早熟凝缩染色体(PCC)与荧光原位杂交(FISH)技术的结合

为便于对间期细胞染色体结构异常的识别,作者开展了对早熟凝缩染色体技术(PCC)与荧光原位杂交技术(FISH)二者相互结合起来的研究。作为模型,人外周血细胞在与诱导细胞——分裂期中国仓鼠孵巢细胞(CHO)融合后,形成了早熟凝缩的染色体。当使用人类全基因组DNA为探针做原位杂交时,仅见由人外周血细胞形成的PCC上被染上阳性荧光信号,CHO细胞染色体阴性。在使用人Y染色体特异性DNA探针作原位杂交时,结果不仅在男性外周上细胞核上,而且在一条由胞核演变的早熟凝缩染色体上,获得了特异性阳性荧光杂交信号。这一方法拓展了间期细胞遗传学的研究深度。

Calyculin A诱导早熟染色体凝聚的电离辐射剂量效应曲线

以Calyculin A诱导早熟染色体凝聚(PCC)方法,探索G2/M-PCC细胞中PCC环用于分析电离辐射损伤程度的可行性,用0—20 Gy(剂量率为1 Gy/min)的60Coγ射线照射外周血,培养48 h并用Calyculin A诱导PCC。分析各剂量点G2/M-PCC指数、判断观察到的PCC环是否符合泊松分布,建立PCC环率与剂量之间的剂量效应曲线。结果发现,用Calyculin A可成功诱导人外周血淋巴细胞产生PCC,且G2/M-PCC指数随着剂量水平的增高而降低。除20 Gy剂量外,0—16 Gy各剂量点样品中PCC环的分布符合泊松分布。PCC环率随着剂量增加而增加,剂量-效应曲线可以拟合成y=0.0128x+0.0104直线方程,测得R2=0.9898(y为PCC-R率,x为剂量);二次多项式方程为y=0.00002x2+0.0085x+0.0011 R2=0.9996。由此可见,Calyculin A诱导淋巴细胞G2/M-PCC中的PCC环率可用于生物体电离辐射损伤程度测定。

Hep-2细胞的PCC研究

以Ｈｅｐ＿２ 细胞为材料研究早熟染色体浓集技术（ＰＣＣ） 结果表明：诱导细胞融合的条件包括使用ＰＥＧ作融合剂，并使用高ｐＨ 值的培养基。得到了Ｇ１ 期、Ｓ期、Ｇ２ 期的ＰＣ染色体。

不同早熟凝集染色体方法对^(60)Co γ射线照射的剂量-曲线影响的研究

目的研究早熟凝集染色体(PCC)方法学的常规法和改进后的方法对60Coγ射线剂量-效应曲线影响,为事故应急选择快速和准确的生物剂量估算方法。方法取3名23～28岁的男性肘静脉血,在60Coγ射线照射(01、.0、5.0、10.0、15.02、0.0 Gy,吸收剂量率0.635 Gy/min)的条件下,以常规PCC培养方法为对比;比较2种方法(常规法和改进法)的50 h和60 h的2个培养时间所产生剂量-效应曲线的关系;以另一实验室照射10.0 Gy(吸收剂量率0.670 Gy/min)所产生的PCC环结果,用上述制作的剂量-曲线估算剂量作验证。结果①常规50 h培养方法15.0、20.0 Gy点所获PCC细胞数不能满足统计学要求,常规方法60 h、改进法50和60 h的3个培养方法收获的细胞数均可满足统计学要求,故后3个方法均取作剂量曲线;②后3个培养方法的PCC环与受照剂量的相关系数其系数间相当接近(均0.996以上、均P<0.01),直线回归方程成立,相关指数亦相当接近,剂量-效应拟合均为线性模式,回归系数间差异无统计学意义(P<0.05),回归直线的形态基本重叠;③验证:本研究的3条剂量-曲线估算受照10.0 Gy的结果误差均≤8%,均符合生物学实验一般允许的15%。结论本研究的3个方法制作的3条曲线均可用于大剂量电离辐射损伤的生物剂量估算,但以改进法的50 h培养速度快,可作为事故应急首选的方法。