FQ-PCR检测乙型肝炎病毒DNA与时间分辨免疫荧光法检测乙肝五项在乙肝诊断中的应用价值

目的探讨荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测乙型肝炎病毒(HBV)-DNA与时间分辨免疫荧光法检测乙肝五项在乙肝诊断中的应用价值。方法选择2021年1月至2023年10月本院接收的82例疑似乙肝患者作为研究对象,均通过FQ-PCR实施HBV-DNA检测,同时予以时间分辨免疫荧光法检测乙肝五项[乙肝病毒核心抗体(HBcAb)、乙肝病毒e抗体(HBeAb)、乙肝病毒e抗原(HBeAg)、乙肝表面抗原(HBsAg)、乙肝表面抗体(HBsAb)],并分析检测结果。结果82例患者中,HBV-DNA阳性率为70.73%(58/82)。82例患者中,组合A(HBcAb+HBeAg+HBsAg阳性)占比91.46%(75/82),组合B(HBeAb+HBsAg阳性)占比63.41%(52/82),组合C(HBcAb+HBeAb+HBsAg阳性)占比37.80%(31/82),组合D(HBcAb+HBeAb+HBsAb阳性)占比6.10%(5/82),组合E(HBeAg+HBsAg阳性)占比64.63%(53/82)。组合A、组合B、组合C、组合D、组合E中HBV-DNA阳性率分别为53.33%(40/75)、7.69%(4/52)、29.03%(9/31)、40.00%(2/5)、5.66%(3/53),组合A中HBV-DNA阳性率均高于其他各项组合,差异具有统计学意义(P<0.05)。FQ-PCR检测HBV-DNA联合时间分辨免疫荧光法检测乙肝五项诊断乙肝的准确度、灵敏度高于单独FQ-PCR检测HBV-DNA及时间分辨免疫荧光法检测乙肝五项,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论在乙肝诊断中,FQ-PCR检测HBV-DNA与时间分辨免疫荧光法检测乙肝五项各具优势,积极联合应用有助于进一步提升诊断效能。

乙肝肝炎病毒检测中荧光定量PCR法与时间分辨免疫荧光的对比分析

探析荧光定量PCR法与时间分辨免疫荧光在乙肝肝炎病毒检测中的应用效果。方法 选用96例疑似乙肝患者,均进行荧光定量PCR法与时间分辨免疫荧光病毒检测,以细菌培养作为金标准,比较不同检测手段的阳性检出率、检验结果及检测效能。结果 荧光定量PCR法的检测符合率、灵敏度,高于时间分辨免疫荧光法,而特异度低于时间分辨免疫荧光法。结论 荧光定量PCR法和时间分辨免疫荧光两种方法各有优缺点,适用于不同的检测环境和需求。在实际应用中,需要根据检测要求和实际情况进行选择,确保有效性和准确性。

时间分辨免疫荧光法定量检测甲胎蛋白(AFP)试剂的性能研究

目的在成功建立时间分辨免疫荧光法定量检测甲胎蛋白(AFP)反应模式并确定该检测试剂盒的生产工艺后,对该试剂盒的产品性能进行测定和评估。方法按试剂盒操作说明书对试剂盒的准确度、精密度、剂量-反应曲线、最低检测量、稳定性、特异性等指标进行测定。结果试剂盒准确度好,其线性检测范围为1～1000IU/ml,最低检测量为0.11IU/ml,分析内精密度<5%,分析间精密度<10%。CEA(1000ng/ml)、CA125(600IU/ml)、CA15-3(500IU/ml)、CA19-9(500IU/ml)及白蛋白(1000ng/ml)与本试剂盒AFP的交叉反应值分别为0.35、0.28、0.25、0.31、0.42IU/ml。结论试剂盒各项性能指标均达到相关检定要求,满足临床检测的需要。

