加味芍甘附子汤对早期生长反应蛋白2调控胶原诱导性关节炎老年大鼠炎症的影响

目的观察加味芍甘附子汤通过早期生长反应蛋白2(early growth responseprotein 2,Egr2)调控胶原诱导性关节炎(collagen induced arthritis,CIA)老年大鼠炎症反应的作用。方法选用清洁Wistar大鼠96只,其中青年鼠与老年鼠各48只。随机将老年鼠与青年鼠分为正常组、模型组、对照组、中药组,每组各12只。正常组常规饲养,其余3组复制CIA大鼠模型后分别给予生理盐水、雷公藤多苷片及加味芍甘附子汤灌胃4周,每周评价各组大鼠关节炎症指数(arthritis index,AI);4周后苏木精—伊红染色(hematoxylin-eosin,HE)检测踝关节组织的病理变化;RT-qPCR检测大鼠膝关节滑膜Egr2 mRNA表达;Elisa法测定外周血白细胞介素-17A(interleukin 17A,IL-17A)、γ干扰素(interferonγ,IFN-γ)、白细胞介素-6(interleukin 6,IL-6)表达。结果(1)各组大鼠AI评价:给药期间,青年鼠和老年鼠的AI评分均降低,且在四周后中药组的评分最低(P<0.05),而老年鼠和青年鼠的组间比较差异无统计学意义。(2)HE检测大鼠踝关节组织的病理变化:四周后取材,踝关节病理学提示除正常组外,各组均有滑膜组织增生及炎性细胞浸润,老年鼠模型组的炎性细胞浸润明显重于青年鼠模型组,且中药组均明显轻于模型组。(3)RT-qPCR检测大鼠膝关节滑膜Egr2 mRNA表达:对照组和中药组的大鼠膝关节滑膜Egr2 mRNA表达高于模型组(P<0.05),老年鼠模型组的大鼠膝关节滑膜Egr2 mRNA表达明显低于青年鼠模型组(P<0.05),而老年鼠中药组的表达明显高于青年中药组(P<0.05)。(4)Elisa法测定大鼠外周血IFN-γ、IL-17A、IL-6的表达:老年鼠中药组IL-17A的表达低于模型组与对照组(P<0.05);青年鼠中药组IL-17A的表达低于模型组(P<0.05),但高于对照组(P<0.05)。老年鼠模型组及对照组外周血IL-17A的表达均高于青年鼠相应组别(P<0.05),而老年鼠中药组的表达低于青年鼠中药组(P<0.05)。结论(1)老年CIA大鼠Egr2的低表达为参与炎症过程可能因素之一;(2)加味芍甘附子汤可能通过对Egr2的调控改善CIA老年鼠关节滑膜炎症,还需进一步开展机制研究。

早期生长反应蛋白2在糖尿病神经病变大鼠坐骨神经中的表达

目的:观察早期生长反应蛋白2(early growth response protein 2,EGR2)在糖尿病神经病变大鼠坐骨神经中的表达情况。方法:60只大鼠取6只作为对照组,另外54只大鼠腹腔注射链脲佐菌素(streptozotocin,STZ),监测大鼠血糖。23只大鼠形成糖尿病,其中有5只大鼠形成糖尿病神经病变。测定各组大鼠坐骨神经传导速度,每周测定一次尾静脉血糖,取小段坐骨神经作横断面电镜检查。PCR和蛋白质印迹检测坐骨神经EGR2的表达情况。结果:EGR2 mRNA及蛋白表达在糖尿病神经病变组明显高于在糖尿病组。结论:EGR2在糖尿病神经病变的大鼠坐骨神经表达明显升高,可能是通过IL6/gp130/STAT3途径导致的。

MicroRNA-20a对胃癌细胞生长与迁移的影响及其机制

目的:探讨microRNA-20a(miR-20a)对胃癌细胞的生长和迁移的影响及其相关分子机制。方法:通过qRT-PCR方法检测正常胃黏膜上皮细胞(gastric epithelial cell 1,GES-1)和胃癌细胞系MKN45,SGC7901和NUGC-3中miR-20a的相对表达水平;选取SGC7901细胞为代表,MTT法和克隆形成能力实验评估miR-20a mimic和inhibitor对细胞生长能力的影响;Transwell实验观察miR-20a的mimic和inhibitor对细胞迁移能力的影响;qRT-PCR检测miR-20a靶基因早期生长反应蛋白2(early growth reactive protein 2,EGR2)在mRNA水平的表达。结果:MiR-20a在胃癌细胞中的表达量较GES-1细胞显著增加;MTT实验、克隆形成实验和Transwell实验显示miR-20a mimic促进SGC7901细胞的生长和迁移,而miR-20a inhibitor抑制生长和迁移。MiR-20a mimic抑制EGR2 mRNA表达,而miR-20a inhibitor促进EGR2 mRNA表达。结论:MiR-20a可促进胃癌细胞生长和迁移能力,其分子机制可能与下调EGR2 mRNA的表达相关。

