阿尔茨海默病患者早老素-1基因5号外显子新突变点的研究

目的探讨早老素－１基因突变在散发性阿尔茨海默病（ＳｐｏｒａｄｉｃＡｌｚｈｅｉｍｅｒ′ｓｄｉｓｅａｓｅ，ＳＡＤ）患者发病机制中的作用。方法应用聚合酶链反应－单链构像多态性（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）及ＤＮＡ直接测序技术检测６８名ＳＡＤ患者、１３名血管性痴呆（ＶＤ）患者和６５名正常老年人的早老素－１基因第５号外显子。结果发现４名ＳＡＤ患者的ＰＣＲ产物ＳＳＣＰ分析发生泳动异常，ＤＮＡ序列分析发现：这４名ＳＡＤ患者的１３０号密码子发生了ＣＴＧ→ＡＴＧ错义突变（３８８位点发生Ｃ→Ａ突变），使编码的氨基酸由亮氨酸变为蛋氨酸（Ｌｅｕ１３０Ｍｅｔ）；１５７号密码子发生了ＧＴＧ→ＣＴＧ错义突变（４６９位点发生Ｇ→Ｃ突变），使编码的氨基酸由缬氨酸变为亮氨酸（Ｖａｌ１５７Ｌｅｕ），另有１１名患者ＳＳＣＰ表现为一条单链增快，其性质待定。结论ＳＡＤ患者也存在早老素－１基因第５号外显子突变，该突变点可能为中国人ＳＡＤ患者早老素基因突变点之一。

晚发阿尔茨海默病与早老素1基因及载脂蛋白E基因的关联分析

目的 对中国汉族人群中早老素 1(presenilin 1,PS1)基因 8号内含子多态性与晚发阿尔茨海默病 (AD)进行关联分析 ,探讨PS1与载脂蛋白E(ApoE)基因多态性有无相互作用。方法 应用聚合酶链式反应和限制性片段长度多态性方法 ,检测了 10 3例晚发AD患者和 98例正常老年人中PS1与ApoE基因多态性 ,并对AD与PS1和ApoE各等位基因及基因型进行了关联分析。结果 ①在晚发AD患者中 ,PS1等位基因 1和 1/1基因型频率显著升高 (Z =2 0 9,2 80 ,P <0 0 5 ) ,而等位基因 2的频率显著降低 (Z =2 0 9,P <0 0 5 )。②晚发AD患者与PS1等位基因 1呈正相关 (RR =1.5 8,χ2 =5 .11,P <0 0 5 ) ,与PS1等位基因2呈负相关 (RR =0 .63 ,χ2 =5 .11,P <0 0 5 ) ;晚发AD患者与PS 1/1基因型呈正相关 (RR =2 .43 ,χ2 =7 5 7,P <0 0 1) ,与 1/2及2 /2基因型无明显关联。③晚发AD与ApoEε3 /ε4基因型和等位基因ε4呈正相关 (RR =2 .95 ,χ2 =8 18;RR =3 .13 ,χ2 =13 .0 ,P均小于 0 0 1)。结论 中国南方汉族人群中PS1和ApoE基因多态性与晚发AD之间有密切相关性。

α1-抗糜蛋白酶基因、早老素1基因与阿尔茨海默病的相关分析

目的探讨中国汉族人中α１抗糜蛋白酶（ＡＡＣＴ）基因、早老素１（ＰＳ１）基因多态性与阿尔茨海默病（Ａｌｚｈｅｉｍｅｒｓｄｉｓｅａｓｅ，ＡＤ）的相关情况。方法应用ＰＣＲＲＦＬＰ方法，在１２３例患者和１４０例正常人中观察ＡＡＣＴ信号肽和ＰＳ１基因多态性的分布，进行关联分析。结果１ＡＤ患者与ＰＳ１基因等位基因１正关联，与等位基因２和基因型２／２负关联，但与１／１基因型无关；２ＡＡＣＴ信号肽基因多态性与ＡＤ无关联；３在三种ＰＳ１基因型中，ＡＡＣＴ信号肽基因多态性与ＡＤ均无关；４在ＡＡＣＴ基因ＡＡ、ＴＴ基因型中，ＰＳ１基因多态性与ＡＤ负关联，而ＴＡ型中ＰＳ１基因与ＡＤ无显著相关。结论中国人群中，ＡＤ与ＰＳ１基因２／２型负关联，而与ＡＡＣＴ信号肽基因多态性无关；ＡＡＣＴ信号肽和ＰＳ１基因多态性之间也无明显的相互影响。

