动物源食品中孕酮激素残留的时间分辨荧光免疫分析法的建立

该研究以孕酮为研究对象,设计并制备了新抗原,通过动物免疫得到特异性兔抗体,基于所得抗原和抗体,进一步优化了抗原抗体浓度、反应缓冲液种类及其pH值等关键参数,最终在国内首次建立了用于动物性食品中性激素孕酮残留快速检测时间分辨荧光免疫分析法(TRFIA)。该研究确定最优实验条件为:抗原0.30μg/mL、铕标抗体0.40μg/mL、pH值7.2的TBST工作缓冲液,并建立标准曲线,方法的线性范围为0.46~6.94μg/L,IC_(50)达1.79μg/L,与睾酮交叉反应率为1.25%,与雌二醇、雌三醇等激素无交叉反应。实际样品的平均添加回收率为82.0%~113.0%,批内批间变异系数<5%,与高效液相色谱法(HPLC)检测结果的相关性良好(r2=0.988)。结果表明该研究所建立的TRFIA检测方法准确可靠、特异性好、灵敏度高,完全可用于动物源食品中孕酮残留的快速检测。

时间分辨荧光免疫分析法间接测定雌二醇

以氯磺酰基噻吩甲酰三氟丙酮 ( CTTA)为铕 ( Eu)的螯合剂 ,羊抗鼠 ( SAM)的 Ig G为二抗 ,用 SAM- Ig G- CTTA- Eu作标记二抗 ,建立了以竞争抑制为基础的时间分辨荧光免疫分析测定游离雌二醇 ( E2 )的新方法。同均相方法相比灵敏度有很大提高 ,测定雌二醇 ( E2 )的线性范围为 2 .5～ 2 0 0 pg/m L,检测限为 2 .5 pg/m L。这一方法可望用于 E2

时间分辨荧光免疫分析法检测乙型肝炎血清标志物的分析方法性能验证

目的建立时间分辨荧光免疫检测法的方法学性能验证方案和试验方法。方法采用新波ANYTEST2000时间分辨荧光免疫分析仪和雅培AxSYM免疫发光分析仪测定乙型肝炎病毒血清标志物(HBV-M)各项目,分析前者的检测精密度、准确度、交叉污染率、灵敏度、测量范围、临床可报告范围、生物参考区间及抗干扰性能,分析两者检测结果间的相关性。结果 ANYTEST2000时间分辨荧光免疫分析仪检测HBV-M各项目的精密度、准确度、交叉污染率、灵敏度、测量范围、临床可报告范围、生物参考区间均符合国际公认质量要求。血清中一定浓度的三酰甘油、总胆红素或血红蛋白对部分HBV-M项目产生不同程度的干扰。ANYTEST2000与AxSYM检测HBV-M各项目结果间差异无统计学意义(P>0.05),且具有良好的相关性。结论 ANYTEST2000分析仪测定HBV-M的主要分析性能验证结果与厂商规定的分析性能基本一致。本研究所建立的分析仪性能验证方案和方法有助于提高仪器的检测质量。

血清透明质酸时间分辨荧光免疫分析法的反应条件优化及其临床应用

目的优化血清透明质酸（HA）时间分辨荧光免疫分析法（TRFIA）的反应条件,并探讨其临床应用价值。方法采用TRFIA检测血清中HA的含量,确定参与HA-TRFIA的各反应成分的浓度。结果最佳反应条件为包被浓度10 mg/L、HA结合蛋白（HABP）1∶500稀释、铕标记HA（Eu^3＋-BSA-HA）1∶200稀释。敏感性为5.17μg/L,批内变异系数（CV）为2.21%-3.78%,批间CV为3.73%-5.40%,平均回收率为100.4%。该法HA测定值与放射免疫测定值显著相关,且与临床结果一致。结论本研究建立的血清HA-TRFIA是一种灵敏准确的分析方法,适合临床应用。

甲状腺过氧化物酶抗体间接时间分辨荧光免疫分析法的建立及临床应用

目的建立甲状腺过氧化物酶（TPO）抗体间接时间分辨荧光免疫分析法（TRFIA）。方法用TPO抗原包板,用铕（Eu^3＋）标记兔抗人IgG做标记物,建立检测人血清TPO抗体的间接TRFIA。结果TPO抗体-TRFIA的敏感性为1.0 IU/mL;线性范围达1 000 IU/mL;批内变异系数（CV）为3.1%-3.6%,批间CV为3.3%-3.6%;平均回收率为98.89%;与电化学发光分析法（ECLIA）比对,相关系数达0.983 2;与临床诊断高度相关。结论本研究建立的TPO抗体-TRFIA是一个高灵敏和可靠的检测方法,有助于甲状腺疾病的临床诊断。