总PSA时间分辨免疫荧光分析法的建立

利用时间分辨免疫荧光分析(TRFIA)技术建立人血清总PSA(前列腺特异性抗原)的快速全自动检测方法及其诊断试剂研制,该法采用双抗体夹心法建立tPSA-TRFIA,对该法和研制试剂的指标评价表明:方法的线性测量范围为0.50～250μg/L,灵敏度为0.06μg/L,批内批间的精密度分别为5.58%～9.71%,6.49%～12.12%。与CEA、CA12-5、CA15-3、CA19-9、AFP无交叉反应。353份血清标本用本试剂与国外其他试剂同时检测,其相关性达到94.4%,结果表明,试剂测定各项指标均达到临床检测要求,可替代国外同类产品。

一种基于时间分辨免疫荧光法的免疫分析仪检测降钙素原的性能评估

目的评估一种基于时间分辨免疫荧光法的免疫分析仪检测降钙素原(PCT)的性能。方法采用第三方质控品朗道PCT质控品两个水平(高值和低值)对其进行精密度检测。分别采用朗道高值质控品和患者混合高值血浆对其进行线性检测。选取103例患者的血液标本,与参考方法生物梅里埃VIDAS 30进行方法学比对。结果精密度方面,朗道两个水平的质控待评估方法变异系数均<10%。线性方面,采用朗道高值质控和患者混合高值血浆来检测线性范围,待考核方法检测值与理论值的r2均达到>0.99的要求。采用临床标本进行相关性分析时,测量结果的差值对均值的Bland-Altman分析及测量结果比值对均值的Bland-Altman分析显示二者的相关性较好。待考核方法与VIDAS 30的Spearman相关系数为0.98,P<0.000 1。结论待考核方法定量检测全血PCT,操作简便,具有较好的精密度,在检测临床标本时与生物梅里埃VIDAS 30检测PCT有较好的一致性,适用于急诊检查和床旁检测。

溶血对时间分辨免疫荧光分析法测定胰岛素的影响

目的探讨溶血对时间分辨免疫荧光分析法测定胰岛素的影响。方法收集30例未发生溶血的血清标本,利用低渗溶血法分别制备轻度溶血、中度溶血、重度溶血标本各10例;采用时间分辨免疫荧光分析法分别测定各组标本溶血前(0h)和溶血后0.5、2、18h的胰岛素浓度;通过配对t检验、重复测量数据的方差分析对溶血程度和时间对胰岛素浓度检测结果的影响进行分析。结果轻度溶血、中度溶血、重度溶血标本之间胰岛素浓度检测结果比较差异无统计学意义(P>0.05);随着溶血时间的延长,胰岛素浓度呈明显下降趋势,0.5、2、18h检测结果与0h检测结果相比,比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论溶血程度对时间分辨免疫荧光分析法测定胰岛素浓度的影响不明显,但溶血时间则对测定结果具有较为明显的影响;标本溶血和溶血时间均为影响胰岛素浓度检测结果的重要因素。

时间分辨免疫荧光法测定食物中鸡蛋过敏原蛋白成分

目的:建立双抗体夹心时间分辨免疫荧光法(TRFIA)用于测定食物中鸡蛋过敏原蛋白成分,为进出口食品鸡蛋过敏原成分检测提供技术基础。方法:提取鸡蛋过敏原总蛋白,免疫小鼠获得多克隆抗体,并以此抗体包被酶标板,采用生物素标记抗鸡蛋过敏原总蛋白抗体、Eu3+标记的链酶亲和素和以β-二酮体为主的增强液等试剂,建立双抗夹心TRFIA方法,用于检测10种食品中是否含有鸡蛋蛋白成分。结果:鸡蛋总蛋白SDS-PAGE显示带大致有10条,其中主要条带有4条,分子量分别为71、55、38、14kDa;成功地研制出双抗体夹心TRFIA法检测食品中鸡蛋过敏原蛋白成分,具有特异性,其最低检出限为0·625ng/mL,标准曲线在12·5～640ng/mL范围内线性良好;8种食品检测结果与食物过敏原标签标注内容相符,而2种标示不详的食品检测结果均呈现阳性。结论:初步建立了检测食品中鸡蛋过敏原蛋白成分的双抗体夹心TRFIA,具有较好的特异性和灵敏度;该方法对于未标注鸡蛋过敏原成分的食品检测具有一定的实际应用价值。

