人参皂甙Rb1对阿尔茨海默病样大鼠海马结构β-分泌酶和早老素-1表达的影响

目的：观察人参皂甙Rb1对阿尔茨海默病（AD）模型大鼠海马结构伊分泌酶（BACE）和早老素-1（PS-1）表达的影响，探讨人参皂甙Rbl防治AD的可能机制。方法：SD大鼠随机分为对照组、模型组和治疗组，用D-半乳糖联合三氯化铝建立AD大鼠模型，治疗组在造模后给予腹腔注射人参皂甙Rb1；采用Morris水迷宫测试大鼠的空间学习记忆能力，免疫组织化学显色和免疫印迹方法检测大鼠海马结构BACE和PS-1的表达。结果：模型组大鼠各时间段的逃避潜伏期均较对照组延长，治疗组对应时间段的潜伏期较模型组明显缩短；模型组大鼠海马结构BACE和PS-1的表达较对照组增高，而治疗组BACE和PS-1表达均较模型组明显下调。结论：人参皂甙Rb1可明显改善D-半乳糖联合三氯化铝制作的AD大鼠学习记忆障碍，其机制可能与下调海马结构BACE和PS-1的表达有关。

慢性脑灌注不足大鼠海马区早老素-1的表达

目的观测慢性脑灌注不足(CVI)大鼠海马区早老素-1(PS-1)基因及其蛋白产物的动态表达,以探讨脑缺血对PS-1表达的影响。方法110只雄性W istar大鼠,随机分为对照组及CVI组,每组55只。根据手术后不同时间再将大鼠分为术后3、6、12 h,1、2、3、7、14 d和1、2、4个月组,每组5只。结扎双侧颈总动脉建立CVI模型,于术后规定时间取脑组织,行原位杂交及W estern印迹检测PS-1基因及其蛋白产物的表达。结果PS-1 mRNA阳性细胞主要是神经元,在大脑皮质Ⅲ、Ⅴ层锥体细胞染色最强;海马CA3、齿状回的表达比CA1区更强。与对照组相比,CVI组随着缺血时间的延长,阳性细胞数量减少,结构欠清晰,呈固缩或均匀着色,但明显的细胞坏死改变较少见;组织明显疏松。半定量分析表明,与对照组比较,CVI组阳性细胞积分光密度从第12小时开始升高(7 423±1 609对6 889±2 296),至第3天达高峰(13 356±3 503对7 201±2 239,P<0.01),之后逐渐下降至接近或略低于对照组水平。在缺血时间更长的CVI组中,齿状回PS-1mRNA阳性神经元数量较CA1区保留更多。W estern印迹结果与PS-1 mRNA的变化近似,与对照组积分光密度(183±36)比较,PS-1蛋白含量于双侧颈总动脉结扎术后第12小时轻度升高(249±57),第3天达高峰(966±178),第14天下降至对照组水平,1个月后略低于对照组(103±25)。结论脑缺血可以通过影响PS-1的表达促进缺血性脑损伤。

散发性Alzheimer病早老素-1基因第8号和第10号外显子突变研究

目的 :探讨散发性 Alzheimer病 (SAD)与早老素 - 1(PS- 1)基因突变的关系。方法 :采用聚酶链反应 -单链构象多态性 (PCR- SSCP)分析技术对 6 8例 SAD患者的 PS- 1基因第 8号和第 10号外显子进行突变检测。结果 :所有病例 PS- 1基因第 8号外显子的 PCR- SSCP分析结果均两条单链和一条双链 ,第 10号外显子的 PCR- SSCP分析结果均显示三条单链和一条双链 ,未发现异常泳动 ,推断没有存在突变。结论 :SAD的致病原因与 FAD不同 ,PS- 1基因第 8号和第 10号外显子突变并非

D-半乳糖联合三氧化铝对大鼠海马β-分泌酶及早老素-1蛋白表达的影响

目的探讨D-半乳糖联合染铝的AD大鼠海马结构β-分泌酶(BACE)及早老素-1(PS-1)蛋白的表达。方法 30只SD雄性大鼠随机分2组(n=15)。模型组腹腔注射D-半乳糖60 mg·kg-1·d-1和灌胃三氯化铝500 mg·kg-1·d-1,连用60 d;对照组给予等量生理盐水进行腹腔注射和灌胃。造模后行Morris水迷宫行为学测试和Western印迹杂交。结果模型组大鼠各时间段的平均潜伏期较对照组明显延长(P<0.05);模型组海马结构BACE和PS-1蛋白表达均较对照组明显增强(P<0.01)。结论 D-半乳糖联合三氯化铝能较好地模拟AD的学习记忆障碍和病理学方面的特征,是筛选AD治疗药物靶点一种较理想的动物模型。

