FQ-PCR检测乙型肝炎病毒DNA与时间分辨免疫荧光法检测乙肝五项在乙肝诊断中的应用价值

目的探讨荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测乙型肝炎病毒(HBV)-DNA与时间分辨免疫荧光法检测乙肝五项在乙肝诊断中的应用价值。方法选择2021年1月至2023年10月本院接收的82例疑似乙肝患者作为研究对象,均通过FQ-PCR实施HBV-DNA检测,同时予以时间分辨免疫荧光法检测乙肝五项[乙肝病毒核心抗体(HBcAb)、乙肝病毒e抗体(HBeAb)、乙肝病毒e抗原(HBeAg)、乙肝表面抗原(HBsAg)、乙肝表面抗体(HBsAb)],并分析检测结果。结果82例患者中,HBV-DNA阳性率为70.73%(58/82)。82例患者中,组合A(HBcAb+HBeAg+HBsAg阳性)占比91.46%(75/82),组合B(HBeAb+HBsAg阳性)占比63.41%(52/82),组合C(HBcAb+HBeAb+HBsAg阳性)占比37.80%(31/82),组合D(HBcAb+HBeAb+HBsAb阳性)占比6.10%(5/82),组合E(HBeAg+HBsAg阳性)占比64.63%(53/82)。组合A、组合B、组合C、组合D、组合E中HBV-DNA阳性率分别为53.33%(40/75)、7.69%(4/52)、29.03%(9/31)、40.00%(2/5)、5.66%(3/53),组合A中HBV-DNA阳性率均高于其他各项组合,差异具有统计学意义(P<0.05)。FQ-PCR检测HBV-DNA联合时间分辨免疫荧光法检测乙肝五项诊断乙肝的准确度、灵敏度高于单独FQ-PCR检测HBV-DNA及时间分辨免疫荧光法检测乙肝五项,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论在乙肝诊断中,FQ-PCR检测HBV-DNA与时间分辨免疫荧光法检测乙肝五项各具优势,积极联合应用有助于进一步提升诊断效能。

乙肝肝炎病毒检测中荧光定量PCR法与时间分辨免疫荧光的对比分析

探析荧光定量PCR法与时间分辨免疫荧光在乙肝肝炎病毒检测中的应用效果。方法 选用96例疑似乙肝患者,均进行荧光定量PCR法与时间分辨免疫荧光病毒检测,以细菌培养作为金标准,比较不同检测手段的阳性检出率、检验结果及检测效能。结果 荧光定量PCR法的检测符合率、灵敏度,高于时间分辨免疫荧光法,而特异度低于时间分辨免疫荧光法。结论 荧光定量PCR法和时间分辨免疫荧光两种方法各有优缺点,适用于不同的检测环境和需求。在实际应用中,需要根据检测要求和实际情况进行选择,确保有效性和准确性。

BNP和IL-6双标记时间分辨免疫荧光检测方法的建立及初步应用

目的研制一种脑钠肽(BNP)、白细胞介素-6(IL-6)的双标记时间分辨免疫荧光分析方法(TRFIA)并对其性能进行初步评价。方法将抗BNP和IL-6单克隆抗体(MAb)作为包被抗体包被在96孔板,用Eu3+和Sm3+分别标记另一配对抗体作为检测抗体,建立双抗体夹心TRFIA分析法并制备成试剂盒。进行灵敏度、准确度、重复性、特异性、稳定性和临床样本比对等实验评价其检测性能。结果制备的双标记时间分辨免疫荧光试剂盒对BNP检测的线性范围为10 pg/mL~5000 pg/mL,灵敏度为8.65 pg/mL,对IL-6检测的线性范围为1 pg/mL~1000 pg/mL,灵敏度为5.36 pg/mL。BNP的回收率在91.49%~99.16%,批内CV在5.73%~8.96%,批间CV在8.42%~11.73%;IL-6的回收率在93.95%~111.50%,批内CV在7.32%~10.07%,批间CV在9.40%~11.30%。与血清中常见的脓毒血症检测指标均无明显的交叉反应。试剂盒能够在4℃稳定保存半年,37℃稳定保存7 d。对临床样本的检测发现,该方法参考区间Cut-off值BNP:46.01 pg/mL,IL-6:13.62 pg/mL;检测结果与临床诊断结果一致,准确性较好。结论建立的BNP和IL-6双标记TRFIA方法具有高灵敏度、高特异性、高准确率、方便快捷等优点,可作为预警脓毒症发生、预测脓毒症病情程度及临床预后的一种新的实验室检测方法。

