溶血对时间分辨免疫荧光分析法测定胰岛素的影响

目的探讨溶血对时间分辨免疫荧光分析法测定胰岛素的影响。方法收集30例未发生溶血的血清标本,利用低渗溶血法分别制备轻度溶血、中度溶血、重度溶血标本各10例;采用时间分辨免疫荧光分析法分别测定各组标本溶血前(0h)和溶血后0.5、2、18h的胰岛素浓度;通过配对t检验、重复测量数据的方差分析对溶血程度和时间对胰岛素浓度检测结果的影响进行分析。结果轻度溶血、中度溶血、重度溶血标本之间胰岛素浓度检测结果比较差异无统计学意义(P>0.05);随着溶血时间的延长,胰岛素浓度呈明显下降趋势,0.5、2、18h检测结果与0h检测结果相比,比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论溶血程度对时间分辨免疫荧光分析法测定胰岛素浓度的影响不明显,但溶血时间则对测定结果具有较为明显的影响;标本溶血和溶血时间均为影响胰岛素浓度检测结果的重要因素。

百日咳毒素S1亚基蛋白时间分辨免疫荧光分析法的建立及应用

目的建立铕(Eu3+)标记检测百日咳毒素S1亚基蛋白时间分辨免疫荧光分析法。方法利用原核重组表达系统表达百日咳毒素S1亚基蛋白,并鉴定,采用双抗体夹心法建立检测S1 TRFIA分析方法。结果自制S1试剂盒检测灵敏度2.5 ng/ml,与其他抗原无交叉反应,并初步可应用于百日咳疫苗中免疫原的监测。结论自制百日咳毒素S1亚基蛋白时间分辨免疫荧光分析法能够较为可靠的监控百日咳疫苗质量。

检测游离β-HCG时间分辨免疫荧光分析法的建立及临床应用

目的建立一种快速灵敏的时间分辨免疫荧光分析法（TRFIA）,用于定量检测孕妇血清中游离β人绒毛膜促性腺激素（β-HCG）的浓度。方法包被游离β-HCG单克隆抗体,铕（Eu3＋）标记抗β-HCG单克隆抗体,建立双抗体夹心法游离β-HCG TRFIA,对该试剂的各项指标进行评价。结果最低检测量〈0.06 ng/mL;线性检测范围为0.052-400 ng/mL;分析内和分析间变异系数分别为1.0%-6.4%、3.3%-5.1%;人黄体生成素（HLH）、人促甲状腺素（HTSH）、人促卵泡激素（HFSH）和人绒毛膜促性腺激素（HCG）与本试剂的交叉反应率分别为0.04%、0.03%、0.05%和0.11%;1 043份孕妇血样用该试剂与进口同类试剂同时检测,2种试剂检测值具有显著相关性（r=0.990,P=0.000）;血清样本2-8℃储存超过3 d,室温储存1 d或冻融2次,与新鲜样本比较,游离β-HCG浓度显著性增加（P〈0.05）。结论该试剂敏感性高、特异性强、操作简便快捷,具有良好的精密度,可以替代进口试剂用于临床样本的检测。为保证结果的可靠性,应注意样本的保存条件。

总PSA时间分辨免疫荧光分析法的建立

利用时间分辨免疫荧光分析(TRFIA)技术建立人血清总PSA(前列腺特异性抗原)的快速全自动检测方法及其诊断试剂研制,该法采用双抗体夹心法建立tPSA-TRFIA,对该法和研制试剂的指标评价表明:方法的线性测量范围为0.50～250μg/L,灵敏度为0.06μg/L,批内批间的精密度分别为5.58%～9.71%,6.49%～12.12%。与CEA、CA12-5、CA15-3、CA19-9、AFP无交叉反应。353份血清标本用本试剂与国外其他试剂同时检测,其相关性达到94.4%,结果表明,试剂测定各项指标均达到临床检测要求,可替代国外同类产品。

游离雌三醇时间分辨免疫荧光分析法的建立

目的建立游离雌三醇(uE_3)时间分辨免疫荧光分析(TRFIA)方法。方法采用竞争抑制一步法建立检测uE_3的TRFIA分析方法,并对该试剂的各项性能指标进行评价。结果该方法的灵敏度为0.14nmol/L,线性范围为0.14～120nmol/L,回收率为97.7%。分析内和分析间变异系数分别为1.6%～4.1%和4.4%～8.8%。与E_2、孕酮和睾酮的交叉反应率分别为0.24%、0.36%和0.40%。149份血样用本试剂与进口的同类试剂同时检测,其相关系数为0.925。结论试剂盒各项指标均达到临床检测要求,可替代国外同类产品试剂盒。