时间分辨免疫荧光法定量检测癌胚抗原(CEA)试剂临床应用研究

目的对自制时间分辨免疫荧光法定量检测癌胚抗原(CEA)试剂盒进行临床应用研究,为该试剂盒临床应用及临床疗效评价提供科学依据。方法收集血清标本326份,用自制试剂盒按试剂盒操作说明书对血样进行测定,并以化学发光法(R oche)为对照方法,W ALLAC公司的CEA时间分辨免疫测定药盒(A u toDELF IATMhCEA)作为复核试验,获取相关目标实验数据,并计算得“真实性”和“可靠性”等统计学数据。结果以化学发光法为对照试验,其阳性符合率为95.83%,阴性符合率为98.73%,检验无显著性差异;自制试剂盒的定量测定值与化学发光法的测定值较为一致,相关系数达0.93,相关性好。结论试剂盒检测性能与现在临床广泛应用的方法相仿,能满足临床应用的需要。

化学发光免疫分析法和时间分辨免疫荧光法定量检测不同浓度HBsAg的对比分析

目的以雅培全自动化学发光免疫分析法(CMIA法)为标准,探讨时间分辨免疫荧光法(TRIFA)检测血清乙型肝炎表面抗原(HBsAg)的准确性和可行性,以便基层医院普遍开展此项目,为抗病毒个体化的策略及疗效的预测提供依据。方法分别用CMIA法和TRIFA法对157份乙型肝炎病毒(HBV)感染患者的血清进行检测,对于HBsAg滴度超过检测上限的样本,采用稀释液手动稀释后,再进行定量分析。将HBsAg水平分为4组:≤100 IU/mL、101~1 000 IU/mL、1 001~20 000 IU/mL、>20 000 IU/mL,分析两种方法阳性标本定量相关性。结果两种方法的直线回归方程为:Y=2.323X-896.3,相关系数r=0.943,P<0.001。以CMIA法检测值为参考,分为4组进行分析,结果显示在检测低浓度HBsAg样本时,TRIFA数值较CMIA法偏低,而高浓度样本以CMIA法检测值偏高。两种试剂在检测不同浓度的HBsAg均有较好的一致性(均P<0.05),其中以浓度在1 001~20 000 IU/mL时相关性最好。结论两种试剂在HBsAg定量检测上的准确性基本相当,定量相关性以检测值在1 001~20 000 IU/mL之间最佳。TRIFA成本低廉、易操作,更适于基层医院使用,具有广泛的应用前景。

时间分辨免疫荧光法用于梅毒抗体测定的探讨

目的通过对时间分辨免疫荧光法(TRFIA),酶联免疫吸附试验(ELISA),明胶颗粒凝集试验(TPPA)三种方法测定梅毒特异性抗体(TP)的比较,并对TRFIA法的特异性、灵敏度、线性进行方法学评价,探讨临床常规使用TRFIA方法检测梅毒特异性抗体的可行性。方法对2012年1月至2012年7月我院256名门诊患者标本分别用TRFIA、ELISA、TPPA三种方法测定TP,并对TRFIA检测系统的灵敏度、批内,批间精密度、线性范围进行测定。结果TRFIA与TPPA法检测相比其灵敏度为100%,特异性为98.2%。TP阴阳性结果,经配对卡方检验P>0.05,三种方法无统计学差别。最低检测浓度0.15NCU,相关系数分别为0.95、0.999,高、中、低三种浓度血清的批内、批间精密度CV<10%。结论 TRFIA法测定TP灵敏度、特异性、方法性能、相关性均好,可作为临床TP常规筛查方法。