犬冠状病毒时间分辨免疫荧光分析方法的建立及初步应用

探索建立犬冠状病毒(CCV)的时间分辨免疫荧光分析(TRFIA)方法并制备试剂盒,并对试剂盒的性能进行初步的评价。本研究将抗CCV的单克隆抗体(MAb)8D6作为包被抗体,用Eu^(3+)标记的7E10 mAb作为检测抗体,制备双抗体夹心法TRFIA试剂盒,并对试剂盒的准确度、特异性、重复性、稳定性、临床样本检测等性能进行评估。本研究制备的CCV时间分辨免疫荧光试剂盒灵敏度为0.68 ng/mL;各浓度CCV标准品在不同水平的稀释度回收率在94.6%~105.6%;同步检测CPV、CD、CPIV、CAV-1标准品均为阴性,特异性好;批内CV为1.91%~5.03%,批间CV为1.82%~6.03%,重复性好;试剂盒在4℃保存6个月,37℃保存7 d后,试剂盒各项性能均无明显变化;临床样本检测结果与RT-PCR方法结果一致。本研究制备的CCV TRFIA试剂盒具有灵敏度、准确度高,重复性、稳定性良好的优点,能够对CCV的临床样本进行大量的筛查,为CCV患病犬的早期确诊提供了一种全新的技术手段。

癌胚抗原的时间分辨免疫荧光分析及其诊断试剂的研制

目的：利用时间分辨免疫荧光分析（TRFIA）技术，建立一种人血清癌胚抗原（CEA）的快速全自动检测方法并研制其诊断试剂。方法：采用双抗体夹心法（用1株抗CEA的mAbM86160M用于包被微孔板，另1株抗CEA的mAb M86110M用于标记铕）建立CEA—TRFIA，增强液采用B-二酮体为主的发光增强系统。结果：CEA-TRFIA的线性测量范围为（1～560）μg／L，分析的灵敏度为0．28μg／L，批内和批间的变异系数（CV）分别为7．2％～8．6％和8．9％～13．2％。与AFP，CA12—5、CA19—9和白蛋白均无交叉反应，与CA15—3的交义反应值为1．62μg／L。将1000份血清标本用本法与国外罗氏化学发光试剂盒同时检测，其相关系数（r）为0．946。结论：CEA—TRFIA的各项指标均达到临床检测的要求，可替代国外同类检测试剂盒，用于临床血清CEA水平的测定。

丙型肝炎病毒抗体时间分辨免疫荧光分析及应用评价

为建立抗 -HCV的时间分辨免疫荧光分析法 (IFMA) ,以HCV抗原包被微孔板 ,样品中的抗 -HCV、Eu3 + 标记羊抗人IgG形成夹心 ,以β -二酮体为增强液 ,数据采用Log -Logit函数和四参数Logistc函数数据处理程序处理。结果表明 ,方法的批内和批间CV分别为 3.6 4 %和 4 .39% ,平均回收率 10 5 .5 8% ,可测范围为 1.0 1— 17.34NCU/mL ,灵敏度为 0 .0 3NCU/mL。本法与HB sAg有 0 .2 3%的交叉 ,与HBeAg有 0 .0 4 %的交叉。 2 78例正常对照组血清抗 -HCV浓度均小于1NCU/mL。结果提示 ,高度灵敏、稳定的抗