人参皂甙Rb1对阿尔茨海默病样大鼠海马结构β-分泌酶和早老素-1表达的影响

目的：观察人参皂甙Rb1对阿尔茨海默病（AD）模型大鼠海马结构伊分泌酶（BACE）和早老素-1（PS-1）表达的影响，探讨人参皂甙Rbl防治AD的可能机制。方法：SD大鼠随机分为对照组、模型组和治疗组，用D-半乳糖联合三氯化铝建立AD大鼠模型，治疗组在造模后给予腹腔注射人参皂甙Rb1；采用Morris水迷宫测试大鼠的空间学习记忆能力，免疫组织化学显色和免疫印迹方法检测大鼠海马结构BACE和PS-1的表达。结果：模型组大鼠各时间段的逃避潜伏期均较对照组延长，治疗组对应时间段的潜伏期较模型组明显缩短；模型组大鼠海马结构BACE和PS-1的表达较对照组增高，而治疗组BACE和PS-1表达均较模型组明显下调。结论：人参皂甙Rb1可明显改善D-半乳糖联合三氯化铝制作的AD大鼠学习记忆障碍，其机制可能与下调海马结构BACE和PS-1的表达有关。

慢性脑灌注不足大鼠海马区早老素-1的表达

目的观测慢性脑灌注不足(CVI)大鼠海马区早老素-1(PS-1)基因及其蛋白产物的动态表达,以探讨脑缺血对PS-1表达的影响。方法110只雄性W istar大鼠,随机分为对照组及CVI组,每组55只。根据手术后不同时间再将大鼠分为术后3、6、12 h,1、2、3、7、14 d和1、2、4个月组,每组5只。结扎双侧颈总动脉建立CVI模型,于术后规定时间取脑组织,行原位杂交及W estern印迹检测PS-1基因及其蛋白产物的表达。结果PS-1 mRNA阳性细胞主要是神经元,在大脑皮质Ⅲ、Ⅴ层锥体细胞染色最强;海马CA3、齿状回的表达比CA1区更强。与对照组相比,CVI组随着缺血时间的延长,阳性细胞数量减少,结构欠清晰,呈固缩或均匀着色,但明显的细胞坏死改变较少见;组织明显疏松。半定量分析表明,与对照组比较,CVI组阳性细胞积分光密度从第12小时开始升高(7 423±1 609对6 889±2 296),至第3天达高峰(13 356±3 503对7 201±2 239,P<0.01),之后逐渐下降至接近或略低于对照组水平。在缺血时间更长的CVI组中,齿状回PS-1mRNA阳性神经元数量较CA1区保留更多。W estern印迹结果与PS-1 mRNA的变化近似,与对照组积分光密度(183±36)比较,PS-1蛋白含量于双侧颈总动脉结扎术后第12小时轻度升高(249±57),第3天达高峰(966±178),第14天下降至对照组水平,1个月后略低于对照组(103±25)。结论脑缺血可以通过影响PS-1的表达促进缺血性脑损伤。

外源性硫化氢对原代神经元早老素1和β淀粉样蛋白的影响

目的探讨外源性H2S对原代培养皮质神经元早老素1（presenilin 1，PSl）和β淀粉样蛋白（β-amyloidpeptide，a13）的影响及机制。方法①NaHS为外源性H2S的供体，不同浓度NaHS（0、5、10、20、30、40、50μmol／L）作用于原代培养的皮质神经元，TUNEL法检测细胞凋亡，酶联免疫吸附实验（ELISA）检测Aβl-42水平，Western blot检测PSI蛋白表达水平。②神经元分为对照组（0μmoL／LNaHS）、20μmol/LNaHS组、A干预组（NaHS20μmoL／L加PI3K通路阻断剂LY29400220μmoL／L）和B干预组（NaHS20μmol／L加MAPK通路阻断剂PD9805920μmol／L），Western blot检测PSl蛋白表达。结果①5-20μmoL／L浓度NaHS干预时，不引起明显神经元凋亡；30-50μm0L／L时，神经元凋亡明显增加（P〈0．05）；10、20μmoL／L浓度NaHS显著降低Aβ1-42水平和PSI蛋白表达水平（P〈0．05）。②与对照组相比，20μmoL／LNaHS组和B干预组PSl蛋白表达降低（P〈0．05），而A干预组PSl蛋白表达无改变（P〉0．05）；而20μmoL／LNaHS组和B干预组间无差异（P〉0．05）；与A干预组相比，B干预组PSl蛋白表达显著降低（P〈0．05）。结论低浓度外源性H2S（30μmoL／L浓度NaHS范围内）不引起神经元明显凋亡，降低Aβ1-42水平和PSl蛋白表达，并可能通过PI3K信号通路发挥降低PSl蛋白表达的作用。