酶联免疫法、金标法、时间分辨免疫荧光分析法测定HBsAg对比分析

目的探讨酶联免疫法、金标法、时间分辨免疫荧光分析法三种方法测定HBsAg的可靠性及优缺点。方法通过对1500名体检及临床标本用三种方法检测HBsAg，对其检测结果的准确度、灵敏度、特异性进行对比。结果三种方法在准确度、灵敏度、特异性方面酶联免疫法最低，金标法其次，时间分辨免疫荧光分析法最高。结论酶联免疫法检测HBsAg操作简便，可用于自动化分析，适用于大量标本的定性检测，如大量人群的乙肝筛查；金标法检测HBsAg操作简便快速，无需特殊仪器设备。适用于单份标本的定性测定，适用于急诊、社区诊所及家庭化验；时间分辨免疫荧光分析法检测HBsAg动态检测范围广、试剂稳定、自动化程度高，最有发展前途，但对实验室条件和操作人员条件要求高，适用于HBsAg定量检测。

CA125时间分辨免疫荧光分析法及其临床应用

以 CA1 2 5单克隆抗体包被微孔板 ,用平衡饱和法与 CA1 2 5、Eu3+标记异硫氰酸苄基二乙烯三胺四乙酸 -CA1 2 5单抗形成三层夹心 ,以β-二酮体为增强液 ,建立 CA1 2 5的时间分辩免疫荧光分析法 ( IFMA)。方法的批内和批间 CV分别为 2 .4 5%、2 .66% ,平均回收率 1 0 4 .2 9% ,灵敏度 3.2 7U/L,可测范围为 6.0 5-2 0 62 U/L。本法与 CEA无交叉 ,与 AFP有 6.77%的交叉 ,与β-HCG有 1 0 .89%的交叉。 84名健康女性血清 CA1 2 5浓度为 1 1 .4 2± 1 2 .2 0 U/L,34例卵巢癌患者血清 CA1 2 5浓度为 334 .33± 376.66U/L,与对照组比较有高度显著性差异 ( P<0 .0 1 )。血清样品测定结果与酶免疫分析 ( ELISA)和化学发光免疫分析 ( CLIA)测定结果呈相关 ,其相关系数 ( r)分别为 0 .888和 0 .899。诊断试验结果表明 ,CA1 2 5IFMA的敏感度、特异性。

溶血对时间分辨免疫荧光分析法测定胰岛素的影响

目的分析不同程度溶血对时间分辨免疫荧光分析法检测胰岛素结果的影响。方法选择健康成年体检者未发生溶血的300例血液标本,利用低渗溶血法分别制备出不同程度溶血标本,其中:轻度溶血100例、中度溶血100例、重度溶血标本100例;均采用时间分辨免疫荧光分析法对以上三组不同程度溶血标本分别检测其溶血前后的血清胰岛素水平;并进行组间对比分析。结果各组未溶血前检测结果与轻、中、重度溶血后比较,差异具有统计学意义(P<0.05);且轻、中、重度溶血标本间血清胰岛素水平检测结果比较,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论溶血对临床测定血清胰岛素水平具有较明显的影响,因此,在进行临床血清胰岛素水平检测时须尽量避免溶血现象发生。

乙肝肝炎病毒检测中荧光定量PCR法与时间分辨免疫荧光的对比分析

探析荧光定量PCR法与时间分辨免疫荧光在乙肝肝炎病毒检测中的应用效果。方法 选用96例疑似乙肝患者,均进行荧光定量PCR法与时间分辨免疫荧光病毒检测,以细菌培养作为金标准,比较不同检测手段的阳性检出率、检验结果及检测效能。结果 荧光定量PCR法的检测符合率、灵敏度,高于时间分辨免疫荧光法,而特异度低于时间分辨免疫荧光法。结论 荧光定量PCR法和时间分辨免疫荧光两种方法各有优缺点,适用于不同的检测环境和需求。在实际应用中,需要根据检测要求和实际情况进行选择,确保有效性和准确性。