阿尔采末病淀粉样前体蛋白(APP)和早老素-1(PS-1)双重基因稳定转染细胞系的建立

目的 构建APP751和PS 1(M14 6L)双重基因稳定转染的中国仓鼠卵巢 (CHO)细胞系 ,以用于 β 分泌酶或γ 分泌酶抑制剂的研究和相关药物的筛选。方法 从人胎盘基因文库中用多聚酶链反应 (PCR)方法扩增野生型和突变型PS 1(M14 6L)基因 ,并重组克隆到PCI neo质粒 ,用脂质体 (Lipo fectAmine)法将野生型和突变型 (M14 6L)PS 1转染至含APP751表达基因的CHO细胞 ,选择培养液筛选能稳定表达目的基因的CHO细胞株。用免疫沉淀和ELISA测定分析细胞表达产物。结果 建立了数株能表达Aβ和PS 1的CHO细胞。在转染细胞株中高表达的SP 1为全长 4 5kd的PS 1蛋白 ;野生型PS 1和突变型PS 1(M14 6L)以及单纯APP751转染的CHO细胞株均可分泌Aβ多肽 ,且突变型PS 1(M14 6L)转染的细胞株分泌到条件培养液中的Aβ1～ 42 比其它细胞株增加了近两倍。结论 突变型PS 1(M14 6L)的高表达可促使Aβ1～ 42 的分泌增加。我们建立的PS 1和APP双重基因稳定转染的CHO细胞株模型 ,可用于 β 分泌酶或γ

早老素-1V97L基因突变对家族性Alzheimer病SH-SY5Y细胞Aβ_(42)产生的影响

目的探讨早老素-1(presenilin-1,PS-1)Val97Leu位点突变对家族性Alzheimer病SH-SY5Y细胞Aβ42产生的影响。方法采用一步法定点突变技术,由含有野生型(wildtype,wt)PS-1的pcDNA3.1/Zeo(+)质粒合成携带有突变位点Val97Leu的突变型(mutationtype,mt)PS-1质粒并转染至神经母细胞瘤细胞系SH-SY5Y细胞中,筛选出稳定表达的细胞系。用ELISA法和放射免疫法来检测培养基及胞浆中Aβ42和总Aβ含量;同时检测APP及BACE表达水平的变化。结果48小时,转染突变PS-1基因的细胞,细胞内和细胞外Aβ42的含量较24小时有显著提高,且相对未转染、wt和mock转染的细胞也有显著提高,而各组间总Aβ的含量变化无明显差异。APP及BACE的表达水平各组间也无明显差异。结论此中国人阿尔茨海默病家系中发现的PS-1基因Val97Leu突变为一新的突变位点,可选择性引起细胞内外Aβ42的增高,因此认为是一病理性突变。

早老素-1基因内含子多态性与散发性阿尔茨海默病的相关性研究

目的:对早老素-1基因第8内含子多态性与散发性阿尔茨海默病(sporadicAlzheimerdisease,SAD)进行关联分析,为分子生物学提供理论依据。方法:以多种临床量表筛选及根据ADRDA-NINCDS临床诊断标准,收集144例临床疑诊的SAD患者(男72例,女72例,其中早发性患者40例和晚发性患者104例)及140例健康老人作为研究对象,以PCR-RELP方法检测其早老素-1基因第8内含子多态性,进行对比分析。结果:与对照组的基因型及等位基因频率比较,早发性SAD组PS-1基因第8内含子基因型、等位基因频率分布相似,而晚发性SAD组1等位基因频率(63.94%)明显增高,2/2基因型(8.65%)、2等位基因频率(36.06%)明显降低。结论:PS-1基因内含子的多态性与国人晚发性SAD发病相关联,可能是晚发性SAD的遗传性易感因素。

