FQ-PCR检测乙型肝炎病毒DNA与时间分辨免疫荧光法检测乙肝五项在乙肝诊断中的应用价值

目的探讨荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测乙型肝炎病毒(HBV)-DNA与时间分辨免疫荧光法检测乙肝五项在乙肝诊断中的应用价值。方法选择2021年1月至2023年10月本院接收的82例疑似乙肝患者作为研究对象,均通过FQ-PCR实施HBV-DNA检测,同时予以时间分辨免疫荧光法检测乙肝五项[乙肝病毒核心抗体(HBcAb)、乙肝病毒e抗体(HBeAb)、乙肝病毒e抗原(HBeAg)、乙肝表面抗原(HBsAg)、乙肝表面抗体(HBsAb)],并分析检测结果。结果82例患者中,HBV-DNA阳性率为70.73%(58/82)。82例患者中,组合A(HBcAb+HBeAg+HBsAg阳性)占比91.46%(75/82),组合B(HBeAb+HBsAg阳性)占比63.41%(52/82),组合C(HBcAb+HBeAb+HBsAg阳性)占比37.80%(31/82),组合D(HBcAb+HBeAb+HBsAb阳性)占比6.10%(5/82),组合E(HBeAg+HBsAg阳性)占比64.63%(53/82)。组合A、组合B、组合C、组合D、组合E中HBV-DNA阳性率分别为53.33%(40/75)、7.69%(4/52)、29.03%(9/31)、40.00%(2/5)、5.66%(3/53),组合A中HBV-DNA阳性率均高于其他各项组合,差异具有统计学意义(P<0.05)。FQ-PCR检测HBV-DNA联合时间分辨免疫荧光法检测乙肝五项诊断乙肝的准确度、灵敏度高于单独FQ-PCR检测HBV-DNA及时间分辨免疫荧光法检测乙肝五项,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论在乙肝诊断中,FQ-PCR检测HBV-DNA与时间分辨免疫荧光法检测乙肝五项各具优势,积极联合应用有助于进一步提升诊断效能。

乙肝肝炎病毒检测中荧光定量PCR法与时间分辨免疫荧光的对比分析

探析荧光定量PCR法与时间分辨免疫荧光在乙肝肝炎病毒检测中的应用效果。方法 选用96例疑似乙肝患者,均进行荧光定量PCR法与时间分辨免疫荧光病毒检测,以细菌培养作为金标准,比较不同检测手段的阳性检出率、检验结果及检测效能。结果 荧光定量PCR法的检测符合率、灵敏度,高于时间分辨免疫荧光法,而特异度低于时间分辨免疫荧光法。结论 荧光定量PCR法和时间分辨免疫荧光两种方法各有优缺点,适用于不同的检测环境和需求。在实际应用中,需要根据检测要求和实际情况进行选择,确保有效性和准确性。

BNP和IL-6双标记时间分辨免疫荧光检测方法的建立及初步应用

目的研制一种脑钠肽(BNP)、白细胞介素-6(IL-6)的双标记时间分辨免疫荧光分析方法(TRFIA)并对其性能进行初步评价。方法将抗BNP和IL-6单克隆抗体(MAb)作为包被抗体包被在96孔板,用Eu3+和Sm3+分别标记另一配对抗体作为检测抗体,建立双抗体夹心TRFIA分析法并制备成试剂盒。进行灵敏度、准确度、重复性、特异性、稳定性和临床样本比对等实验评价其检测性能。结果制备的双标记时间分辨免疫荧光试剂盒对BNP检测的线性范围为10 pg/mL~5000 pg/mL,灵敏度为8.65 pg/mL,对IL-6检测的线性范围为1 pg/mL~1000 pg/mL,灵敏度为5.36 pg/mL。BNP的回收率在91.49%~99.16%,批内CV在5.73%~8.96%,批间CV在8.42%~11.73%;IL-6的回收率在93.95%~111.50%,批内CV在7.32%~10.07%,批间CV在9.40%~11.30%。与血清中常见的脓毒血症检测指标均无明显的交叉反应。试剂盒能够在4℃稳定保存半年,37℃稳定保存7 d。对临床样本的检测发现,该方法参考区间Cut-off值BNP:46.01 pg/mL,IL-6:13.62 pg/mL;检测结果与临床诊断结果一致,准确性较好。结论建立的BNP和IL-6双标记TRFIA方法具有高灵敏度、高特异性、高准确率、方便快捷等优点,可作为预警脓毒症发生、预测脓毒症病情程度及临床预后的一种新的实验室检测方法。