FQ-PCR检测乙型肝炎病毒DNA与时间分辨免疫荧光法检测乙肝五项在乙肝诊断中的应用价值

目的探讨荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测乙型肝炎病毒(HBV)-DNA与时间分辨免疫荧光法检测乙肝五项在乙肝诊断中的应用价值。方法选择2021年1月至2023年10月本院接收的82例疑似乙肝患者作为研究对象,均通过FQ-PCR实施HBV-DNA检测,同时予以时间分辨免疫荧光法检测乙肝五项[乙肝病毒核心抗体(HBcAb)、乙肝病毒e抗体(HBeAb)、乙肝病毒e抗原(HBeAg)、乙肝表面抗原(HBsAg)、乙肝表面抗体(HBsAb)],并分析检测结果。结果82例患者中,HBV-DNA阳性率为70.73%(58/82)。82例患者中,组合A(HBcAb+HBeAg+HBsAg阳性)占比91.46%(75/82),组合B(HBeAb+HBsAg阳性)占比63.41%(52/82),组合C(HBcAb+HBeAb+HBsAg阳性)占比37.80%(31/82),组合D(HBcAb+HBeAb+HBsAb阳性)占比6.10%(5/82),组合E(HBeAg+HBsAg阳性)占比64.63%(53/82)。组合A、组合B、组合C、组合D、组合E中HBV-DNA阳性率分别为53.33%(40/75)、7.69%(4/52)、29.03%(9/31)、40.00%(2/5)、5.66%(3/53),组合A中HBV-DNA阳性率均高于其他各项组合,差异具有统计学意义(P<0.05)。FQ-PCR检测HBV-DNA联合时间分辨免疫荧光法检测乙肝五项诊断乙肝的准确度、灵敏度高于单独FQ-PCR检测HBV-DNA及时间分辨免疫荧光法检测乙肝五项,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论在乙肝诊断中,FQ-PCR检测HBV-DNA与时间分辨免疫荧光法检测乙肝五项各具优势,积极联合应用有助于进一步提升诊断效能。

犬冠状病毒时间分辨免疫荧光分析方法的建立及初步应用

探索建立犬冠状病毒(CCV)的时间分辨免疫荧光分析(TRFIA)方法并制备试剂盒,并对试剂盒的性能进行初步的评价。本研究将抗CCV的单克隆抗体(MAb)8D6作为包被抗体,用Eu^(3+)标记的7E10 mAb作为检测抗体,制备双抗体夹心法TRFIA试剂盒,并对试剂盒的准确度、特异性、重复性、稳定性、临床样本检测等性能进行评估。本研究制备的CCV时间分辨免疫荧光试剂盒灵敏度为0.68 ng/mL;各浓度CCV标准品在不同水平的稀释度回收率在94.6%~105.6%;同步检测CPV、CD、CPIV、CAV-1标准品均为阴性,特异性好;批内CV为1.91%~5.03%,批间CV为1.82%~6.03%,重复性好;试剂盒在4℃保存6个月,37℃保存7 d后,试剂盒各项性能均无明显变化;临床样本检测结果与RT-PCR方法结果一致。本研究制备的CCV TRFIA试剂盒具有灵敏度、准确度高,重复性、稳定性良好的优点,能够对CCV的临床样本进行大量的筛查,为CCV患病犬的早期确诊提供了一种全新的技术手段。

单纯疱疹病毒IgM抗体(1+2型)时间分辨免疫荧光分析法的建立

目的利用时间分辨免疫荧光分析法研制单纯疱疹病毒IgM抗体(1+2型)检测试剂盒。方法基于"捕获法"原理,在96孔酶标板上包被抗人IgM单克隆抗体,铕标记特异性单纯疱疹病毒1型和2型单克隆抗体作为示踪物,建立单纯疱疹病毒IgM抗体(1+2型)检测试剂,并对自研试剂盒的各项性能进行评价,与同类试剂盒进行方法学比对试验。结果自研试剂盒的灵敏度与ELISA比较有较大的提高,分析内变异系数≤4.29%,分析间变异系数≤6.15%;血清盘检测结果与该血清盘说明书提供的Gull IFA试剂的测试结果一致;与进口酶免法试剂同时检测293份临床样本,自制试剂盒的临床敏感性达100%,临床特异性达98.88%,Kappa值为0.940(P<0.001)。结论自研试剂盒灵敏度高、特异性强、精密度好,与商业化的同类产品检测结果一致性好,能满足临床应用的需要。