人甲胎蛋白时间分辨免疫荧光分析试剂盒的研制

目的研制人甲胎蛋白(hAFP)时间分辨免疫荧光分析(TRFIA)试剂盒.方法采用双抗体夹心法建立AFP TRFIA 试剂盒,对试剂盒的各项指标进行评价.结果试剂盒的可测范围为l～1 000 U/ml,灵敏度为0.17 U/ml,精密度良好,批内和批间的精密度分别为3.3%～5.9%,3.7%～6.5%.与CEA、CA12-5、CA19-9、CA15-3、白蛋白无交叉反应.稳定性试验表明试剂可以在4℃稳定1年,37℃稳定7 d.426份正常血清标本测试该试剂盒的正常参考值范围是0～12 U/ml.用本试剂盒与国外同类试剂盒同时检测60份血清标本,其相关系数为0.995.结论试剂盒各项指标(灵敏度、精密度、特异性、稳定性、准确度)均达到临床检测要求,可替代国外同类产品试剂盒.

一种基于时间分辨免疫荧光法的免疫分析仪检测降钙素原的性能评估

目的评估一种基于时间分辨免疫荧光法的免疫分析仪检测降钙素原(PCT)的性能。方法采用第三方质控品朗道PCT质控品两个水平(高值和低值)对其进行精密度检测。分别采用朗道高值质控品和患者混合高值血浆对其进行线性检测。选取103例患者的血液标本,与参考方法生物梅里埃VIDAS 30进行方法学比对。结果精密度方面,朗道两个水平的质控待评估方法变异系数均<10%。线性方面,采用朗道高值质控和患者混合高值血浆来检测线性范围,待考核方法检测值与理论值的r2均达到>0.99的要求。采用临床标本进行相关性分析时,测量结果的差值对均值的Bland-Altman分析及测量结果比值对均值的Bland-Altman分析显示二者的相关性较好。待考核方法与VIDAS 30的Spearman相关系数为0.98,P<0.000 1。结论待考核方法定量检测全血PCT,操作简便,具有较好的精密度,在检测临床标本时与生物梅里埃VIDAS 30检测PCT有较好的一致性,适用于急诊检查和床旁检测。

总PSA时间分辨免疫荧光分析法的建立

利用时间分辨免疫荧光分析(TRFIA)技术建立人血清总PSA(前列腺特异性抗原)的快速全自动检测方法及其诊断试剂研制,该法采用双抗体夹心法建立tPSA-TRFIA,对该法和研制试剂的指标评价表明:方法的线性测量范围为0.50～250μg/L,灵敏度为0.06μg/L,批内批间的精密度分别为5.58%～9.71%,6.49%～12.12%。与CEA、CA12-5、CA15-3、CA19-9、AFP无交叉反应。353份血清标本用本试剂与国外其他试剂同时检测,其相关性达到94.4%,结果表明,试剂测定各项指标均达到临床检测要求,可替代国外同类产品。

化学发光免疫分析法和时间分辨免疫荧光法定量检测不同浓度HBsAg的对比分析

目的以雅培全自动化学发光免疫分析法(CMIA法)为标准,探讨时间分辨免疫荧光法(TRIFA)检测血清乙型肝炎表面抗原(HBsAg)的准确性和可行性,以便基层医院普遍开展此项目,为抗病毒个体化的策略及疗效的预测提供依据。方法分别用CMIA法和TRIFA法对157份乙型肝炎病毒(HBV)感染患者的血清进行检测,对于HBsAg滴度超过检测上限的样本,采用稀释液手动稀释后,再进行定量分析。将HBsAg水平分为4组:≤100 IU/mL、101~1 000 IU/mL、1 001~20 000 IU/mL、>20 000 IU/mL,分析两种方法阳性标本定量相关性。结果两种方法的直线回归方程为:Y=2.323X-896.3,相关系数r=0.943,P<0.001。以CMIA法检测值为参考,分为4组进行分析,结果显示在检测低浓度HBsAg样本时,TRIFA数值较CMIA法偏低,而高浓度样本以CMIA法检测值偏高。两种试剂在检测不同浓度的HBsAg均有较好的一致性(均P<0.05),其中以浓度在1 001~20 000 IU/mL时相关性最好。结论两种试剂在HBsAg定量检测上的准确性基本相当,定量相关性以检测值在1 001~20 000 IU/mL之间最佳。TRIFA成本低廉、易操作,更适于基层医院使用,具有广泛的应用前景。