时间分辨免疫荧光法和放射免疫法测定血清C-肽的偏差评估

目的比较时间分辨免疫荧光法和放射免疫法检测血清C-肽结果的一致性,并对其进行偏差评估。方法依据美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)EP9-A文件要求,每天选取临床样本8份,分别用2种方法测定血清C-肽,连续测定5 d。以放射免疫法(X)为对比方法,时间分辨免疫荧光法(Y)为评价方法,对测定结果计算回归方程、t检验、配对秩和检验和偏差评估。结果 2种方法测定结果的回归方程为Y^=0.993 0X+0.027 2,相关系数(r)=0.987 5(P<0.001)。C-肽含量在0.4、0.5、1.0、5.0、10.0 ng/mL时,时间分辨免疫荧光法相对于放射免疫法的偏差分别为6.10%、4.75%、2.02%、-0.16%、-0.43%。结论 C-肽水平≥0.4 ng/mL时,时间分辨免疫荧光法与放射免疫法检测血清C-肽具有很好的相关性;C-肽水平<0.4 ng/mL时,两法的相对偏差较大。

时间分辨免疫荧光法定量检测血清HBeAg／HBeAb的可行性分析

目的:探讨国产时间分辨免疫荧光法(time-resolved immunofluorescence assay,TRIFA)是否与全自动化学发光免疫分析法(automatic chemiluminescence immunoassay,CMIA)在定量检测HBeAg/HBeAb中具有同样的准确性和特异性。方法:157份来自中南大学湘雅医院感染病科门诊的HBV感染患者的血清标本,分别用CMIA和TRIFA两种方法进行HBeAg定量及HBeAg/HBeAb定性检测,并对结果进行对比分析。结果:两种方法定量检测HBeAg的直线回归方程为:Y=0.72779X–4.0551(r=0.712,P<0.001)。与CMIA比较,TRIFA检测HBeAg定性结果的灵敏度和特异性分别为89.89%和100%,两种方法诊断HBeAg符合率为94.27%。TRIFA检测HBeAb定性结果的灵敏度和特异性分别为100%和95.45%,两种方法诊断HBeAb的符合率为97.45%。结论:TRIFA在HBeAg/HBeAb定量检测上的准确性、灵敏度和特异性与CMIA基本相当,二者HBeAg/HBeAb诊断符合率高。

时间分辨免疫荧光法和电化学发光法检测HBsAg的对比分析

目的用电化学发光法作为标准,探讨时间分辨免疫荧光法在检测HBsAg上的应用。方法对临床348份血清标本、一份HBsAg高值梯度稀释血清及生物制品检定所标准血清分别用电化学发光法和时间分辨免疫荧光法分别检测,比较两种方法检测结果的阴阳性符合率、灵敏性、特异性、准确性、线性范围以及阳性标本的定量相关性等。结果对临床348份血清检测结果阴阳性符合率为98.26%;阳性标本的定量相关性为γ=0.9641(P<0.001);两种方法的线性范围,时间分辨免疫荧光分析法约为1:2～1:2048(0.21～223.07ng/ml),电化学发光约为1:2～1:4096(0.15～223ng/ml)。结论时间分辨免疫荧光法与电化学发光法在HBsAg的定量检测上的灵敏性、准确性和线性范围都基本相当。

百日咳毒素S1亚基蛋白时间分辨免疫荧光分析法的建立及应用

目的建立铕(Eu3+)标记检测百日咳毒素S1亚基蛋白时间分辨免疫荧光分析法。方法利用原核重组表达系统表达百日咳毒素S1亚基蛋白,并鉴定,采用双抗体夹心法建立检测S1 TRFIA分析方法。结果自制S1试剂盒检测灵敏度2.5 ng/ml,与其他抗原无交叉反应,并初步可应用于百日咳疫苗中免疫原的监测。结论自制百日咳毒素S1亚基蛋白时间分辨免疫荧光分析法能够较为可靠的监控百日咳疫苗质量。