BNP和IL-6双标记时间分辨免疫荧光检测方法的建立及初步应用

目的研制一种脑钠肽(BNP)、白细胞介素-6(IL-6)的双标记时间分辨免疫荧光分析方法(TRFIA)并对其性能进行初步评价。方法将抗BNP和IL-6单克隆抗体(MAb)作为包被抗体包被在96孔板,用Eu3+和Sm3+分别标记另一配对抗体作为检测抗体,建立双抗体夹心TRFIA分析法并制备成试剂盒。进行灵敏度、准确度、重复性、特异性、稳定性和临床样本比对等实验评价其检测性能。结果制备的双标记时间分辨免疫荧光试剂盒对BNP检测的线性范围为10 pg/mL~5000 pg/mL,灵敏度为8.65 pg/mL,对IL-6检测的线性范围为1 pg/mL~1000 pg/mL,灵敏度为5.36 pg/mL。BNP的回收率在91.49%~99.16%,批内CV在5.73%~8.96%,批间CV在8.42%~11.73%;IL-6的回收率在93.95%~111.50%,批内CV在7.32%~10.07%,批间CV在9.40%~11.30%。与血清中常见的脓毒血症检测指标均无明显的交叉反应。试剂盒能够在4℃稳定保存半年,37℃稳定保存7 d。对临床样本的检测发现,该方法参考区间Cut-off值BNP:46.01 pg/mL,IL-6:13.62 pg/mL;检测结果与临床诊断结果一致,准确性较好。结论建立的BNP和IL-6双标记TRFIA方法具有高灵敏度、高特异性、高准确率、方便快捷等优点,可作为预警脓毒症发生、预测脓毒症病情程度及临床预后的一种新的实验室检测方法。

一种基于时间分辨免疫荧光法的免疫分析仪检测降钙素原的性能评估

目的评估一种基于时间分辨免疫荧光法的免疫分析仪检测降钙素原(PCT)的性能。方法采用第三方质控品朗道PCT质控品两个水平(高值和低值)对其进行精密度检测。分别采用朗道高值质控品和患者混合高值血浆对其进行线性检测。选取103例患者的血液标本,与参考方法生物梅里埃VIDAS 30进行方法学比对。结果精密度方面,朗道两个水平的质控待评估方法变异系数均<10%。线性方面,采用朗道高值质控和患者混合高值血浆来检测线性范围,待考核方法检测值与理论值的r2均达到>0.99的要求。采用临床标本进行相关性分析时,测量结果的差值对均值的Bland-Altman分析及测量结果比值对均值的Bland-Altman分析显示二者的相关性较好。待考核方法与VIDAS 30的Spearman相关系数为0.98,P<0.000 1。结论待考核方法定量检测全血PCT,操作简便,具有较好的精密度,在检测临床标本时与生物梅里埃VIDAS 30检测PCT有较好的一致性,适用于急诊检查和床旁检测。

γ-干扰素时间分辨免疫荧光分析方法的建立

采用生物素 Ｅｕ３ ＋ 标记链亲和素双抗体夹心时间分辨免疫荧光分析技术 （ Ｔ Ｒ Ｉ Ｆ Ｍ Ａ） ， 建立新的γ干扰素检测技术， 提高γ干扰素检测方法的灵敏度． 用固相包被的兔多抗捕获样品中 Ｉ Ｆ Ｎγ， 以具有中和 Ｉ Ｆ Ｎγ抗病毒活性的生物素化单抗作为二抗体， 再加 Ｅｕ３ ＋ 标记链亲和素并荧光检测． 已知不同浓度标准 Ｉ Ｆ Ｎγ Ｃ Ｐ Ｓ 值的标准曲线， 判断待检样品中 Ｉ Ｆ Ｎγ量． 本方法最低检测值为００２ μｇ／ Ｌ， 检测范围为００２ ～４００ μｇ／ Ｌ， 而 Ｔ Ｎ Ｆα， Ｉ Ｌ２ 和 Ｉ Ｆ Ｎα等细胞因子无交叉反应． 对基因工程 Ｉ Ｆ Ｎγ的生产， 纯化过程中定性， 定量监控以及对培养细胞上清中 Ｉ Ｆ