伏马毒素B1时间分辨免疫荧光检测试剂盒的研制

目的:为快速检测食品中的伏马毒素B1(fumonisin B1,FB1),制备抗FB1的单克隆抗体并利用该抗体研制基于时间分辨免疫荧光分析方法的检测试剂盒。方法:在建立抗伏马毒素B1单克隆杂交瘤细胞株的基础上,采用小鼠腹腔注射法生产大量腹水,经Protein A亲和层析柱分离纯化、透析后得到单克隆抗体,利用所得抗体建立间接竞争性时间分辨免疫荧光分析试剂盒并优化各参数:线性范围、检出限及与黄曲霉毒素(aflatoxins,AFB1)、呕吐毒素(deoxynivalenol,DON)和载体蛋白BSA等的交叉反应性;对试剂盒稳定性采用37℃破坏实验;采用3个浓度的加标回收试验确定回收率;对19份样品及FB1玉米盲样进行检测,并同时用市售ELISA试剂盒进行验证。结果:所研制试剂盒的最低检出浓度为2ng/mL,检测线性范围为2～512ng/mL,线性方程2为Y=-0.644X+12.872(R=0.998),50%抑制浓度为10.07ng/mL,加标提取后,玉米样品3个加标水平的回收率在78.32%～116.76%之间,与AFB1、DON和BSA均无交叉反应性,试剂盒常温下可保存315d以上。结论:本研究建立了快速、敏感检测FB1的时间分辨免疫荧光检测试剂盒。

溶血对时间分辨免疫荧光分析法测定胰岛素的影响

目的探讨溶血对时间分辨免疫荧光分析法测定胰岛素的影响。方法收集30例未发生溶血的血清标本,利用低渗溶血法分别制备轻度溶血、中度溶血、重度溶血标本各10例;采用时间分辨免疫荧光分析法分别测定各组标本溶血前(0h)和溶血后0.5、2、18h的胰岛素浓度;通过配对t检验、重复测量数据的方差分析对溶血程度和时间对胰岛素浓度检测结果的影响进行分析。结果轻度溶血、中度溶血、重度溶血标本之间胰岛素浓度检测结果比较差异无统计学意义(P>0.05);随着溶血时间的延长,胰岛素浓度呈明显下降趋势,0.5、2、18h检测结果与0h检测结果相比,比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论溶血程度对时间分辨免疫荧光分析法测定胰岛素浓度的影响不明显,但溶血时间则对测定结果具有较为明显的影响;标本溶血和溶血时间均为影响胰岛素浓度检测结果的重要因素。

时间分辨免疫荧光法测定食物中鸡蛋过敏原蛋白成分

目的:建立双抗体夹心时间分辨免疫荧光法(TRFIA)用于测定食物中鸡蛋过敏原蛋白成分,为进出口食品鸡蛋过敏原成分检测提供技术基础。方法:提取鸡蛋过敏原总蛋白,免疫小鼠获得多克隆抗体,并以此抗体包被酶标板,采用生物素标记抗鸡蛋过敏原总蛋白抗体、Eu3+标记的链酶亲和素和以β-二酮体为主的增强液等试剂,建立双抗夹心TRFIA方法,用于检测10种食品中是否含有鸡蛋蛋白成分。结果:鸡蛋总蛋白SDS-PAGE显示带大致有10条,其中主要条带有4条,分子量分别为71、55、38、14kDa;成功地研制出双抗体夹心TRFIA法检测食品中鸡蛋过敏原蛋白成分,具有特异性,其最低检出限为0·625ng/mL,标准曲线在12·5～640ng/mL范围内线性良好;8种食品检测结果与食物过敏原标签标注内容相符,而2种标示不详的食品检测结果均呈现阳性。结论:初步建立了检测食品中鸡蛋过敏原蛋白成分的双抗体夹心TRFIA,具有较好的特异性和灵敏度;该方法对于未标注鸡蛋过敏原成分的食品检测具有一定的实际应用价值。