CA15-3定量测定试剂盒(时间分辨免疫荧光法)临床性能评价研究

目的对自制的CA15-3定量测定试剂盒(时间分辨免疫荧光法(TRFIA))进行临床性能评价,并为该试剂盒在临床的应用提供科学依据。方法用自制试剂盒检测采集到的血清1014例,以罗氏(Roche)的电化学发光(ECL)CA15-3定量测定试剂盒为试验对照方法。若结果判断有明显差异者,进而用雅培(ABBOTT)公司的微粒子免疫荧光定量测定药盒作为复核试验方法。操作按试剂盒说明书进行,最后对自制试剂盒的准确性和相关性等指标进行计算。结果本试剂盒以电化学发光法(Roche)为考核试验的对照试验,其阳性符合率为98.68%,阴性符合率为95.70%,总符合率为97.04%,检验无显著性差异;考核试剂盒的定量测定值在线性范围内与电化学发光法(Roche)的值相关性良好,相关系数r=0.922,P=0.000。在ROC曲线中的AUCROC值为0.989,检测性能优秀。结论本试剂盒检测性能满足临床应用的需要。

人风疹病毒IgG抗体时间分辨免疫荧光法的建立

目的:建立人风疹病毒(Rubella virus;RV)IgG抗体时间分辨免疫荧光分析(TRFIA)的方法。方法:采用间接两步法建立人风疹病毒IgG抗体的TRFIA分析方法,并对试剂盒的各项指标进行评价。结果:试剂盒的可测范围为5～160IU/ml,灵敏度为0.092IU/ml,批内、批间的变异系数(CV)分别为7.8%和10.5%;130份血样用本方法与进口的同类试剂盒同时检测,其相关系数为0.926。结论:本试剂盒的各项指标均达到临床检测的要求。

检测游离β-HCG时间分辨免疫荧光分析法的建立及临床应用

目的建立一种快速灵敏的时间分辨免疫荧光分析法（TRFIA）,用于定量检测孕妇血清中游离β人绒毛膜促性腺激素（β-HCG）的浓度。方法包被游离β-HCG单克隆抗体,铕（Eu3＋）标记抗β-HCG单克隆抗体,建立双抗体夹心法游离β-HCG TRFIA,对该试剂的各项指标进行评价。结果最低检测量〈0.06 ng/mL;线性检测范围为0.052-400 ng/mL;分析内和分析间变异系数分别为1.0%-6.4%、3.3%-5.1%;人黄体生成素（HLH）、人促甲状腺素（HTSH）、人促卵泡激素（HFSH）和人绒毛膜促性腺激素（HCG）与本试剂的交叉反应率分别为0.04%、0.03%、0.05%和0.11%;1 043份孕妇血样用该试剂与进口同类试剂同时检测,2种试剂检测值具有显著相关性（r=0.990,P=0.000）;血清样本2-8℃储存超过3 d,室温储存1 d或冻融2次,与新鲜样本比较,游离β-HCG浓度显著性增加（P〈0.05）。结论该试剂敏感性高、特异性强、操作简便快捷,具有良好的精密度,可以替代进口试剂用于临床样本的检测。为保证结果的可靠性,应注意样本的保存条件。