普伐他汀对慢性脑缺血大鼠脑海马区早老素-1表达的影响

目的观察降血脂药普伐他汀对慢性脑缺血(CVI)大鼠脑海马区早老素-1(PS-1)蛋白水平的影响。方法36只雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组(7只),高脂饮食组随机分为空白对照组(6只)、普伐他汀组(7只)、单纯脑缺血组(7只)及脑缺血+普伐他汀组(9只)。采用永久性结扎双侧颈总动脉建立CVI模型。于术后2个月测血脂,行酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血浆及脑左侧海马区匀浆中β淀粉样蛋白(Aβ)水平,蛋白免疫印迹检测海马区PS-1改变。结果⑴高脂饮食导致大鼠血浆胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白(LDL-C)显著升高。普伐他汀可使TC降至接近正常水平,LDL-C有不同程度下降,TG无明显改善。⑵各实验组血浆Aβ水平无统计学差异。脑海马区匀浆中,空白对照组、普伐他汀组Aβ轻度升高,而脑缺血组显著升高(P<0.01),普伐他汀可以有效降低脑缺血组Aβ水平(P<0.01)。蛋白免疫印迹结果显示高脂饮食组、空白对照组及脑缺血组PS-1全长蛋白明显上调(P<0.05),而普伐他汀组、脑缺血+普伐他汀组PS-1蛋白可降至接近正常水平。结论降血脂药物普伐他汀在降低脑缺血后Aβ产生的同时抑制了PS-1的表达上调,可能对阿尔茨海默病有一定的防治作用。

家族性阿尔茨海默病早老素-1基因突变的研究

目的探讨中国人家族性阿尔茨海默病 (Fa milialAlzheimer'sdisease ,FAD)早老素 -1基因的点突变特点。方法采用PCR方法 ,对FAD一家族系中的 1例患者 ,4例散发性AD患者、9例多发性脑梗塞痴呆患者及 10名正常人的早老素-1基因外显子 2 ,3 ,4进行测序分析。结果在FAD患者早老素 -1基因外显子 465 19nt发现T→A杂合性点突变。散发性AD患者、9例多发性脑梗塞痴呆患者及正常人均未发现突变。结论中国人早发性、FAD可能与早老素

散发性阿尔茨海默病早老素-1基因第5号和第8号外显子突变研究

目的 探讨散发性阿尔茨海默病 (SAD)与早老素 1(PS 1)基因突变的关系。方法 采用多聚酶链反应 单链构象多态性 (PCR SSCP)分析技术对 6 8例SAD患者的PS 1基因第 5号和第 8号外显子进行突变检测。结果 所有病例PS 1基因第 5号和第 8号外显子的PCR SSCP分析结果均显示两条单链和一条双链 ,未发现异常泳动 ,推断没有存在突变。结论 SAD和家族性AD(FAD)的致病原因存在差异 ,在SAD中PS 1基因第 5号和第 8号外显子不存在突变或突变率极低 。

阿尔茨海默病早老素-1基因研究进展

早老素-1(PS-1)基因的发现是继APP基因之后在阿尔茨海默病(AD)分子生物学研究领域取得的巨大进展,本文就PS-1基因的分子结构、PS-1基因突变、多态分布及其对AD的致病机理予以综述。

阿尔茨海默病患者早老素-1基因第3外显子突变分析

目的探讨阿尔茨海默病(AD)早老素-1(PS-1)基因第3外显子的突变特点。方法采用聚合酶链反应及基因测序技术,对12例血管性痴呆(VD)患者、13例散发性阿尔茨海默病(SAD)患者的PS-1基因第3外显子片段进行扩增与序列分析。结果VD患者PS-1基因第3外显子未发现突变,SAD患者中有1例PS-1基因第3外显子扩增片段发现1处缺失突变。结论在SAD中存在PS-1基因第3外显子突变。

早老素-1基因启动子区-48C/T位点多态性与LOAD的遗传相关性

目的 研究早老素 - 1基因启动子区 - 4 8C/T位点的多态性与迟发性AD(LOAD)的相关性。方法 用常规方法从人外周血白细胞中抽提基因组DNA ,PCR扩增出包含 - 4 8C/T多态性位点的基因片段 ,利用PCR -RFLP技术对 -4 8C/T多态性位点进行基因分型 ,χ2 检验分析 - 4 8C/T多态性位点基因型分布和等位基因频率。结果 以 33例AD病例和32例对照样品的外周血白细胞基因组DNA为模板 ,PCR扩增出了长度为 344bp的包含 - 4 8C/T多态性位点的基因片段。基因分型结果表明 ,33例散发型AD的C和T等位基因频率分别为 4 7%和 5 3% ,C/T和T/T基因型频率分别为 94 %和 6 %。而 32例正常对照的C和T等位基因频率分别为 4 8%和 5 2 % ,C/T和T/T基因型频率分别为 97%和 3%。χ2 检验结果显示 ,病例 -对照样品间C和T等位基因频率及C/C、C/T和T/T基因型的分布均无显著性差异 (χ2 值分别为 0 4 4 3和 0 318,P>0 .0 5 )。结论 在我们研究的群体中 ,早老素 - 1基因启动子区 - 4 8C/T位点的多态性与LOAD无显著的遗传相关性。

