(Egr-1)在急性胰腺炎肝脏损伤机制中的作用。方法24只雄性Wistar大鼠随机均分为4组,分别胆管内注入生理盐水或不同浓度牛磺胆酸钠溶液,观察各组大鼠肝组织Egr-1免疫组化染色结果并进行胰腺病理评分,检测血清AST、LDH及TNF-α和IL-1β水平。从正常Wistar大鼠分离培养肝细胞,观察原代培养肝细胞在TNF-α刺激后Egr-1蛋白表达情况。结果肝组织Egr-1表达与急性胰腺炎肝损伤程度呈正相关,且原代培养肝细胞Egr-1蛋白表达水平与肝细胞损害程度呈正相关。结论Egr-1可能参与急性胰腺炎肝损伤过程,并且其作用机制部分依赖于细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)。

人巨细胞病毒即刻早期蛋白1对白血病蛋白致癌基因结构域的作用研究进展

白血病蛋白致癌基因结构域是间期细胞核内的亚核结构域,是DNA病毒入侵、转录及复制的关键部位,其完整性对病毒感染至关重要。早幼粒细胞性白血病蛋白是白血病蛋白致癌基因结构域的主要蛋白,负责维持其他白血病蛋白致癌基因结构域蛋白的正确定位。为DNA肿瘤病毒的人巨细胞病毒即刻早期蛋白可靶向定位白血病蛋白致癌基因结构域,并使早幼粒细胞性白血病蛋白从白血病蛋白致癌基因结构域移出,从而破坏其完整性。研究病毒对白血病蛋白致癌基因结构域的作用有助于阐明该类病毒与细胞转化和肿瘤发生的联系。

胃癌组织的细胞早期凋亡与Bcl-2蛋白、PAI-1活性的研究

目的 研究不同胃癌组织中的细胞凋亡与侵袭转移的相关性。方法 收集 4 1例胃癌新鲜组织 1.0cm3大小 ,分离单细胞悬液 ,流式细胞仪检测早期凋亡指数 (EAI) ;免疫组化SABC法检测邻近胃癌组织中Bcl- 2蛋白的表达 ;- 80℃冰箱冻存后成批匀浆 ,检测上清液的PAI- 1比活性。结果 EAI在弥漫型胃癌与肠型胃癌以及有无淋巴结转移中差异显著 [(18.2± 3.5 ) %vs (11.4± 3.7) % ,P <0 .0 0 1;(14 .2± 3.9) %vs (2 0 .7± 3.5 ) % ,P <0 .0 0 1) ]。肠型胃癌 84 % (11 13)Bcl- 2阳性 ,弥漫型胃癌中只有 36 % (12 2 8)阳性 ,差异显著 (P <0 .0 5 )。淋巴结转移的胃癌中 5 9% (17 2 9)Bcl- 2阳性 ,无淋巴结转移的 33% (4 12 ) ,无显著性差异 (P >0 .0 5 )。弥漫型胃癌的PAI- 1比活性高于肠型胃癌组织 [(0 .76± 0 .12 )vs (0 .5 4± 0 .12 )Au ml,P <0 .0 1) ],有淋巴结转移者高于无淋巴结转移者 [(0 .71± 0 .18)vs (0 .5 2± 0 .18)Au ml,P <0 .0 5 ) ]。结论 EAI与Bcl- 2是肿瘤组织中细胞早期凋亡的指标 ,两者在不同组织和有无淋巴结转移中有重要意义 ;其与侵袭转移指标PAI- 1无直接的相关性。

转基因抗虫水稻HD1不同生长发育阶段cry1C*基因表达量

以水稻‘空育131’为受体,利用根瘤农杆菌介导法,创制了转cry1C*基因的抗虫水稻HD1-1等独立系。为了研究水稻HD1-1等在田间生长发育过程中cry1C*基因表达量及糙米Bt蛋白含量,将水稻HD1-1等独立系种植在田间,利用RT-qPCR方法检测分蘖期、抽穗期和灌浆期叶片、茎鞘及幼穗的cry1C*基因mRNA表达量,同时利用酶联免疫吸附法(ELISA)检测各器官及糙米Bt蛋白含量。分析cry1C*基因表达量不同生长发育阶段间的关系,分析糙米Bt蛋白含量与生长发育时cry1C*基因表达量的关系。结果显示,不同水稻独立系cry1C*基因表达量及糙米Bt蛋白含量明显不同,叶片、茎鞘及幼穗中cry1C*基因表达量不同生长发育阶段间往往呈正相关,cry1C*基因mRNA表达量和对应的Bt蛋白含量呈极显著的正相关,糙米Bt蛋白含量和各生长发育阶段各器官cry1C*基因表达量存在正相关趋势。水稻HD1 cry1C*基因表达量在不同生长发育阶段间及其和糙米Bt蛋白含量间呈正相关或正相关趋势。cry1C*基因转录水平越高,Bt蛋白含量越高。