时间分辨免疫荧光法与化学发光法检测乙型肝炎血清标志物结果的一致性分析

目的分析时间分辨免疫荧光法和化学发光法检测乙型肝炎血清标志物结果的一致性。方法选取2018年6月至2020年6月在该院就诊的乙型肝炎患者88例,分别运用时间分辨免疫荧光法和化学发光法检测其乙型肝炎血清标志物,分析两种方法检测结果的一致性。结果时间分辨免疫荧光法检测乙型肝炎表面抗原(HBsAg)、乙型肝炎e抗原(HBeAg)的阳性率高于化学发光法,差异有统计学意义(P<0.05);两种方法检测乙型肝炎表面抗体(抗-HBs)、乙型肝炎e抗体(抗-HBe)和乙型肝炎核心抗体(抗-HBc)的阳性率对比,差异无统计学意义(P>0.05)。两种方法检测HBsAg、抗-HBs、HBeAg、抗-HBe和抗-HBc的结果一致性程度为高度一致或一致性极强。结论时间分辨免疫荧光法和化学发光法均可有效检测乙型肝炎血清标志物,具有较高的一致性,但时间分辨免疫荧光法对HBsAg、HBeAg检测更为敏感。

时间分辨免疫荧光法检测结核感染T细胞释放γ-干扰素的方法建立及初步临床应用

目的建立一种检测结核感染T细胞释放γ-干扰素(IFN-γ)的时间分辨免疫荧光法(TRFIA)及初步临床应用。方法选择73例结核分枝杆菌阳性的肺结核患者,77例结核分枝杆菌阴性的肺结核患者,25例肺外结核患者,52例呼吸道疾病以外的非结核患者,70例非结核呼吸道疾病(含肺癌)患者作为研究对象。利用早期分泌抗原靶蛋白6(ESAT6)和培养滤液蛋白10(CFP-10)作为结核分枝杆菌特异性抗原,刺激患者全血标本中的结核分枝杆菌抗原特异性T细胞释放IFN-γ。植物血凝素L作为有丝分裂原,可非特异地刺激IFN-γ的产生。应用双抗体夹心TRFIA定量测定血浆中的IFN-γ浓度。评价TRFIA检测IFN-γ的精密度、检测低限、生物检测限、功能灵敏度、线性、准确度和特异度等分析性能指标,并与酶联免疫法(ELISA)进行比对试验研究。方法间结果差异比较采用χ~2检验,P<0.05为差异具有统计学意义。结果TRFIA检测IFN-γ的捕获抗体包被浓度为5.0μg/ml,生物素标记抗体使用工作稀释度为1∶1 800和铕标记物使用工作稀释度为1∶500;实验内变异系数(CV)<5%,实验间CV<10%;检测低限0.69pg/ml,生物检测限0.90pg/ml,功能灵敏度1.80pg/ml;线性范围2～5 000pg/ml;检测国际生物标准参考品的偏倚不超过5%;其他常见的细胞因子和常见内源性干扰物(胆红素、血红蛋白和三酰甘油)样本对该方法检测结果无明显影响。TRFIA检测297例临床样本结果判断与临床诊断的一致率可达85.19%;TRFIA与ELISA的结果具有高度一致性(κ=0.9 931),且TRFIA与ELISA的阳性检出率结果差异无统计学意义(χ~2=0,P>0.05)。结论 TRFIA检测IFN-γ的精密度好,灵敏度高,线性范围宽,准确度好,特异度强,临床符合率高,能满足临床检测需要。

酶联免疫法、金标法、时间分辨免疫荧光分析法测定HBsAg对比分析

目的探讨酶联免疫法、金标法、时间分辨免疫荧光分析法三种方法测定HBsAg的可靠性及优缺点。方法通过对1500名体检及临床标本用三种方法检测HBsAg，对其检测结果的准确度、灵敏度、特异性进行对比。结果三种方法在准确度、灵敏度、特异性方面酶联免疫法最低，金标法其次，时间分辨免疫荧光分析法最高。结论酶联免疫法检测HBsAg操作简便，可用于自动化分析，适用于大量标本的定性检测，如大量人群的乙肝筛查；金标法检测HBsAg操作简便快速，无需特殊仪器设备。适用于单份标本的定性测定，适用于急诊、社区诊所及家庭化验；时间分辨免疫荧光分析法检测HBsAg动态检测范围广、试剂稳定、自动化程度高，最有发展前途，但对实验室条件和操作人员条件要求高，适用于HBsAg定量检测。