多奈哌齐对脑灌注不足鼠脑早老素-1表达的影响

目的观察多奈哌齐对慢性脑灌注不足(CVI)大鼠脑早老素-1(PS-1)蛋白水平的影响。方法90只雄性Wistar大鼠随机分为假手术对照组、单纯脑缺血组和多奈哌齐(安理申,卫材公司)组,按照取材时间又分为术后1天、1周及1月组,每组各10只。采用永久性结扎双侧颈总动脉建立CVI模型。常规及免疫电镜观察术后1周时海马区缺血性改变以及PS-1的表达。蛋白免疫印迹检测PS-1及其酶解产物Aβ42不同时间点的改变。结果与对照组相比,单纯脑缺血组术后1周存活7只,1月5只;多奈哌齐组术后1周8只,1月7只。常规电镜显示单纯缺血组呈慢性缺血性改变,多奈哌齐组缺血性改变明显减轻。免疫电镜显示,单纯缺血组内质网破碎明显,PS-1胶体金颗粒散在分布。多奈哌齐组内质网结构尚完整,分布均匀。蛋白免疫印迹结果显示,与假手术对照组相比,单纯脑缺血组PS-1在第1天即明显升高,1周后达高峰,升高为2.3倍,1月后又低于对照组水平。多奈哌齐组在术后第1天轻度升高,1周后继续上调,1月后达高峰,约为对照组2倍,呈亚急性改变。Aβ42在单纯缺血组随着缺血时间延长而持续升高,术后第1月时升高约3.5倍,而多奈哌齐组各时间点Aβ42含量升高则明显减慢。与单纯缺血组比较,术后1月时多奈哌齐组显著减少Aβ42的生成(P<0.01)。结论多奈哌齐对PS-1阳性神经细胞有保护作用,同时可以减少脑缺血后Aβ产生。

离体SH-SY5Y细胞内酸化对早老素-1表达的影响

目的研究早老素-1(PS1)在细胞内pH值降低时的表达情况,探讨细胞内pH值变化对γ-分泌酶活性的影响。方法本研究抑制细胞表面酸碱调节基因Na+-H+交换泵第一亚型(NHE1)的表达和酸化培养基,使细胞内pH值降低,构建细胞内酸化的SH-SY5Y细胞模型,将实验对象分为正常组、阴性对照组、NHE1组和酸化培养基组,应用ELISA法及western blot-ting,检测各组PS1的蛋白浓度及表达,分析细胞内pH值变化对PS1表达和活性的影响及其与γ-分泌酶的关系。结果检测胞膜离子交换蛋白NHE1组和酸化培养基组细胞内的PS1活性和蛋白表达较正常对照组和阴性对照组有显著增高(P<0.05),而NHE1组和酸化培养基组组间比较无明显差异,正常对照组和阴性对照组组间比较也无明显差异。结论细胞内pH值降低可促使PS1表达量增加,活性增高,提示细胞内pH值降低可能促使γ-分泌酶活性增高。

早老素-1 p.Met139Ile突变对SH-SY5Y细胞模型相关蛋白与miR-34a表达影响

目的探讨早老素-1(PSEN-1)p.Met139Ile突变对早发性阿尔茨海默病(EOAD)人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y细胞)模型中相关蛋白及microRNA-34a(miR-34a)表达的影响。方法分别将携带有阴性对照空载体的慢病毒(NC组)、野生型PSEN-1的慢病毒(WT组)以及突变型PSEN-1 p.Met139Ile(c.417G>C)的慢病毒(MT组)转染至SH-SY5Y细胞,以未感染慢病毒细胞作为正常组(N组)。ELISA方法检测各组细胞β-淀粉样蛋白表达(Aβ42/Aβ40值),Western blot方法检测各组PSEN-1、淀粉样蛋白前体(APP)、NOTCH-1蛋白的表达,qRT-PCR方法检测各组miR-34a的表达。结果与N组、NC组、WT组比较,MT组Aβ42/Aβ40值、PSEN-1蛋白、APP蛋白及miR-34a表达升高,而NOTCH-1蛋白表达下调,差异有显著性(F=28.540~425.600,q=7.349~30.180,P<0.05),N组、NC组、WT组各指标比较差异无显著性(P>0.05)。结论PSEN-1 p.Met139Ile为致病性突变位点,可引起SH-SY5Y细胞模型中相关蛋白及miR-34a的异常表达。

早老素-1基因多态性与迟发性老年痴呆的相关性

老年性痴呆（Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ病，ＡＤ）是以记忆减退，认知障碍，人格改变为特征的脑退行性疾病。根据发病年龄的不同，将本病分为早发性和迟发性两种类型。对于早发性家族性ＡＤ的遗传学研究已较清楚，但是迟发性ＡＤ的发病机理尚不明了。１９９６年Ｗｒａｇｇ等［１...