脂血标本对时间分辨荧光免疫分析法测定游离雌三醇水平的影响

目的探讨脂血标本对时间分辨荧光免疫分析法检测游离雌三醇水平的影响。方法收集男性呈正常和乳糜样外观的不同水平脂血标本,与不同水平的游离雌三醇定值血清混匀,制成混合血清,用时间分辨荧光分析法测定其游离雌三醇水平以评价不同乳糜样和正常外观脂血标本对游离雌三醇水平的影响。结果对于乳糜样外观标本,轻度脂血可使游离雌三醇水平增高,中度及高度脂血则使游离雌三醇水平降低,且对游离雌三醇水平的影响十分接近。外观正常的中度脂血对游离雌三醇水平无显著干扰。结论乳糜样外观脂血对时间分辨荧光分析法测定游离雌三醇存在不同的影响,进而影响唐氏筛查的准确度。

HBeAg-时间分辨荧光免疫分析法的初步临床应用

本文探讨HBeAg时间分辨荧光免疫分析法(TRFIA)的临床应用价值。采用铕离子标记,建立双抗体夹心的HBeAgTRFIA,并对224例乙肝患者和30名正常人血清进行检测。结果表明,HBeAgTRFIA法的灵敏度为0.006NCU/mL,乙肝患者血清HBeAg检出率为41.1%,显著高于ELISA法(P<0.05),与MEIA法相比较无显著差异(P>0.05)。HBeAgTRFIA法是一种灵敏度高、特异性强和重复性好的检测技术,对提高临床检测水平、指导临床治疗、监测方面有实用价值。

抗弓形虫IgM抗体时间分辨荧光免疫分析法的建立及初步应用

目的采用时间分辨荧光免疫分析法（TRFIA）建立高灵敏的抗弓形虫（TOX）IgM抗体的检测方法。方法采用二抗间接法建立抗TOX IgM抗体的TRFIA。结果方法的批内和批间变异系数（CV）分别为1.9%和3.8%,敏感性为0.4 U/mL,可测范围为0.4-200 U/mL,20%、50%和80%的有效剂量（ED20、ED50和ED80）分别为36.3、88.2和147.8 U/mL。检测健康体检人员的血清,标本的测定值为（5.3±2.3）U/mL,建议阳性阈值为10 U/mL。结论抗TOX IgM抗体的TRFIA敏感性高、稳定性好,在优生优育及器官移植上具有很好的应用前景。

NSE时间分辨荧光免疫分析法的建立

采用夹心法建立神经元特异烯醇化酶（NSE）时间分辨荧光免疫分析技术（TRFIA）来测定血清中NSE的含量。以NSE单克隆抗体E1包被板,双功能螯合剂异氰酸苄基二乙烯三胺四乙酸络合Eu3＋及标记NSE单克隆抗体E7,发光增强系统为以β-二酮体为主的增强液。采用平衡饱和法建立NSE-TRFIA,数据采用双对数函数数据处理程序处理。本方法的连续批内和批间CV分别为2.4%和4.8%,平均回收率为102.6%,灵敏度为0.31ng/mL,可测范围为0.31～320ng/mL,ED20、ED50和ED80分别为20.72ng/mL、57.23ng/mL和157.25ng/mL。本方法与AFP、CEA均无交叉反应。Eu3＋标记抗体-20℃保存8个月免疫反应基本无损失,同批试剂连续8个月应用分析结果稳定。临床应用检测结果与E170所测值高度相关。实验结果表明,本文所建立的NSE-TRFIA的灵敏度、特异性、准确度等均符合临床应用要求。

总免疫球蛋白E时间分辨荧光免疫分析法的建立与评价

目的：应用时间分辨荧光免疫分析法（TRFIA）建立总免疫球蛋白E（TIgE）的定量测定方法。方法采用双抗体夹心法建立TIgE TRFIA ，并对其进行方法学评价。结果建立的 TIgE TRFIA批内、批间变异系数（CV）分别为1．59％～1．68％和5．23％～7．33％；检测低限为0．25 IU/mL ；线性范围为1．47～1510．00 IU/mL ；其准确性在允许偏差±10％内；回收率为97．00％～106．75％；交叉反应试验和干扰试验均能满足检测要求；检测TIgE达15000 IU/mL时仍未见 HOOK效应；与欧蒙公司的ELISA法检测40份临床样本结果相关性良好（r＝0．9992，P＜0．01），2种方法间预期偏差在允许范围（±12．5％）内；检测健康成人样本TIgE的参考值为100 IU/mL。结论建立的TIgE TRFIA具有精密度好，灵敏度高，线性范围宽，准确度高，特异性强等优点，能满足临床需要。

