三七总皂苷抗心肌细胞肥大与成纤维细胞生长因子诱导早期反应蛋白14的关系

目的研究三七总皂苷(panax notoginseng saponin,PNS)抗心肌细胞肥大是否与成纤维细胞生长因子诱导早期反应蛋白14(fibroblast growth factor-inducible 14,Fnl4)的表达变化相关。方法分离原代新生大鼠心肌细胞,去甲肾上腺素(Norepinephrine,NE)处理原代细胞建立心肌细胞肥大模型。鬼笔环肽染色观察细胞形态,实时定量聚合酶链反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,q RT-PCR)检测肥大相关基因和Fn14 m RNA表达水平,Western blot检测Fn14蛋白表达水平。结果与对照组比较,NE处理组细胞表面积增大、细胞肥大相关基因m RNA表达水平明显升高,Fn14 m RNA和蛋白表达升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。与单独NE组比较,NE和PNS同时处理组的细胞表面积减小、肥大相关基因m RNA表达水平显著下降,差异有统计学意义(P<0.05)。PNS对Fn14 m RNA表达水平影响不大,但是却明显的促进Fn14蛋白表达(P<0.05)。结论 PNS能够抗NE诱导的心肌细胞肥大,同时能够影响Fn14的表达。PNS抗心肌肥大可能通过Fn14起作用。

靶向性抗肿瘤融合蛋白-表皮生长因子-腺病毒早期转录区4第4编码蛋白在细胞内的转运及对胞外信号调节激酶磷酸化的影响

目的探讨经表皮生长因子受体介导进入肿瘤细胞的融合蛋白表皮生长因子-腺病毒早期转录区4第4编码蛋白(EGF-E4orf4)在细胞内的转运及对胞外信号调节激酶(ERK)磷酸化的影响。方法采用间接免疫荧光结合激光共聚焦显微镜观察融合蛋白在MDA-MB-231和BGC823细胞中的转运和代谢特点,Western blot检测融合蛋白引起的细胞内ERK磷酸化水平的改变。结果融合蛋白可在细胞内累积,向细胞核周围聚集,并与细胞早期内体和晚期溶酶体共定位;融合蛋白能快速触发细胞内ERK发生磷酸化,磷酸化水平在10 min时最强,之后逐渐回落至刺激前水平,活化ERK的能力较表皮生长因子弱。结论融合蛋白EGF-E4orf4在细胞内经内体-溶酶体途径发生缓慢降解;在MDA-MB-231和BGC823细胞中,融合蛋白的作用特点存在明显差异,可能是导致融合蛋白对二者抑瘤率不同的原因之一。

肿瘤坏死因子样凋亡微弱诱导剂在心脏重塑及其相关疾病中作用的研究进展

心力衰竭的病理生理基础是心脏重塑,它能造成心肌细胞增殖、肥大、坏死、凋亡、自噬、间质纤维化、心室扩张和收缩功能不全等结构和功能的改变。研究表明肿瘤坏死因子样凋亡微弱诱导剂(TWEAK)通过与它的受体成纤维细胞生长因子诱导早期反应蛋白14(Fn14)结合参与了这一过程。

肿瘤坏死因子样弱凋亡诱导因子及其受体对肝星状细胞迁徙的影响

目的探讨肿瘤坏死因子样弱凋亡诱导因子(TWEAK)及其受体成纤维细胞生长因子诱导早期反应蛋白14(Fn14)对肝星状细胞迁徙的影响及其机制。方法人源性肝星状细胞株LX-2分别予细胞因子TWEAK处理、特异性下调Fn14(Fn14 siRNA)后加入TWEAK处理,Transwell小室检测肝星状细胞迁徙;real-time PCR及Western Blot检测基质金属蛋白酶(MMP)9的表达量。计量资料两组间比较采用独立样本t检验,多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用LSD-t检验。结果 TWEAK处理组较正常LX-2细胞迁徙能力增强[(105±8)个vs(164±17)个,t=5.287,P<0.01];下调Fn14后加入TWEAK处理的LX-2细胞迁徙数目较阴性对照组减少[(122±9)个vs(58±7)个,t=9.836,P<0.01];TWEAK处理LX-2细胞后,MMP9的mRNA及蛋白水平增加(P值均<0.05),且存在时间依赖性;下调Fn14并加入TWEAK后LX-2细胞MMP9的mRNA及蛋白表达量减少,与单纯TWEAK处理的LX-2细胞组比较,差异有统计学意义(t=5.358,P<0.01)。结论 TWEAK可通过其受体Fn14上调MMP9促进肝星状细胞迁徙,阻断该通路可能成为治疗肝纤维化的一个潜在的新靶点。