APOE和SORL1基因联合检测对阿尔兹海默病患者早期诊断的意义

目的探讨载脂蛋白E(APOE)和分拣蛋白相关受体L1基因(SORL1)基因联合检测对阿尔兹海默病(AD)患者早期诊断的临床意义。方法选择2017年10月-2018年10月我院神经内科收治的AD患者118例作为研究组,另选90例同期健康体检者作为对照组,采用qRT-PCR检测两组外周血白细胞中APOE和SORL1基因相对表达量,比较APOE、SORL1基因对AD联合诊断与单独诊断的效果。结果对照组APOE基因平均相对表达量明显低于研究组,差异有统计学意义(P<0.05);对照组APOE基因平均相对表达量明显低于研究组,差异有统计学意义(P<0.05);APOE、SORL1基因联合诊断效果明显优于单独诊断效果,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 APOE和SORL1基因联合检测可互补二者单独应用时的不足,在阿尔兹海默病患者早期诊断中具有较好的应用价值,值得推广。

小鼠闪烁光诱导眼视网膜中Egr-1基因的表达及作用

背景 闪烁光可以诱导轴性近视的发生,但是参与近视发生的机制尚不明确.早期生长反应基因（Egr-1）作为即早基因的一种,对视觉刺激反应灵敏,但其对近视发展的作用值得研究. 目的 探讨Egr-1基因在闪烁光诱导（FL）眼小鼠视网膜中的动态表达及意义,并与形觉剥夺（FD）眼对照.方法 采用随机数字表法将150只28日龄健康C57 BL/6J（B6）小鼠随机分为正常对照组、FD组和FL组.FD组小鼠使用半透明塑料眼罩遮盖右眼2周,而FL组小鼠用频率为2 Hz的闪烁光照射2周,以建立近视眼模型,然后2个组小鼠均在正常环境中喂养1周.分别于造模前、造模1h、1d、1周、2周时及造模后1周使用红外偏心验光仪和动物专用A型超声仪测量所有小鼠右眼的屈光度及眼轴长度.分别于造模前后各时间点任意处死各组10只小鼠,分离视网膜组织,分别采用Western blot法和免疫组织化学法检测Egr-1蛋白在小鼠视网膜中的相对表达量和定位,采用荧光免疫化学法检测小鼠视网膜中Egr-1标志物的表达,采用逆转录PCR（RT-PCR）法检测小鼠视网膜中Egr-1 mRNA的表达.结果 造模2周时,FL组小鼠的屈光度为（0.32±0.14）D,屈光度改变小于FD组小鼠的近视（-0.66±0.43）D,差异有统计学意义（t=6.78,P=0.00）.RT-PCR检测显示,造模1h时,FD组小鼠和FL组小鼠视网膜中Egr-1 mRNA的表达量分别为0.626±0.044和0.695±0.058,明显低于正常对照组的1.009±0.089,差异有统计学意义（t=14.81,P=0.01;t=9.15,P=0.03）,造模2周时均持续低于正常对照组,差异均有统计学意义（均P＜0.05）,而造模终止后1周FD组和FL组小鼠视网膜中Egr-1mRNA表达量明显高于正常对照组,差异有统计学意义（t=4.13,P=0.01;t=4.26,P=0.01）.Western blot检测显示,FD组和FL组小鼠视网膜中Egr-1蛋白相对表达量随造模后时间的延长逐渐下降,造模2周时最低,FD组比FL组下降更为明显,造模后1周Egr-1蛋白表达量升高,但仍低于正常对照组,差异均有统计学意义（t=6.32,P=0.00;t=5.45,P=0.01）.免疫组织化学检测显示,正常对照组Egr-1蛋白主要表达于视网膜神经节细胞层、内核层和感光细胞层,造模2周时FD组和FL组小鼠视网膜中Egr-1蛋白表达明显减弱,造模终止后1周Egr-1蛋白表达增强.免疫荧光检测显示,Egr-1标志物Neuron和蛋白激酶C（PKC）-α在正常小鼠神经节细胞和双极细胞均呈阳性表达.结论 FL诱导后小鼠眼屈光度向近视方向发展,视网膜中Egr-1基因的表达量随屈光度下降的程度而下调,这个动态变化过程与FD模型眼一致.