时间分辨荧光免疫分析法与ELISA检测丙型肝炎病毒抗体的比较

目的探讨时间分辨荧光免疫分析法(TRFIA)与酶联免疫吸附试验(ELISA)检测丙型肝炎病毒抗体(抗-HCV)的临床应用价值。方法对189例HCV疑似感染者血清标本,同时采用TRFIA和ELISA进行抗-HCV检测。结果在189例标本中,TRFIA检测抗-HCV阳性53例,ELISA阳性45例,两种方法差异无统计意义(P>0.05),符合率为95.77%。当标本中抗-HCV的S/CO≥2时,两种方法差异无统计学意义(P>0.05),但当1≤S/CO<2时,两种方法阳性检出率差异有统计学意义(P<0.05)。结论 TRFIA检测抗-HCV与ELISA相比,特异性好、灵敏度高,提高了临床检测水平,具有较高的临床应用价值。

解离-增强时间分辨荧光免疫分析法检测HBVM的临床应用

解离-增强时间分辨荧光免疫分析法(DELFLA)是以三价稀土原子铕(Eu3+)作为示踪物代替HRP等标记抗原或抗体,在免疫反应完成后加入特殊的增强液,将铕从标记抗原或抗体解离下来并与增强液中的组分形成具有强烈荧光螯合物,根据稀土原子螯合物的光谱特点,用时间分辨荧光分析仪测定免疫反应最终产物的荧光强度,根据荧光强度判断反应体系中被测物浓度,从而达到定量分析的目的.本文以DELFLA法分别检测5份不同浓度的HBVM标准品和58份病人血清,与常规酶联免疫法(ELISA)进行对照,现将结果报告如下.

时间分辨荧光免疫分析法检测乙型肝炎病毒血清标志物研究

乙型肝炎病毒（HBV）是严重危害人类健康的传染病，我国是乙型肝炎高发区，HBV血清标志物的检测对乙型肝炎的诊断、疗效观察及预后判断具有非常重要的意义。

抗心磷脂抗体IgG和IgM双标记时间分辨荧光免疫分析法的建立和应用

目的 评价新建立的双标记时间分辨荧光免疫分析法（TRFIA法）检测抗心磷脂抗体（ACA）IgG和IgM的临床应用价值。方法 以心磷脂抗原（含β2糖蛋白Ⅰ段）包板,以稀土元素铕离子（Eu3＋）和钐离子（Sm3＋）分别标记抗人IgG抗体和抗人IgM抗体建立双标记TRFIA法。收集510例自身免疫性疾病患者（硬皮病24例、肾病综合征36例、强直性脊柱炎16例、脑梗死117例、狼疮性肾炎33例、干燥综合征63例、系统性红斑狼疮153例、类风湿关节炎70例）和50名健康献血者的血清标本,采用双标记TRFIA法测定ACA-IgG型抗体和ACA-IgM型抗体的临床阳性率和特异度。评估双标记TRFIA法检测高、中、低值样本的精密度。将3份已知浓度血清标本作倍比稀释,计算ACA-IgM型抗体和ACA-IgM型抗体的回收率。与酶联免疫吸附试验（ELISA法）的结果进行比对,分析双标记TRFIA法与ELISA法检测结果的一致性和稳定性等。结果 双标记TRFIA法检测ACA-IgG型抗体和ACA-IgM型抗体标准曲线的R2值分别为0.999、0.993,荧光强度值与样本浓度呈线性相关。ACA-IgM型抗体高、中、低3个浓度的批内变异系数（CV）分别为1.31%、2.82%、4.14%,批间CV分别为2.29%、4.08%、6.97%;ACA-IgG型抗体高、中、低3个浓度的批内CV分别为1.21%、3.18%、4.61%,批间CV分别为2.26%、3.93%、7.34%。双标记TRFIA法检测ACA-IgM型抗体和ACA-IgG型抗体的灵敏度均为0.1U/mL,特异度均为98.00%（49/50）。ACA-IgG型抗体回收率为95.11%~106.14%,ACA-IgM型抗体回收率为96.04%~106.54%。硬皮病、肾病综合征、强直性脊柱炎、脑梗死、狼疮性肾炎、干燥综合征、系统性红斑狼疮、类风湿关节炎患者ACA-IgG型抗体阳性率依次为16.67%、2.78%、7.14%、3.42%、15.15%、4.76%、7.84%、8.57%,ACA-IgM型抗体阳性率依次为4.17%、11.11%、14.29%、3.42%、27.27%、3.17%、8.50%、10.00%。双标记TRFIA法检测ACA-IgM型抗体和ACA-IgG型抗体的结果与ELISA法均呈正相关（R2值分别为0.928、0.924,P值均〈0.05）。双标记TRFIA法检测ACA-IgM型抗体和ACA-IgG型抗体的荧光强度值分别下降14.7%和15.8%,ELISA法检测ACA-IgM型抗体和ACA-IgG型抗体的光密度值分别下降37.6%和33.9%。结论 双标记TRFIA法同时检测ACA-IgG型抗体和ACAIgM型抗体具有效率高、灵敏度高、特异性强、检测范围宽和稳定的优点,其临床应用价值高,应用前景广阔。