散发性阿尔茨海默病早老素2基因的新突变

目的检测早老素2(PSEN2)基因的外显子序列,探索PSEN2基因外显子可能的突变与散发性阿尔茨海默病(SAD)发病的相关性。方法所有被试者均来自日本人群。选择300例符合NINCDS-ADRDA诊断标准的无阳性家族史的SAD患者,其中男120例,女180例,平均年龄(72.57±7.56)岁。选择与患者组年龄、性别相匹配的正常对照300例,其中男120例,女180例,平均年龄(70.97±6.73)岁。从被试者外周血中提取基因组DNA,采用聚合酶链式反应、DNA测序方法,进行PSEN2基因外显子序列测定。结果 PSEN2基因外显子3上发现100G>A(G34S)的突变,PSEN2基因外显子4上发现1915C>T(87H)的突变。结论此次发现的2个基因突变均位于PSEN2蛋白非功能区N端片段,可能与SAD发病无关。

果蝇早老素基因的研究进展

果蝇早老素(Drosophila presenilin,DPS)是一种具有天冬氨酸水解酶活性的蛋白,在果蝇生长发育的各阶段都有表达,对果蝇的生长发育和调节胞内Ca2+平衡具有重要的作用。果蝇早老素功能的缺失能够导致Notch信号下降、神经元凋亡和胞质钙浓度上升,最终造成果蝇长时程记忆损伤和认识丧失。果蝇早老素的这些功能使之成为研究果蝇阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)模型最重要的着手点之一,为阐明AD的病理提供了大量有价值的信息。文章概述了DPS基因与AD相关的功能。

散发性Alzheimer病早老素-1基因第8号和第10号外显子突变研究

目的 :探讨散发性 Alzheimer病 (SAD)与早老素 - 1(PS- 1)基因突变的关系。方法 :采用聚酶链反应 -单链构象多态性 (PCR- SSCP)分析技术对 6 8例 SAD患者的 PS- 1基因第 8号和第 10号外显子进行突变检测。结果 :所有病例 PS- 1基因第 8号外显子的 PCR- SSCP分析结果均两条单链和一条双链 ,第 10号外显子的 PCR- SSCP分析结果均显示三条单链和一条双链 ,未发现异常泳动 ,推断没有存在突变。结论 :SAD的致病原因与 FAD不同 ,PS- 1基因第 8号和第 10号外显子突变并非

D-半乳糖联合三氧化铝对大鼠海马β-分泌酶及早老素-1蛋白表达的影响

目的探讨D-半乳糖联合染铝的AD大鼠海马结构β-分泌酶(BACE)及早老素-1(PS-1)蛋白的表达。方法 30只SD雄性大鼠随机分2组(n=15)。模型组腹腔注射D-半乳糖60 mg·kg-1·d-1和灌胃三氯化铝500 mg·kg-1·d-1,连用60 d;对照组给予等量生理盐水进行腹腔注射和灌胃。造模后行Morris水迷宫行为学测试和Western印迹杂交。结果模型组大鼠各时间段的平均潜伏期较对照组明显延长(P<0.05);模型组海马结构BACE和PS-1蛋白表达均较对照组明显增强(P<0.01)。结论 D-半乳糖联合三氯化铝能较好地模拟AD的学习记忆障碍和病理学方面的特征,是筛选AD治疗药物靶点一种较理想的动物模型。

β样淀粉蛋白和早老素增强子-2与环磷酸腺苷应答原件结合蛋白的关系

β淀粉样蛋白(Aβ)沉积是阿尔茨海默病(AD)公认的一个病理学改变也是诊断依据之一。γ分泌酶是产生Aβ的最后剪切蛋白复合体,它剪切生成的Aβ主要为Aβ40和Aβ42。而比较认可的形成Aβ沉积的原因就是Aβ40和Aβ42比例的失调。γ分泌酶中起主要催化作用的部分是早老素(PS)-1,而早老素增强子(Pen)-2主要作用就是使PS-1内分解,对底物的催化作用产生影响。环磷酸腺苷应答原件结合蛋白(CREB)是与长期记忆和基因转录密切相关的一种蛋白,单体Aβ42可以促进其生成,而CREB本身可以调节Pen-2表达。本文就Aβ的形成意义、CREB的前后作用、Pen-2的功能对三者间的关系进行综述。