犬冠状病毒时间分辨免疫荧光分析方法的建立及初步应用

探索建立犬冠状病毒(CCV)的时间分辨免疫荧光分析(TRFIA)方法并制备试剂盒,并对试剂盒的性能进行初步的评价。本研究将抗CCV的单克隆抗体(MAb)8D6作为包被抗体,用Eu^(3+)标记的7E10 mAb作为检测抗体,制备双抗体夹心法TRFIA试剂盒,并对试剂盒的准确度、特异性、重复性、稳定性、临床样本检测等性能进行评估。本研究制备的CCV时间分辨免疫荧光试剂盒灵敏度为0.68 ng/mL;各浓度CCV标准品在不同水平的稀释度回收率在94.6%~105.6%;同步检测CPV、CD、CPIV、CAV-1标准品均为阴性,特异性好;批内CV为1.91%~5.03%,批间CV为1.82%~6.03%,重复性好;试剂盒在4℃保存6个月,37℃保存7 d后,试剂盒各项性能均无明显变化;临床样本检测结果与RT-PCR方法结果一致。本研究制备的CCV TRFIA试剂盒具有灵敏度、准确度高,重复性、稳定性良好的优点,能够对CCV的临床样本进行大量的筛查,为CCV患病犬的早期确诊提供了一种全新的技术手段。

γ-干扰素时间分辨免疫荧光分析方法的建立

采用生物素 Ｅｕ３ ＋ 标记链亲和素双抗体夹心时间分辨免疫荧光分析技术 （ Ｔ Ｒ Ｉ Ｆ Ｍ Ａ） ， 建立新的γ干扰素检测技术， 提高γ干扰素检测方法的灵敏度． 用固相包被的兔多抗捕获样品中 Ｉ Ｆ Ｎγ， 以具有中和 Ｉ Ｆ Ｎγ抗病毒活性的生物素化单抗作为二抗体， 再加 Ｅｕ３ ＋ 标记链亲和素并荧光检测． 已知不同浓度标准 Ｉ Ｆ Ｎγ Ｃ Ｐ Ｓ 值的标准曲线， 判断待检样品中 Ｉ Ｆ Ｎγ量． 本方法最低检测值为００２ μｇ／ Ｌ， 检测范围为００２ ～４００ μｇ／ Ｌ， 而 Ｔ Ｎ Ｆα， Ｉ Ｌ２ 和 Ｉ Ｆ Ｎα等细胞因子无交叉反应． 对基因工程 Ｉ Ｆ Ｎγ的生产， 纯化过程中定性， 定量监控以及对培养细胞上清中 Ｉ Ｆ

C-肽时间分辨免疫荧光分析方法的建立

目的探讨抗-C-肽-Eu3+双抗体夹心时间分辨免疫荧光分析技术(TRIFMA),建立新的C-肽检测技术,提高C-肽检测方法的灵敏度。方法用抗-C-肽包被反应孔,依次加入一定体积标准品及待测样本,其中的C-肽与已包被的抗-C-肽-C-肽复合物,再加入标志物(抗-C-肽-Eu3+),形成C-肽-Eu3+的复合物。复合物上的Eu3+被增强液解离到溶液中,并与增强液中的有效成分形成高荧光强度的螯合物,荧光强度与标准品、待测样本中的C-肽浓度成正比。结果本方法最低检测值为0.5μg/ml,检测范围为0.5～45.0μg/ml,并与胰岛素、胰岛素原无交叉反应。结论用于快速准确协助判断胰岛B细胞功能,区分胰岛素依赖型糖尿病和非依赖型糖尿病,诊断胰岛素瘤等有指导性意义。