CCND1和CDK4基因多态性在早期乳腺癌诊断中的价值

目的探讨细胞周期蛋白D1(CCND1)和细胞周期蛋白依赖性激酶4(CDK4)基因多态性与早期乳腺癌发生的关系。方法选择2018年3月至2019年3月在我院就诊的56例早期乳腺癌患者为试验组,以同期体检未发现乳腺疾病的56例健康女性为对照组。采用聚合酶链式反应(PCR)和单链构象多态性(SSCP)相结合的方法对CCND1、CDK4基因进行种系筛选,并进行DNA序列分析。单因素非条件Logistic回归分析各突变类型与早期乳腺癌发生的关系。结果在CCND1基因中共筛选到6种突变类型,其中在外显子(exon 1)中观察到2个错义突变(Cys7Tyr和Val27Met)和1个沉默突变(Ala20Ala),在内含子(intron)1中观察到2个替换突变(1026 G>T和1030 G>T),在3'UTR区观察到1个替换突变(10811 C>T)。在CDK4基因中,共发现3种不同类型的突变,分别为exon 1有2个移码突变(4289delT和4532delG),intron 1有1个替换突变(5693T>A)。单因素非条件Logistic回归分析结果提示,上述各突变均与乳腺癌发生具有较强相关性(OR值均>1且P<0.05),突变能提高女性的乳腺癌患癌风险。月经初潮≤13岁的患者具有更高的CCND1基因的3'UTR:10811 C>T突变与CDK4基因的exon 1:4289delT突变风险(P<0.05)。相较于绝经年龄≥50岁的乳腺癌患者,绝经年龄<50岁的乳腺癌患者具有更高的CDK4基因的exon 1:4532delG突变率(P<0.05)。结论CCND1和CDK4基因突变与乳腺癌发病风险增加有关,可作为乳腺癌早期诊断和检测的生物标志物。

外源性Egr-1基因表达对食管癌细胞株Eca109细胞生长的影响

目的 检测Egr 1蛋白在食管癌细胞株Eca10 9中的表达。方法 采用免疫细胞化学法检测Egr 1蛋白在Eca10 9细胞中的表达 ,用脂质体基因转染法将真核表达载体PCMV Egr 1质粒导入Eca10 9细胞 ,经Westernblot和免疫细胞化学检测 ,Egr 1蛋白在转染的Eca10 9细胞中呈高表达。 结果 Eca10 9细胞的Egr 1蛋白表达阴性 ,当导入外源性Egr 1基因后 ,Egr 1蛋白表达阳性 ,表达Egr 1蛋白的Eca10 9细胞在形态上发生明显的变化 ,表现为细胞变扁 ,呈散在生长。 结论 Egr 1蛋白的表达在一定程度上能抑制Eca10

乳腺癌发生过程中p53、BRCA1、BRCA2、PTEN、Rb蛋白异常表达

目的探讨p53、BRCA1、BRCA2、PTEN、Rb基因蛋白异常表达在乳腺癌发生中的作用。方法选取同时存在浸润癌、导管内癌、不典型增生和单纯性增生的乳腺癌档案蜡块,应用免疫组化SP法检测p53、BRCA1、BRCA2、PTEN、Rb基因蛋白在各例的异常表达。结果(1)在24.3%(17/70)的乳腺癌及其癌旁不典型增生中检测到突变型p53蛋白表达,分别在2.9%(2/69)、6.3%(4/63)、5.1%(3/59)、5.4%(3/56)的乳腺癌及其癌旁不典型增生中分别检测到BRCA1、BRCA2、PTEN、Rb表达缺失。(2)在44.6%的病例同时检测到2种基因蛋白异常表达,在5.4%的病例同时检测到3种基因蛋白异常表达,在3.6%的病例同时检测到4种基因蛋白异常表达。结论(1)p53、BRCA1、BRCA2、PTEN、Rb蛋白异常表达可出现于乳腺癌发生的早期阶段,可能在乳腺癌发生过程中起作用。(2)多种抑癌基因的失活共同参与了乳腺癌的发生。