早老素-1V97L基因突变对家族性Alzheimer病SH-SY5Y细胞Aβ_(42)产生的影响

目的探讨早老素-1(presenilin-1,PS-1)Val97Leu位点突变对家族性Alzheimer病SH-SY5Y细胞Aβ42产生的影响。方法采用一步法定点突变技术,由含有野生型(wildtype,wt)PS-1的pcDNA3.1/Zeo(+)质粒合成携带有突变位点Val97Leu的突变型(mutationtype,mt)PS-1质粒并转染至神经母细胞瘤细胞系SH-SY5Y细胞中,筛选出稳定表达的细胞系。用ELISA法和放射免疫法来检测培养基及胞浆中Aβ42和总Aβ含量;同时检测APP及BACE表达水平的变化。结果48小时,转染突变PS-1基因的细胞,细胞内和细胞外Aβ42的含量较24小时有显著提高,且相对未转染、wt和mock转染的细胞也有显著提高,而各组间总Aβ的含量变化无明显差异。APP及BACE的表达水平各组间也无明显差异。结论此中国人阿尔茨海默病家系中发现的PS-1基因Val97Leu突变为一新的突变位点,可选择性引起细胞内外Aβ42的增高,因此认为是一病理性突变。

阿尔采末病淀粉样前体蛋白(APP)和早老素-1(PS-1)双重基因稳定转染细胞系的建立

目的 构建APP751和PS 1(M14 6L)双重基因稳定转染的中国仓鼠卵巢 (CHO)细胞系 ,以用于 β 分泌酶或γ 分泌酶抑制剂的研究和相关药物的筛选。方法 从人胎盘基因文库中用多聚酶链反应 (PCR)方法扩增野生型和突变型PS 1(M14 6L)基因 ,并重组克隆到PCI neo质粒 ,用脂质体 (Lipo fectAmine)法将野生型和突变型 (M14 6L)PS 1转染至含APP751表达基因的CHO细胞 ,选择培养液筛选能稳定表达目的基因的CHO细胞株。用免疫沉淀和ELISA测定分析细胞表达产物。结果 建立了数株能表达Aβ和PS 1的CHO细胞。在转染细胞株中高表达的SP 1为全长 4 5kd的PS 1蛋白 ;野生型PS 1和突变型PS 1(M14 6L)以及单纯APP751转染的CHO细胞株均可分泌Aβ多肽 ,且突变型PS 1(M14 6L)转染的细胞株分泌到条件培养液中的Aβ1～ 42 比其它细胞株增加了近两倍。结论 突变型PS 1(M14 6L)的高表达可促使Aβ1～ 42 的分泌增加。我们建立的PS 1和APP双重基因稳定转染的CHO细胞株模型 ,可用于 β 分泌酶或γ

早老素与阿尔茨海默病

早老素 (presenilin ,PS)与阿尔茨海默病 (alzheimer′sdisease ,AD)密切相关 ,其基因突变是遗传性家族型AD的主要病因。PS可能作为γ分泌酶和 (或 )通过影响蛋白质的膜转运参与 β淀粉样前体蛋白质 (β amyloidprecursorpro tein ,APP)代谢生成Aβ42的过程 ,而PS多蛋白质复合物的形成可能是其中的关键步骤 ,突变的PS则通过“获得功能”的方式引起Aβ42的产生和沉积增加。PS还可能通过影响未折叠蛋白质反应等多种途径来影响神经细胞对凋亡的敏感性。

转染早老素1突变基因SH-SY5Y细胞凋亡的研究

目的 探索转染早老素 -突变基因导致 SH-SY5 Y细胞凋亡的机制。方法 用 Xba I和 Acc6 5 I内切酶将携带野生型和突变型 PS-1的 p Bluescript质粒双酶切 ,电泳后纯化其 c DNA片段 ,然后将其克隆到 p CDNA3载体中。由脂质体介导将 p CDNA3空载体、携带有野生型和突变型 PS-1基因的 p CDNA3质粒分别转染到神经母细胞瘤细胞系 SH-SY5 Y细胞中。用蛋白印迹 ( Western blot)杂交检测其表达。用流式细胞仪 ( Coulter EpicsXL)检测在不同情况下不同细胞凋亡的百分率 ,荧光显微镜下观察碘化吡啶 ( PI)、Hoechst3334 2 ( Ho)双染的凋亡细胞的形态 ,并用分子生物学方法检测凋亡细胞的 DNA状况。结果 在无血清培养 2 4 h条件下含有空载体、野生型和突变型 ( A2 4 6 E) PS-1基因的 SY5 Y细胞凋亡百分率依次为 ( 6 .0 3± 2 .0 3)、( 8.34± 2 .4 1 )、( 2 6 .2±4 .6 )。用 SY5 Y细胞作为对照 ,其凋亡百分率为 ( 4 .2 2± 1 .89)。在 Aβ2 5 -35 ( 2 5 μmol/L)诱导下其凋亡百分率依次为 ( 2 4 .4± 3.6 )、( 2 7.7± 2 .5 )、( 5 0 .3± 8.3)。SY5 Y对照组为 ( 1 8.4± 3.1 )。比较显示含突变早老素 1基因细胞的凋亡程度明显升高 ( P<0 .0 0 1 )。结论 早老素 1基因突变导致神经细胞更容易在各种刺激下发生凋亡 ,