检测β-CTX和N-MID水平的双标记时间分辨免疫荧光分析方法的建立和评价

目的:研制一种检测β胶联降解产物(β-CTX)和骨钙素N端中分子片段(N-MID)水平的双标记时间分辨免疫荧光分析方法(TRFIA)并评价其检测性能。方法:将抗β-CTX和N-MID的4E5和2B7单克隆抗体(MAb)作为包被抗体包被在96孔培养板,采用铕离子(Eu^(3+))和钐离子(Sm^(3+))分别标记2G6和5A3 MAb作为检测抗体,建立双抗体夹心TRFIA分析法并制备成试剂盒。通过试剂盒的灵敏度、准确度(稀释回收率)、特异性、精密度、稳定性和临床样本比对等实验评价其检测性能。结果:制备的双标记TRFIA试剂盒对β-CTX的检测灵敏度为0.025μg·L^(-1),线性范围为0.025~5.000μg·L^(-1),对N-MID的检测灵敏度为0.5μg·L^(-1),线性范围为0.5~200.0μg·L^(-1)。β-CTX平均稀释回收率为102.13%,N-MID平均稀释回收率为103.02%,与其他常见骨检测指标无明显交叉反应,特异性较强。β-CTX批内变异系数(CV)为5.81%~7.82%,批间CV为5.97%~8.02%;N-MID批内CV为6.05%~8.32%,批间CV为6.14%~8.56%;TRFIA试剂盒可在4℃稳定保存6个月,37℃稳定保存7 d。结论:建立的双标记TRFIA方法具有高灵敏度、高特异度、高准确率和方便快捷等优点,适用于大批量临床样品的检测。

时间分辨免疫荧光层析快速检测水产品中高效氯氰菊酯方法的建立

高效氯氰菊酯在农业中应用广泛,其中水产品可以富集水系统中的高效氯氰菊酯,并通过食物链,影响人体的健康。本研究通过铕(Eu)颗粒标记氯氰菊酯抗体,研发针对高效氯氰菊酯检测的时间分辨免疫荧光检测卡。在对虾样品中添加高效氯氰菊酯标准品分析检测卡的准确度、精确度等指标时,研究发现氯氰菊酯检测卡的平均相对误差在4.24%~8.66%之间,检测卡的批内变异系数在3.0%~8.6%之间,批间变异系数在4.8%~6.6%之间,最低检测限为0.35 ng/m L,检测范围为1~19.3 ng/m L,四参数拟合曲线决定系数R2=0.999 0;检测卡检测结果与气相色谱检测结果的相对误差在8%~20%之间,线性相关系数R=0.989 9。结果表明本技术方法可以应用于水产品中高效氯氰菊酯的快速定量检测。

降雨时间分辨率与插值方法对城市内涝模拟影响研究

为研究不同时间分辨率降雨资料对模拟结果的影响,使用不同插值方法提高降雨时间分辨率进行城市内涝模拟并确定最佳插值方法。以西安市天福和园小区为研究区域,利用GAST-SWMM耦合模型,选取纳什系数和峰值误差作为评判标准,对研究区域模拟和实测流量过程线进行对比。研究表明:经两场实测降雨过程验证,模型纳什系数分别为0.85和0.81,表明构建的一二维耦合模型精度较高;在本文设置的五种时间分辨率中,当降雨时间分辨率为5 min时,模拟精度最高,随着降雨时间分辨率的降低,模拟流量与实测流量过程线吻合程度逐渐变差,且时间分辨率为60 min时模拟结果最差;选取分形插值、拉格朗日插值、线性插值三种方法,将实测降雨数据时间分辨率从30 min和60 min插值为5 min,模拟结果均显示与实测吻合程度最好的是分形插值方法,拉格朗日插值方法次之,线性插值方法最差。本研究可为用于城市内涝模拟的降雨资料选取及处理提供依据。