PTEN与H_2O_2关系的研究

PTEN是一种抑癌基因,通过负调控PI3K/AKT途径调节细胞增殖、存活、生长与迁移等。过氧化氢(H2O2)通过在活性位点半胱氨酸残基Cys124与Cys71之间形成二硫键,可逆地氧化灭活PTEN。H2O2还可通过Egr-1在转录水平调控PTEN。因此可认为H2O2作为细胞内信使,参与PTEN信号转导。

地塞米松对哮喘小鼠肺组织中TWEAK及其受体Fn14表达的调节作用

目的:探讨地塞米松对哮喘小鼠模型肺组织中肿瘤坏死因子样弱凋亡诱导因子(TWEAK)及受体成纤维细胞生长因子诱导的早期反应蛋白14(Fn14)表达的调节作用。方法:采用卵清蛋白致敏方法建立经典哮喘模型。将36只雌性BALB/c小鼠,随机分为对照组、哮喘组、地塞米松组,每组12只。HE染色评估各组小鼠气道炎症程度;采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测各组肺组织TWEAK、Fn14mRNA表达水平;采用免疫组化方法检测各组肺组织TWEAK、Fn14蛋白表达水平。结果:哮喘组小鼠肺组织TWEAK、Fn14 mRNA水平高于对照组(P<0.01),地塞米松组TWEAK、Fn14 mRNA水平低于哮喘组(P<0.01)。TWEAK、Fn14蛋白的表达水平哮喘组较对照组明显升高(P<0.01),地塞米松组表达量较哮喘组明显降低(P<0.01)。结论:地塞米松可抑制哮喘小鼠肺组织中TWEAK及Fn14表达,从而减少气道炎症反应。

TWEAK促进大鼠心肌成纤维细胞增殖和胶原合成

目的探讨肿瘤坏死因子样凋亡微弱诱导剂(TWEAK)对大鼠心肌成纤维细胞(CFs)增殖和胶原合成的影响。方法用胰酶消化法培养新生Wistar大鼠CFs,加入重组人TWEAK(rhTWEAK)干预48 h,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定细胞增殖,qRT-PCR检测Ⅰ型和Ⅲ型胶原mRNA,Western blot检测Ⅰ型胶原蛋白表达。结果 rhTWEAK作用后CFs的细胞数目明显增加,Ⅰ型和Ⅲ型胶原mRNA表达上调,同时Ⅰ型胶原蛋白表达显著增强。结论 TWEAK具有促进大鼠心肌成纤维细胞增殖和胶原合成的作用。

TWEAK及其受体Fnl4的基础研究进展

肿瘤坏死因子样凋亡微弱诱导荆（TNF—like weak inducer of apoptosis，TWEAK）作为肿瘤坏死因子配体超家族的新成员，具有广泛的生物学活性，在诱导细胞凋亡，促进细胞增殖和血管形成，提高细胞侵袭力，刺激黏附分子及金属基质蛋白酶表达，诱导炎症因子表达等方面发挥重要作用。本文就TWEAK及其受体成纤维细胞生长因子诱导的早期反应蛋白14（Fibmblast growth factor—inducible immediate—eady response protein14）的结构特征、组织及细胞分布、作用机制、生物学效应，研究方法等的目前研究进展作一综述。

Fn14在自发性高血压大鼠心肌纤维化中的作用及培哚普利的干预研究

目的探讨成纤维细胞生长因子诱-导早期反应蛋白14(Fn14)在自发性高血压大鼠心肌纤维化中的作用及培哚普利的干预结果。方法18只6周龄雄性自发性高血压大鼠(SHR)随机分为高血压组(SHR-C组)和培哚普利组(SHR-P组),每组9只;另取9只同龄雄性Wistar Kyoto大鼠作为正常组(WKY组),SHR-P组给予培哚普利治疗24周。实验前后测量室间隔及左室后壁背向散射积分平均强度(AII)、校正的声学强度(CAI)与峰峰强度(PPI)等超声心动图指标。24周后,处死大鼠,测量心脏重量指数(HWI),masson染色检测胶原的表达,免疫组化法检测Fn14的表达。结果30周龄时,与WKY组相比,SHR-C组HWI显著升高、Fn14表达增高(P均<0.01),室间隔及左室后壁AII、CAI明显增大(P均<0.01),PPI明显减小(P<0.01);与SHR-C组相比,SHR-P组HWI显著降低、Fn14表达降低(P均<0.01),室间隔及左室后壁AII、CAI减小(P<0.05),PPI增大(P<0.05)。Fn14表达量与胶原纤维的量呈正相关(r=0.954,P<0.01)。结论Fn14可能参与SHR心肌纤维化,培哚普利可能通过抑制其表达来减轻心肌纤维化。