芍甘附子汤加味对CIA寒证大鼠Egr2/Egr3及其信号通路表达的影响

目的:研究芍甘附子汤加味对胶原诱导性关节炎(CIA)寒证大鼠Egr2/Egr3及其信号通路表达的影响,并探讨Egr2/Egr3在类风湿关节炎(RA)发病中的作用。方法:110只雌性Wistar大鼠被随机分为7组:正常组、模型组、对照组[甲氨蝶呤(MTX)组、雷公藤组]和芍甘附子汤加味组(大、中、小剂量组)。正常组常规饲养,其余各组在复制CIA寒证大鼠模型后分别MTX、雷公藤多苷片及芍甘附子汤加味(大、中、小剂量)灌胃,干预4周,每周评价各组大鼠炎症指数。4周后测定ELISA法检测大鼠外周血IL-6、TGF-β表达;RT-q PCR检测大鼠膝关节滑膜Egr2/Egr3 m RNA、SOCS1/SOCS3 m RNA、STAT1/STAT3 m RNA表达。实验结束后测定大鼠脏器指数。结果:各组大鼠AI评分均呈下降趋势,但各组间差异无统计学意义。HE染色提示各给药组及模型组存在不同程度的滑膜增生、炎性细胞浸润以及骨侵蚀等,各给药组较模型组均有所减轻,模型组和各给药组脾脏指数显著高于正常组(P<0.05),大、中剂量组胸腺指数较模型组显著下降(P<0.05)。大鼠滑膜组织模型组和各治疗组Egr2/Egr3 m RNA、SOCS1/SOCS3 m RNA相对表达量较正常组升高,其中芍甘附子汤中剂量组Egr2/Egr3 m RNA表现尤为突出(P<0.05)。CIA造模后大鼠外周血TGF-β、IL-6水平均显著高于正常组水平,各药物干预组治疗4周后较模型组均有下降尤以TGF-β更为明显。结论:Egr2/Egr3参与了RA发病过程的调控环节,对于疾病的早期诊断及早期干预有提示作用。

慢性坐骨神经嵌压伤模型小鼠Cav3.2对Egr2表达的影响

目的探讨慢性坐骨神经嵌压伤(CCI)模型小鼠背根神经节(DRG)电压门控性钙通道3.2(Cav3.2)变化对早期生长反应蛋白2(Egr2)表达的影响。方法 80只C57BL/6小鼠随机分为四组:阴性对照(A)组、CCI模型(B)组、米贝地尔干预(C)组和细胞外调节蛋白激酶(ERK)抑制剂U0126干预(D)组。B、C、D组行坐骨神经嵌压手术建立CCI模型。行为学检测机械痛觉和热痛觉,Western blot测定DRG中Cav3.2、总ERK、磷酸化ERK(pERK)和Egr2蛋白水平,RT-PCR测定DRG中Egr2基因水平。结果与A组相比,B组手术后出现机械痛觉超敏和热痛觉过敏(P<0.05)。C、D组机械痛觉和热痛觉均较B组不同程度缓解(P<0.05)。Cav3.2、pERK和Egr2蛋白表达呈时间依赖改变。与A组相比,C组pERK蛋白水平下降(P<0.05),C、D组Egr2蛋白和基因水平下降(P<0.05)。结论在CCI模型小鼠的慢性坐骨神经损伤中,ERK信号通路可能是Cav3.2钙通道调控Egr2蛋白和基因表达的重要途径之一。

腓骨肌萎缩症1D一家系的临床、电生理和基因研究

目的 观察腓骨肌萎缩症（CMT） 1D家系的临床、电生理和基因的特点.方法 先证者为53岁男性,15岁发现高弓足,约37岁出现双下肢无力,50岁左右双下肢无力加重伴麻木.其女儿青少年期出现高弓足,18岁出现双下肢无力.对先证者进行电生理检查和基因二代测序分析.结果 先证者电生理检查提示周围神经脱髓鞘性改变,脑干听觉诱发电位提示双侧Ⅰ波分化差,Ⅲ、V波潜伏期延长,但双侧Ⅲ-V峰间潜伏期正常.先证者及其女儿存在早期生长反应蛋白2基因Arg381 Cys突变.结论 Arg381 Cys突变所致CMT1D可在青少年期以下肢无力为首发症状,临床症状较轻,病情进展缓慢.