犬瘟热病毒时间分辨免疫荧光分析方法的建立及初步应用

为建立犬瘟热病毒(CDV)的时间分辨免疫荧光分析(TRFIA)方法,本研究将抗CDV的3H7单克隆抗体(MAb)作为包被抗体,Eu3+标记2G4 MAb作为检测抗体,建立了检测CDV抗原的双抗体夹心TRFIA分析法,并初步制备成试剂盒。通过灵敏度、准确度(稀释回收率)、特异性、精密度、稳定性、临床样本检测等实验评价其检测性能。结果显示,该双抗体夹心TRFIA分析法对CDV的检测灵敏度为0.58 ng/mL,线性范围在2.5 ng/mL^640 ng/mL,与荧光值有较强的剂量-反应关系;平均稀释回收率为100.48%,与其它常见病毒无明显交叉反应,特异性较强;批内CV值为5.60%~7.58%,批间CV值为5.67%~7.64%;TRFIA试剂盒可在4℃稳定保存半年,37℃稳定保存7 d。与RT-PCR法同时检测65份疑似CDV样本和15份健康样本,2种检测方法的符合率为100%。本研究建立的CDV TRFIA方法具有灵敏度高、特异性强、准确率好、方便快捷等优点,为大批量CDV临床样品的检测提供了可行技术手段。

时间分辨免疫荧光法检测结核感染T细胞释放γ-干扰素的方法建立及初步临床应用

目的建立一种检测结核感染T细胞释放γ-干扰素(IFN-γ)的时间分辨免疫荧光法(TRFIA)及初步临床应用。方法选择73例结核分枝杆菌阳性的肺结核患者,77例结核分枝杆菌阴性的肺结核患者,25例肺外结核患者,52例呼吸道疾病以外的非结核患者,70例非结核呼吸道疾病(含肺癌)患者作为研究对象。利用早期分泌抗原靶蛋白6(ESAT6)和培养滤液蛋白10(CFP-10)作为结核分枝杆菌特异性抗原,刺激患者全血标本中的结核分枝杆菌抗原特异性T细胞释放IFN-γ。植物血凝素L作为有丝分裂原,可非特异地刺激IFN-γ的产生。应用双抗体夹心TRFIA定量测定血浆中的IFN-γ浓度。评价TRFIA检测IFN-γ的精密度、检测低限、生物检测限、功能灵敏度、线性、准确度和特异度等分析性能指标,并与酶联免疫法(ELISA)进行比对试验研究。方法间结果差异比较采用χ~2检验,P<0.05为差异具有统计学意义。结果TRFIA检测IFN-γ的捕获抗体包被浓度为5.0μg/ml,生物素标记抗体使用工作稀释度为1∶1 800和铕标记物使用工作稀释度为1∶500;实验内变异系数(CV)<5%,实验间CV<10%;检测低限0.69pg/ml,生物检测限0.90pg/ml,功能灵敏度1.80pg/ml;线性范围2～5 000pg/ml;检测国际生物标准参考品的偏倚不超过5%;其他常见的细胞因子和常见内源性干扰物(胆红素、血红蛋白和三酰甘油)样本对该方法检测结果无明显影响。TRFIA检测297例临床样本结果判断与临床诊断的一致率可达85.19%;TRFIA与ELISA的结果具有高度一致性(κ=0.9 931),且TRFIA与ELISA的阳性检出率结果差异无统计学意义(χ~2=0,P>0.05)。结论 TRFIA检测IFN-γ的精密度好,灵敏度高,线性范围宽,准确度好,特异度强,临床符合率高,能满足临床检测需要。

癌胚抗原的时间分辨免疫荧光分析及其诊断试剂的研制

目的：利用时间分辨免疫荧光分析（TRFIA）技术，建立一种人血清癌胚抗原（CEA）的快速全自动检测方法并研制其诊断试剂。方法：采用双抗体夹心法（用1株抗CEA的mAbM86160M用于包被微孔板，另1株抗CEA的mAb M86110M用于标记铕）建立CEA—TRFIA，增强液采用B-二酮体为主的发光增强系统。结果：CEA-TRFIA的线性测量范围为（1～560）μg／L，分析的灵敏度为0．28μg／L，批内和批间的变异系数（CV）分别为7．2％～8．6％和8．9％～13．2％。与AFP，CA12—5、CA19—9和白蛋白均无交叉反应，与CA15—3的交义反应值为1．62μg／L。将1000份血清标本用本法与国外罗氏化学发光试剂盒同时检测，其相关系数（r）为0．946。结论：CEA—TRFIA的各项指标均达到临床检测的要求，可替代国外同类检测试剂盒，用于临床血清CEA水平的测定。