时间分辨免疫荧光法定量检测癌胚抗原(CEA)试剂临床应用研究

目的对自制时间分辨免疫荧光法定量检测癌胚抗原(CEA)试剂盒进行临床应用研究,为该试剂盒临床应用及临床疗效评价提供科学依据。方法收集血清标本326份,用自制试剂盒按试剂盒操作说明书对血样进行测定,并以化学发光法(R oche)为对照方法,W ALLAC公司的CEA时间分辨免疫测定药盒(A u toDELF IATMhCEA)作为复核试验,获取相关目标实验数据,并计算得“真实性”和“可靠性”等统计学数据。结果以化学发光法为对照试验,其阳性符合率为95.83%,阴性符合率为98.73%,检验无显著性差异;自制试剂盒的定量测定值与化学发光法的测定值较为一致,相关系数达0.93,相关性好。结论试剂盒检测性能与现在临床广泛应用的方法相仿,能满足临床应用的需要。

游离雌三醇时间分辨免疫荧光分析法的建立

目的建立游离雌三醇(uE_3)时间分辨免疫荧光分析(TRFIA)方法。方法采用竞争抑制一步法建立检测uE_3的TRFIA分析方法,并对该试剂的各项性能指标进行评价。结果该方法的灵敏度为0.14nmol/L,线性范围为0.14～120nmol/L,回收率为97.7%。分析内和分析间变异系数分别为1.6%～4.1%和4.4%～8.8%。与E_2、孕酮和睾酮的交叉反应率分别为0.24%、0.36%和0.40%。149份血样用本试剂与进口的同类试剂同时检测,其相关系数为0.925。结论试剂盒各项指标均达到临床检测要求,可替代国外同类产品试剂盒。

时间分辨免疫荧光法用于梅毒抗体测定的探讨

目的通过对时间分辨免疫荧光法(TRFIA),酶联免疫吸附试验(ELISA),明胶颗粒凝集试验(TPPA)三种方法测定梅毒特异性抗体(TP)的比较,并对TRFIA法的特异性、灵敏度、线性进行方法学评价,探讨临床常规使用TRFIA方法检测梅毒特异性抗体的可行性。方法对2012年1月至2012年7月我院256名门诊患者标本分别用TRFIA、ELISA、TPPA三种方法测定TP,并对TRFIA检测系统的灵敏度、批内,批间精密度、线性范围进行测定。结果TRFIA与TPPA法检测相比其灵敏度为100%,特异性为98.2%。TP阴阳性结果,经配对卡方检验P>0.05,三种方法无统计学差别。最低检测浓度0.15NCU,相关系数分别为0.95、0.999,高、中、低三种浓度血清的批内、批间精密度CV<10%。结论 TRFIA法测定TP灵敏度、特异性、方法性能、相关性均好,可作为临床TP常规筛查方法。

时间分辨免疫荧光法定量检测甲胎蛋白(AFP)试剂的性能研究

目的在成功建立时间分辨免疫荧光法定量检测甲胎蛋白(AFP)反应模式并确定该检测试剂盒的生产工艺后,对该试剂盒的产品性能进行测定和评估。方法按试剂盒操作说明书对试剂盒的准确度、精密度、剂量-反应曲线、最低检测量、稳定性、特异性等指标进行测定。结果试剂盒准确度好,其线性检测范围为1～1000IU/ml,最低检测量为0.11IU/ml,分析内精密度<5%,分析间精密度<10%。CEA(1000ng/ml)、CA125(600IU/ml)、CA15-3(500IU/ml)、CA19-9(500IU/ml)及白蛋白(1000ng/ml)与本试剂盒AFP的交叉反应值分别为0.35、0.28、0.25、0.31、0.42IU/ml。结论试剂盒各项性能指标均达到相关检定要求,满足临床检测的需要。