CA50时间分辨荧光免疫分析法与免疫放射分析法的对比研究

目的:比较时间分辨荧光免疫分析法(TRFIA)和免疫放射分析法(IRMA)检测糖类抗原CA50的优势。方法:用TRFIA和IRMA分别测定肿瘤和正常对照血清标本中CA50含量并对其测定结果和相关性进行分析。结果:160例患者血清TRFIA结果为(20.55±30.82)U/ml,IRMA结果为(31.49±75.59)U/ml,相关系数r=0.928;88例正常对照组TRFIA测定值为(3.12±5.9)U/ml,IRMA测定值为(8.11±9.5)U/ml,r=0.976。结论:TRFIA与IRMA检测CA50两种方法具有较好的相关性。TRFIA试剂稳定性好,有效期长,无放射性污染,更有利于临床大批量检测的需要,值得进一步研究和推广。

血清游离β-HCG时间分辨荧光免疫分析法的建立

目的建立血清游离β-HCG时间分辨荧光免疫分析法。方法采用双抗体夹心一步法建立游离β-HCG试剂盒,并对试剂盒的各项指标进行评价。结果试剂盒的可测范围为3～200ng/mL,灵敏度为0.12ng/mL,CV分别为4.23%和5.73%,与hLH、hFSH、hTSH的交叉反应低,与2000U/L的hCG的交叉反应结果小于100ng/ml。51份血样用本试剂盒与国外同类试剂同时检测,其相关系数为0.95。结论时间分辨荧光免疫分析法是目前血清游离β-HCG检测中最灵敏的方法,该分析法稳定性好,具有很好的应用前景。

时间分辨荧光免疫分析法检测C反应蛋白方法的建立及应用

目的 制备4,7-（氯磺酸基苯基）-1,10-菲啰啉-2,9-二羧酸（BCPDA）鳌合剂,并以其建立时间分辨荧光免疫分析（TRFIA）技术检测C反应蛋白（CRP）的方法.方法 用二甲基甲酰胺（DMF）溶解自制BCPDA后测定其吸光度;以BCPDA分别标记铕（Eu3＋）、CRP多克隆抗体制备CRP多克隆抗体-BCPDA-Eu3＋荧光标记物;以纳米磁珠为固相载体包被CRP单克隆抗体,分别加入CRP抗原及CRP多克隆抗体-BCPDA-Eu3＋,应用六合一板式检测仪检测CRP荧光强度.结果 自制BCPDA吸收光谱为220～360 nm, 用337 nm 的紫外光激发得到CRP多克隆抗体-BCPDA-Eu3＋的荧光发射光谱, 利用TRFIA可检测到0.1 mg/L 的CRP抗原.结论 本研究成功制备CRP多克隆抗体-BCPDA-Eu3＋荧光标记物并建立了TRFIA检测CRP的方法,此为临床检测CRP提供了新的思路,亦为TRFIA的推广应用提供了理论依据.

时间分辨荧光免疫分析法检测乙型肝炎表面抗原空白限，检出限和定量限的建立与评价

病毒性乙型肝炎广泛流行于世界各地，是以肝脏炎症病变为主。乙型肝炎病毒（HBV）是该病的病原体。我国HBV携带者约为1．2亿，因其传染性性强和严重的致病性，已严重危害到我国人民的身体健康。乙型肝炎病毒（HBV）的临床免疫学诊断主要是对HBV血清标志物的检测。

时间分辨荧光免疫分析法定量测定乙肝两对半

目的:探讨时间分辨荧光免疫分析技术(TRFIA)定量测定乙肝两对半的临床应用价值。方法:用TRFIA与ELISA对96例临床标本同时检测,并进行对比分析。结果:两种方法检测结果经配对卡方检验无显著性差异,P>0.05。结论:TRFIA测定乙肝两对半具有灵敏、特异、定量、试剂稳定、无放射性污染等优点,具有良好的应用价值。