犬细小病毒时间分辨免疫荧光分析方法的建立及初步应用

为建立犬细小病毒(CPV)的时间分辨免疫荧光分析(TRFIA)方法并制备试剂盒,本实验采用抗CPV单克隆抗体(MAb)7D5作为包被抗体,Eu3+标记的MAb 2F7作为检测抗体,对各反应条件优化后制备双抗体夹心TRFIA试剂盒。并评价了其灵敏度、准确度、特异性、重复性和稳定性。利用该试剂盒与RT-PCR方法同时检测了疑似患病犬的临床粪便、呕吐物、血液样品(各60份)和CPV阴性犬这3种临床样品各10份,比较并计算二者的符合率。优化结果显示,最佳的TRFIA反应条件为:MAb 7D5的包被浓度为15μg/mL;Eu^(3+)标记试剂与标记MAb 2F7(2.5 mg/mL)最佳体积分别为70μL和30μL;反应体系为25μL CPV标准品或待测样品+200μL分析缓冲液+200μL Eu^(3+)-检测抗体+200μL增强液。灵敏度试验显示TRFIA方法对CPV灭活病毒检测灵敏度为0.83 ng/mL。准确度试验结果显示,不同浓度CPV标准品稀释(1:2、1:4、1:8)后的稀释回收率在89.25%~100.8%;特异性试验结果显示,该方法除对不同亚型CPV的检测结果均为阳性外,对犬瘟热病毒、犬副流感病毒、犬腺病毒I型、犬冠状病毒、猫细小病毒、水貂肠炎病毒等检测均为阴性,无明显交叉反应;对高、中、低3种不同浓度CPV的重复性试验结果显示,批内变异系数为2.34%~4.76%,批间变异系数为2.38%~5.10%;稳定性试验结果显示,该试剂盒至少可在4℃稳定保存6个月,37℃保存7 d;临床样品的检测结果显示,利用该方法从大部分疑似患病犬的粪便、血液以及呕吐物中均检测到了CPV,而CPV阴性犬这3类样品的检测结果均为阴性。本研究建立的TRFIA法和RT-PCR法检测结果一致,符合率达到100%。上述结果表明,本研究制备的CPV TRFIA试剂盒灵敏度准确度高、特异性强、重复性、稳定性好,且可检测的临床样品种类多,为临床样品的检测提供有效技术手段。

丙型肝炎病毒抗体时间分辨免疫荧光分析及应用评价

为建立抗 -HCV的时间分辨免疫荧光分析法 (IFMA) ,以HCV抗原包被微孔板 ,样品中的抗 -HCV、Eu3 + 标记羊抗人IgG形成夹心 ,以β -二酮体为增强液 ,数据采用Log -Logit函数和四参数Logistc函数数据处理程序处理。结果表明 ,方法的批内和批间CV分别为 3.6 4 %和 4 .39% ,平均回收率 10 5 .5 8% ,可测范围为 1.0 1— 17.34NCU/mL ,灵敏度为 0 .0 3NCU/mL。本法与HB sAg有 0 .2 3%的交叉 ,与HBeAg有 0 .0 4 %的交叉。 2 78例正常对照组血清抗 -HCV浓度均小于1NCU/mL。结果提示 ,高度灵敏、稳定的抗

人甲胎蛋白时间分辨免疫荧光分析试剂盒的研制

目的研制人甲胎蛋白(hAFP)时间分辨免疫荧光分析(TRFIA)试剂盒.方法采用双抗体夹心法建立AFP TRFIA 试剂盒,对试剂盒的各项指标进行评价.结果试剂盒的可测范围为l～1 000 U/ml,灵敏度为0.17 U/ml,精密度良好,批内和批间的精密度分别为3.3%～5.9%,3.7%～6.5%.与CEA、CA12-5、CA19-9、CA15-3、白蛋白无交叉反应.稳定性试验表明试剂可以在4℃稳定1年,37℃稳定7 d.426份正常血清标本测试该试剂盒的正常参考值范围是0～12 U/ml.用本试剂盒与国外同类试剂盒同时检测60份血清标本,其相关系数为0.995.结论试剂盒各项指标(灵敏度、精密度、特异性、稳定性、准确度)均达到临床检测要求,可替代国外同类产品试剂盒.