CA125时间分辨免疫荧光分析法及其临床应用

以 CA1 2 5单克隆抗体包被微孔板 ,用平衡饱和法与 CA1 2 5、Eu3+标记异硫氰酸苄基二乙烯三胺四乙酸 -CA1 2 5单抗形成三层夹心 ,以β-二酮体为增强液 ,建立 CA1 2 5的时间分辩免疫荧光分析法 ( IFMA)。方法的批内和批间 CV分别为 2 .4 5%、2 .66% ,平均回收率 1 0 4 .2 9% ,灵敏度 3.2 7U/L,可测范围为 6.0 5-2 0 62 U/L。本法与 CEA无交叉 ,与 AFP有 6.77%的交叉 ,与β-HCG有 1 0 .89%的交叉。 84名健康女性血清 CA1 2 5浓度为 1 1 .4 2± 1 2 .2 0 U/L,34例卵巢癌患者血清 CA1 2 5浓度为 334 .33± 376.66U/L,与对照组比较有高度显著性差异 ( P<0 .0 1 )。血清样品测定结果与酶免疫分析 ( ELISA)和化学发光免疫分析 ( CLIA)测定结果呈相关 ,其相关系数 ( r)分别为 0 .888和 0 .899。诊断试验结果表明 ,CA1 2 5IFMA的敏感度、特异性。

C-肽时间分辨免疫荧光分析方法的建立

目的探讨抗-C-肽-Eu3+双抗体夹心时间分辨免疫荧光分析技术(TRIFMA),建立新的C-肽检测技术,提高C-肽检测方法的灵敏度。方法用抗-C-肽包被反应孔,依次加入一定体积标准品及待测样本,其中的C-肽与已包被的抗-C-肽-C-肽复合物,再加入标志物(抗-C-肽-Eu3+),形成C-肽-Eu3+的复合物。复合物上的Eu3+被增强液解离到溶液中,并与增强液中的有效成分形成高荧光强度的螯合物,荧光强度与标准品、待测样本中的C-肽浓度成正比。结果本方法最低检测值为0.5μg/ml,检测范围为0.5～45.0μg/ml,并与胰岛素、胰岛素原无交叉反应。结论用于快速准确协助判断胰岛B细胞功能,区分胰岛素依赖型糖尿病和非依赖型糖尿病,诊断胰岛素瘤等有指导性意义。

时间分辨免疫荧光法和放射免疫法测定血清C-肽的偏差评估

目的比较时间分辨免疫荧光法和放射免疫法检测血清C-肽结果的一致性,并对其进行偏差评估。方法依据美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)EP9-A文件要求,每天选取临床样本8份,分别用2种方法测定血清C-肽,连续测定5 d。以放射免疫法(X)为对比方法,时间分辨免疫荧光法(Y)为评价方法,对测定结果计算回归方程、t检验、配对秩和检验和偏差评估。结果 2种方法测定结果的回归方程为Y^=0.993 0X+0.027 2,相关系数(r)=0.987 5(P<0.001)。C-肽含量在0.4、0.5、1.0、5.0、10.0 ng/mL时,时间分辨免疫荧光法相对于放射免疫法的偏差分别为6.10%、4.75%、2.02%、-0.16%、-0.43%。结论 C-肽水平≥0.4 ng/mL时,时间分辨免疫荧光法与放射免疫法检测血清C-肽具有很好的相关性;C-肽水平<0.4 ng/mL时,两法的相对偏差较大。