化学发光免疫分析法和时间分辨免疫荧光法定量检测不同浓度HBsAg的对比分析

目的以雅培全自动化学发光免疫分析法(CMIA法)为标准,探讨时间分辨免疫荧光法(TRIFA)检测血清乙型肝炎表面抗原(HBsAg)的准确性和可行性,以便基层医院普遍开展此项目,为抗病毒个体化的策略及疗效的预测提供依据。方法分别用CMIA法和TRIFA法对157份乙型肝炎病毒(HBV)感染患者的血清进行检测,对于HBsAg滴度超过检测上限的样本,采用稀释液手动稀释后,再进行定量分析。将HBsAg水平分为4组:≤100 IU/mL、101~1 000 IU/mL、1 001~20 000 IU/mL、>20 000 IU/mL,分析两种方法阳性标本定量相关性。结果两种方法的直线回归方程为:Y=2.323X-896.3,相关系数r=0.943,P<0.001。以CMIA法检测值为参考,分为4组进行分析,结果显示在检测低浓度HBsAg样本时,TRIFA数值较CMIA法偏低,而高浓度样本以CMIA法检测值偏高。两种试剂在检测不同浓度的HBsAg均有较好的一致性(均P<0.05),其中以浓度在1 001~20 000 IU/mL时相关性最好。结论两种试剂在HBsAg定量检测上的准确性基本相当,定量相关性以检测值在1 001~20 000 IU/mL之间最佳。TRIFA成本低廉、易操作,更适于基层医院使用,具有广泛的应用前景。

时间分辨免疫荧光法分析CEA的条件研究

报道了应用时间分辨免疫荧光氏分析血清中ＣＥＡ的条件研究。用我们研制的Ｎ￣１－（对－异硫氰基苄基）－二乙三胺－Ｎ￣１，Ｎ￣２，Ｎ￣３，Ｎ￣３－四乙酸铕为螯合剂，用Ｅｕ标记了抗ＣＥＡ单克隆抗体（ＭｃＡｂ）Ｃ＿（１７）。在免疫分析程序中，对包被的ＭｃＡｂ的种类、浓度和封闭时间、第一和第二次反应的温育时间、标记Ｃ＿（１７）的浓度、分析缓冲液等主要实验条件，进行了实验最佳化选择。分析方法的灵敏度为１ｎｇ／ｍｌ。

C-肽时间分辨免疫荧光分析方法的建立

目的探讨抗-C-肽-Eu3+双抗体夹心时间分辨免疫荧光分析技术(TRIFMA),建立新的C-肽检测技术,提高C-肽检测方法的灵敏度。方法用抗-C-肽包被反应孔,依次加入一定体积标准品及待测样本,其中的C-肽与已包被的抗-C-肽-C-肽复合物,再加入标志物(抗-C-肽-Eu3+),形成C-肽-Eu3+的复合物。复合物上的Eu3+被增强液解离到溶液中,并与增强液中的有效成分形成高荧光强度的螯合物,荧光强度与标准品、待测样本中的C-肽浓度成正比。结果本方法最低检测值为0.5μg/ml,检测范围为0.5～45.0μg/ml,并与胰岛素、胰岛素原无交叉反应。结论用于快速准确协助判断胰岛B细胞功能,区分胰岛素依赖型糖尿病和非依赖型糖尿病,诊断胰岛素瘤等有指导性意义。

时间分辨免疫荧光法定量检测血清HBeAg／HBeAb的可行性分析

目的:探讨国产时间分辨免疫荧光法(time-resolved immunofluorescence assay,TRIFA)是否与全自动化学发光免疫分析法(automatic chemiluminescence immunoassay,CMIA)在定量检测HBeAg/HBeAb中具有同样的准确性和特异性。方法:157份来自中南大学湘雅医院感染病科门诊的HBV感染患者的血清标本,分别用CMIA和TRIFA两种方法进行HBeAg定量及HBeAg/HBeAb定性检测,并对结果进行对比分析。结果:两种方法定量检测HBeAg的直线回归方程为:Y=0.72779X–4.0551(r=0.712,P<0.001)。与CMIA比较,TRIFA检测HBeAg定性结果的灵敏度和特异性分别为89.89%和100%,两种方法诊断HBeAg符合率为94.27%。TRIFA检测HBeAb定性结果的灵敏度和特异性分别为100%和95.45%,两种方法诊断HBeAb的符合率为97.45%。结论:TRIFA在HBeAg/HBeAb定量检测上的准确性、灵敏度和特异性与CMIA基本相当,二者HBeAg/HBeAb诊断符合率高。