早老素-1基因内含子多态性与散发性阿尔茨海默病的相关性研究

目的:对早老素-1基因第8内含子多态性与散发性阿尔茨海默病(sporadicAlzheimerdisease,SAD)进行关联分析,为分子生物学提供理论依据。方法:以多种临床量表筛选及根据ADRDA-NINCDS临床诊断标准,收集144例临床疑诊的SAD患者(男72例,女72例,其中早发性患者40例和晚发性患者104例)及140例健康老人作为研究对象,以PCR-RELP方法检测其早老素-1基因第8内含子多态性,进行对比分析。结果:与对照组的基因型及等位基因频率比较,早发性SAD组PS-1基因第8内含子基因型、等位基因频率分布相似,而晚发性SAD组1等位基因频率(63.94%)明显增高,2/2基因型(8.65%)、2等位基因频率(36.06%)明显降低。结论:PS-1基因内含子的多态性与国人晚发性SAD发病相关联,可能是晚发性SAD的遗传性易感因素。

普伐他汀对慢性脑缺血大鼠脑海马区早老素-1表达的影响

目的观察降血脂药普伐他汀对慢性脑缺血(CVI)大鼠脑海马区早老素-1(PS-1)蛋白水平的影响。方法36只雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组(7只),高脂饮食组随机分为空白对照组(6只)、普伐他汀组(7只)、单纯脑缺血组(7只)及脑缺血+普伐他汀组(9只)。采用永久性结扎双侧颈总动脉建立CVI模型。于术后2个月测血脂,行酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血浆及脑左侧海马区匀浆中β淀粉样蛋白(Aβ)水平,蛋白免疫印迹检测海马区PS-1改变。结果⑴高脂饮食导致大鼠血浆胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白(LDL-C)显著升高。普伐他汀可使TC降至接近正常水平,LDL-C有不同程度下降,TG无明显改善。⑵各实验组血浆Aβ水平无统计学差异。脑海马区匀浆中,空白对照组、普伐他汀组Aβ轻度升高,而脑缺血组显著升高(P<0.01),普伐他汀可以有效降低脑缺血组Aβ水平(P<0.01)。蛋白免疫印迹结果显示高脂饮食组、空白对照组及脑缺血组PS-1全长蛋白明显上调(P<0.05),而普伐他汀组、脑缺血+普伐他汀组PS-1蛋白可降至接近正常水平。结论降血脂药物普伐他汀在降低脑缺血后Aβ产生的同时抑制了PS-1的表达上调,可能对阿尔茨海默病有一定的防治作用。

早老素1基因circRNA在阿尔茨海默病中的表达

目的证实PS-1环状RNA(Cir-PS1-615)的存在,建立Cir-PS1-615的检测方法,并对其与AD的关系进行初步研究。方法采用反向PCR后克隆测序的方法,在人神经母细胞瘤SY5Y细胞对PS1基因的十二个外显子设计引物分别检测,发现可能存在的环状RNA,并对30例AD患者及对照组全血进行RT-qPCR检测。结果证实了PS1基因第2-5外显子有环状RNA的存在(Cir-PS1-615),对AD患者与对照组血液进行检测,发现AD患者与对照组血液Cir-PS1-615有差异表达。结论 PS1环状RNA Cir-PS1-615可能成为AD新的临床诊断标志物。

家族性阿尔茨海默病早老素-1基因突变的研究

目的探讨中国人家族性阿尔茨海默病 (Fa milialAlzheimer'sdisease ,FAD)早老素 -1基因的点突变特点。方法采用PCR方法 ,对FAD一家族系中的 1例患者 ,4例散发性AD患者、9例多发性脑梗塞痴呆患者及 10名正常人的早老素-1基因外显子 2 ,3 ,4进行测序分析。结果在FAD患者早老素 -1基因外显子 465 19nt发现T→A杂合性点突变。散发性AD患者、9例多发性脑梗塞痴呆患者及正常人均未发现突变。结论中国人早发性、FAD可能与早老素