家族性阿尔茨海默病早老素-1基因突变位点的检测

目的 探讨早老素 1基因突变在家族性阿尔茨海默病 (FAD)发病中的作用。方法 应用聚合酶链反应 单链构象多态性 (PCR SSCP)、变性高效液相 (DHPLC)及DNA直接测序技术检测技术 ,对 130人的阿尔茨海默病 (AD)家系和 5 0例正常对照组的早老素 1(PS 1)基因第 4、5外显子进行了检测。结果 在早老素基因的第 5外显子上发现除 5例AD患者外 ,还有 4例家系内正常人 (Ⅳ 30、37、4 1、4 3)PCR SSCP出现泳动异常。DHPLC检测进一步验证以上 9例均表现双峰 ,提示可能有突变存在。DNA序列分析表明 ,这 9例的早老素 1基因第 5外显子的 136号密码子发生了GCT→GGT错义突变 ,使氨基酸由丙氨酸变为甘氨酸 (Ala136Gly) ;第 4外显子未发现突变。家系内其他人及正常对照组的PS1基因第 4、5外显子经以上检测均未发现异常。结论 PS1基因第

Alzheimer病患者早老素-1基因第5外显子突变特征分析

目的 探讨早老素-1 基因突变在散发性Alzheim er 病(sporadic Alzheim er's disease, SAD)患者发病机理中的作用。方法 应用聚合酶链反应-单链构象多态性(polym erase chain reaction-singlestrand conform ation polym orphsim ,PCR-SSCP)及DNA 直接测序技术检测68 例SAD 患者和65 名正常老年人的早老素-1 基因第5 外显子。结果 发现68 例SAD患者中有4 例患者的SSCP发生泳动异常,DNA 序列分析发现:这4 例SAD 患者的130 号密码子发生了CTG→ATG 错义突变(388 位点发生C→A突变),使氨基酸由亮氨酸变为蛋氨酸(Leu 130 Met);157 号密码子发生了GTG→CTG 错义突变(469 位点发生G→C突变),使氨基酸由缬氨酸变为亮氨酸(Val157 Leu);有11 例患者的SSCP表现为一条单链电泳迁移率明显增快,DNA 序列分析发现:这11 例SAD患者的130 号密码子发生了CTG→ATG 错义突变(388 位点发生C→A 突变),使氨基酸由亮氨酸变为蛋氨酸(Leu 130 Met);154 号密码子发生了TGC→TGT 同义突变(462 位点发生C→T)突变。结论 我们发现在SAD患者中存在早老素-1 基因第5 外显子突变,该突变点可能为中国人SAD 患者早老素基因突变点之一。

阿尔茨海默病患者早老素-1基因与ApoE基因关联分析

目的 探讨早老素 - 1(presenilin- 1,PS- 1)基因第 8外显子 3′端内含子 ,Apolipoprotein E(Apo E)基因等位基因多态性相互作用在散发性阿尔茨海默病 (sporadic Alzheimer's disease,SAD)发病机理中的作用。方法 应用聚合酶链反应 -限制性片段长度多态性方法检测了 75例 SAD患者和 73名正常老年人的 PS- 1基因第 8外显子 3′端内含子、Apo E基因等位基因多态性分布。结果 PS- 1、Apo E基因多态性与 SAD发病有明显关联 :SAD发病与 PS- 1基因的等位基因 2呈明显负关联 ,等位基因 1呈明显正关联。SAD发病与 E2 等位基因呈明显负关联 ,与 E3、E4等位基因无关联。Apo E基因多态性和 PS- 1基因多态性相互作用对 SAD发病无明显影响。结论 PS- 1基因的等位基因 2和 Apo E2 等位基因对 SAD发病可能有保护作用 ;PS- 1基因的等位基因 1可能是 SAD发病的危险因素之一 ,Apo E基因多态性与 PS- 1基因多态性相互作用对