Egr-1基因转染对糖尿病小鼠肾脏炎症反应的影响

目的:观察Egr-1基因转染对糖尿病小鼠肾组织肿瘤坏死因子α(TNF-α)及细胞间黏附分子1(ICAM-1)表达的影响,探讨Egr-1在糖尿病肾病发病机制中的作用。方法:制备糖尿病小鼠模型,成模后随机选取10只作为糖尿病组,剩余40只每周1次经尾静脉分别注射空质粒、Egr-1表达质粒和Egr-1 siRNA质粒,并设立正常对照组。实验共4周,于第4周末收集各组小鼠肾组织标本,分别应用western blot和免疫组织化学染色测定肾组织中Egr-1、TNF-α和ICAM-1的表达;应用电镜观察肾小球超微结构的改变。结果:糖尿病小鼠肾组织Egr-1、TNF-α及ICAM-1表达增强,基底膜普遍增厚,系膜区基质增多,上皮细胞足突融合;Egr-1基因转染后上述变化趋势更加显著。siRNA质粒转染组上述变化较糖尿病组明显减轻。结论:Egr-1可上调TNF-α及ICAM-1表达,促进系膜细胞增殖及系膜外基质积聚,可能是加速肾小球硬化的可能机制之一。

转移抑制基因KiSS-1与人类肿瘤的研究进展

KiSS1是另一种新近发现的与肿瘤转移有关的肿瘤转移抑制基因,定位于染色体1q32～q41,由四个外显子构成,基因产物是G蛋白结合受体的内源性配体,KiSS1多肽能明显抑制肿瘤细胞的化学趋向性和侵袭性,并限制肿瘤细胞的迁移蠕动功能,表达于正常心脏、肝、肺、骨骼肌、肾组织和胰腺,而且在胎盘和脑观察到了高的表达。KiSS1基因对人类肿瘤转移有抑制作用,调节癌细胞的生长信号,调节肿瘤的生物行为方面有潜在的作用,KiSS1表达的缺失与肿瘤进展和临床结果相联系,而且其表达率提供了预后信息,对识别预后差的患者有预见性的价值,通过对其进一步研究,将为人类肿瘤的早期诊断、设计合理可行的治疗手段和转移的干预性治疗提供重要的线索和依据。

DPP4抑制剂西格列汀对ApoE基因敲除小鼠肾脏Egr-1及FN表达的影响

目的观察DPP4抑制剂西格列汀对Apo E基因敲除小鼠肾脏组织中早期生长反应因子-1(Egr-1)及纤连蛋白(FN)表达的影响。方法 8周龄雄性Apo E基因敲除小鼠12只,按随机数字表法分为西格列汀干预组(sig+apo E-/-组)和实验组(apo E-/-组),每组6只,另取C57BL小鼠6只作为正常对照组(control组)。高脂饮食结合药物饲养16周后,行腹腔耐量实验,观察血糖水平,后收集24 h尿标本,用ELISA法检测24 h尿蛋白,随后取血并处死各组小鼠,血清学检测血脂变化,取肾组织行实时荧光定量PCR及免疫印迹(Western blotting),检测肾组织中Egr-1及FN的m RNA和蛋白表达水平。结果血脂检测显示,实验组和西格列汀干预组小鼠甘油三酯、胆固醇、低密度脂蛋白、极低密度脂蛋白均显著高于正常对照组(P<0.05),实验组和西格列汀干预组间上述指标无统计学差异(P>0.05),而高密度脂蛋白在西格列汀干预组显著高于实验组(P<0.001)和正常对照组(P<0.001)。IPGTT结果显示,apo E-/-组、sig+apo E-/-组和对照组3组间空腹血糖水平均没有显著差异(P>0.05)。24 h尿液检测结果显示:apo E-/-组24 h尿白蛋白排泄量明显高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.01);西格列汀治疗后,sig+apo E-/-组小鼠24 h尿白蛋白较apo E-/-组显著降低,差异具有统计学意义(P<0.01)。Real-time PCR和Western blotting检测显示:实验组肾皮质中,Egr-1及FN的m RNA水平和蛋白水平均高于正常对照组,而与实验组相比,西格列汀能显著降低Egr-1及FN的m RNA和蛋白水平。结论西格列汀可能通过调控Egr-1的表达从而下调FN,从而达到肾脏保护作用。