一种基于时间分辨免疫荧光法的免疫分析仪检测降钙素原的性能评估

目的评估一种基于时间分辨免疫荧光法的免疫分析仪检测降钙素原(PCT)的性能。方法采用第三方质控品朗道PCT质控品两个水平(高值和低值)对其进行精密度检测。分别采用朗道高值质控品和患者混合高值血浆对其进行线性检测。选取103例患者的血液标本,与参考方法生物梅里埃VIDAS 30进行方法学比对。结果精密度方面,朗道两个水平的质控待评估方法变异系数均<10%。线性方面,采用朗道高值质控和患者混合高值血浆来检测线性范围,待考核方法检测值与理论值的r2均达到>0.99的要求。采用临床标本进行相关性分析时,测量结果的差值对均值的Bland-Altman分析及测量结果比值对均值的Bland-Altman分析显示二者的相关性较好。待考核方法与VIDAS 30的Spearman相关系数为0.98,P<0.000 1。结论待考核方法定量检测全血PCT,操作简便,具有较好的精密度,在检测临床标本时与生物梅里埃VIDAS 30检测PCT有较好的一致性,适用于急诊检查和床旁检测。

总PSA时间分辨免疫荧光分析法的建立

利用时间分辨免疫荧光分析(TRFIA)技术建立人血清总PSA(前列腺特异性抗原)的快速全自动检测方法及其诊断试剂研制,该法采用双抗体夹心法建立tPSA-TRFIA,对该法和研制试剂的指标评价表明:方法的线性测量范围为0.50～250μg/L,灵敏度为0.06μg/L,批内批间的精密度分别为5.58%～9.71%,6.49%～12.12%。与CEA、CA12-5、CA15-3、CA19-9、AFP无交叉反应。353份血清标本用本试剂与国外其他试剂同时检测,其相关性达到94.4%,结果表明,试剂测定各项指标均达到临床检测要求,可替代国外同类产品。

溶血对时间分辨免疫荧光分析法测定胰岛素的影响

目的探讨溶血对时间分辨免疫荧光分析法测定胰岛素的影响。方法收集30例未发生溶血的血清标本,利用低渗溶血法分别制备轻度溶血、中度溶血、重度溶血标本各10例;采用时间分辨免疫荧光分析法分别测定各组标本溶血前(0h)和溶血后0.5、2、18h的胰岛素浓度;通过配对t检验、重复测量数据的方差分析对溶血程度和时间对胰岛素浓度检测结果的影响进行分析。结果轻度溶血、中度溶血、重度溶血标本之间胰岛素浓度检测结果比较差异无统计学意义(P>0.05);随着溶血时间的延长,胰岛素浓度呈明显下降趋势,0.5、2、18h检测结果与0h检测结果相比,比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论溶血程度对时间分辨免疫荧光分析法测定胰岛素浓度的影响不明显,但溶血时间则对测定结果具有较为明显的影响;标本溶血和溶血时间均为影响胰岛素浓度检测结果的重要因素。

游离雌三醇时间分辨免疫荧光分析法的建立

目的建立游离雌三醇(uE_3)时间分辨免疫荧光分析(TRFIA)方法。方法采用竞争抑制一步法建立检测uE_3的TRFIA分析方法,并对该试剂的各项性能指标进行评价。结果该方法的灵敏度为0.14nmol/L,线性范围为0.14～120nmol/L,回收率为97.7%。分析内和分析间变异系数分别为1.6%～4.1%和4.4%～8.8%。与E_2、孕酮和睾酮的交叉反应率分别为0.24%、0.36%和0.40%。149份血样用本试剂与进口的同类试剂同时检测,其相关系数为0.925。结论试剂盒各项指标均达到临床检测要求,可替代国外同类产品试剂盒。