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如何运用作文中的小标题的结构形式
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作者 孙国仙 《学苑教育》 2020年第6期77-77,共1页
小标题的结构形式就是在开头之后把故事情节,人物感情,人物形象,生活片段概括成一个短语,使读者清晰地知道文章的脉络,使文章结构新颖,衔接自然,但是大部分同学知道小标题的形式,却不清楚具体运用,以致于用起来很混乱,事倍功半,达不到... 小标题的结构形式就是在开头之后把故事情节,人物感情,人物形象,生活片段概括成一个短语,使读者清晰地知道文章的脉络,使文章结构新颖,衔接自然,但是大部分同学知道小标题的形式,却不清楚具体运用,以致于用起来很混乱,事倍功半,达不到预期效果。 展开更多
关键词 时间串联式 镜头式 事情发生的顺序 空间顺序 诗词名句式 日记式
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应用杆状病毒表达系统有效表达PEDV纤突蛋白 被引量:1
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作者 郝建伟 薛春宜 曹永长 《山西农业科学》 2022年第5期714-719,共6页
为了解决猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)变异毒株纤突蛋白(S蛋白)分子质量大、难以表达的问题,研究采用Signal 4.0软件预测S蛋白信号肽,构建表达替换信号肽S蛋白的重组质粒,鉴定正确后重组质粒转化DH10Bac感... 为了解决猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)变异毒株纤突蛋白(S蛋白)分子质量大、难以表达的问题,研究采用Signal 4.0软件预测S蛋白信号肽,构建表达替换信号肽S蛋白的重组质粒,鉴定正确后重组质粒转化DH10Bac感受态细胞并进行蓝白斑筛选,挑取白斑进行菌落PCR检测,检测无误后提取Bacmid DNA转染Sf9细胞,制备重组杆状病毒。采用杆状病毒表达系统表达目的蛋白,采用免疫印迹法(Western blot)和串联式飞行时间质谱(MALDI-TOF-TOF)技术鉴定表达蛋白,采用SDS-PAGE半定量方法测定蛋白含量;以Balb/c小鼠为材料进行免疫试验,应用中和试验、ELISPOT试验测定小鼠抗体滴度及细胞因子水平。结果表明,S蛋白氨基端20个氨基酸为蛋白信号肽,重组质粒经双酶切鉴定构建成功,经菌体PCR检测验证表达骨架构建完成,转染Sf9细胞后获得重组病毒rB-PEDV-S;重组病毒表达蛋白经Western-blot和MALDI-TOFTOF鉴定为目的蛋白,蛋白质量浓度可达0.008 6μg/μL;替换原有信号肽可有效提高S蛋白产量,以0.86μg/只剂量免疫小鼠后,可刺激小鼠产生IL-4,但血清抗体水平与PBS组无明显差异。替换信号肽有助于S蛋白表达,利用表达蛋白免疫小鼠可有效刺激IL-4产生。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒(PEDV) 杆状病毒 免疫印迹法 串联式飞行时间质谱 蛋白表达 疫苗
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