时间分辨荧光检测组合式DNA芯片

研究了时间分辨荧光标记与检测组合式DNA芯片的方法。首先在薄玻璃片上原位合成寡核苷酸的序列片段，然后将之裁成小片，随后将带有不同DNA片段序列的小片拼接组合成组合式DNA芯片。利用4，7-二氯磺酰苯基．1，10-菲罗啉-2，9-二羧酸（BCPDA）多重标记的亲和素-生物素放大效应，建立了时间分辨荧光检测组合式DNA芯片的方法：芯片上的DNA序列经过杂交后，其互补序列末端的生物素可将多重BCPDA标记的亲和素联接，然后由BCPDA对铕离子（Eu^3＋）捕获与解离来实现杂交信号差别，并可实现对正配、单碱基错配、二及三碱基错配的时间分辨荧光信号差别的检测。对BCPDA标记的系列化合物进行了荧光性能表征，并对时间分辨荧光检测与传统荧光检测模式作了比较。

时间分辨荧光免疫法检测日本鳗鲡的产酸克雷伯氏菌

从皮肤点状出血的日本鳗鲡中分离出产酸克雷伯氏菌菌株B12,经福尔马林灭活后,注射新西兰兔,制备免疫抗血清,G蛋白亲和层析纯化得到抗体(IgG),以固定于微孔板的IgG作为捕获抗体,Eu^(3+)螯合物标记的IgG作为检测抗体,建立了产酸克雷伯氏菌的夹心型时间分辨荧光免疫检测法(TRFIA),并研究了抗体浓度、免疫时间及离解时间对检测的影响。本方法检出限为5.0×10~3 cfu/mL;线性范围5.0×10~3～1.0×10~7 cfu/mL,相关系数达0.99以上。交叉反应表明其具有较高的特异性,板内和板间相对标准偏差分别为5.64%和2.27%。将本方法标准化后,检测了29份人工感染的日本鳗鲡样品,包括鳃、肾、肠、肝和肌肉组织,结果满意。

恶性疟与间日疟双标记时间分辨免疫荧光检测试剂盒的研制

目的采用双标记时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)技术研制一种同时检测恶性疟原虫、间日疟原虫及混合感染试剂盒,并评价试剂盒各项性能指标。方法用抗恶性疟原虫/间日疟原虫乳酸脱氢酶(PLDH)抗体1H12作为捕获抗体包被96孔板,以Sm3+标记抗恶性疟原虫乳酸脱氢酶(PfLDH)抗体2A5和Eu3+标记抗间日疟原虫乳酸脱氢酶(PvLDH)抗体4F6作为检测抗体,建立恶性疟与间日疟双标记时间分辨荧光分析法。结果试剂盒检测恶性疟原虫的灵敏度为0.15ng/ml,线性范围为0.5500ng/ml,平均稀释回收率为102.2%,批内与批间变异系数分别为6.48%和6.63%;检测间日疟原虫的灵敏度为0.25ng/ml,线性范围为0.5500ng/ml,平均稀释回收率为100.78%,批内与批间变异系数分别为5.39%和6.16%,恶性疟与间日疟检测不相互干扰。用自制试剂盒检测212份疟疾患者血标本,阳性率为95.28%,高于镜检法的92.45%和Optimal法的51.89%。结论 PfLDH/PvLDH-TRFIA试剂盒能同时检测恶性疟、间日疟及二者混合感染,且灵敏度高,可测范围宽,稳定性好,具有良好应用前景。

FQ-PCR和TRFIA联合检测乙肝标志物的应用探讨

目的:探讨FQ-PCR和TRFIA两种方法联合检测乙肝标志物的临床意义。方法:用荧光聚合酶链反应(FQ-PCR)对患者进行HBV-DNA检测,同时用TRFIA法定量测定HBsAg、抗-HBs、HBeAg、抗-HBe、抗-HBc指标。结果:在1159例患者血清中检测出HBV-DNA病毒基因拷贝值范围为1.2×102～1.1×108IU/ml,平均含量为3.65×106IU/ml,总阳性检出率为52.3%;其中HBsAg(+)、HBeAg(+)、抗-HBc(+)血清中HBV-DNA阳性检出率93.8%(591/630);HBsAg(+)、抗-HBe(+)、抗-HBc(+)血清中HBV-DNA阳性检出率43.2%(401/929);HBsAg(+)、抗-HBc(+)血清中HBV-DNA阳性检出率80.0%(104/130);HBsAg(+)、HBeAg(+)血清中HBV-DNA阳性检出率96.0%(24/25);HBsAg(-)血清中HBV-DNA阳性检出率为7.8%(39/501)。结论:FQ-PCR可以检测HBV的真实感染和复制状态,TRFIA是一种效果好、准确度高、灵敏度高、特异性强、测量精度良好的自动化免疫分析方法,两种方法联合检测综合分析乙肝标志物含量,对判断患者的病情、检测感染状况及病毒的活跃程度都会具有较高的临床意义。

血清SCML2在胃肠胰神经内分泌肿瘤中的表达及临床意义

目的探讨血清SCML2蛋白在胃肠胰神经内分泌肿瘤(GEP-NENs)中的表达及临床意义。方法收集南通大学附属医院2009年1月至2014年1月GEP-NENs组织和血清标本64例,另外收集同时期胃、肠、胰腺癌(均为腺癌)和胃肠息肉手术患者各30例组织和血清标本。采用TRFIA法检测血清SCML2水平,采用免疫组化法检测组织中SCML2蛋白表达。分析血清SCML2表达与GEP-NENs临床病理特征及预后的关系。结果GEP-NENs患者血清SCML2蛋白表达量[(62.50±34.0)ng/ml]明显高于腺癌患者[(24.89±15.32)ng/ml]、胃肠息肉患者[(21.83±16.49)ng/ml],差异具有统计学意义(P<0.05);且血清SCML2蛋白表达与病理类型、病理分级、浸润深度、TNM分期有关(P<0.05)。GEP-NENs患者血清SCML2水平与血清CgA水平(r=0.649,P<0.05)、组织SCML2蛋白表达(r=0.814,P<0.05)呈正相关。ROC曲线分析,血清SCML2诊断GEP-NENs的效能高于血清CgA[0.871(95%CI:0.812~0.930)vs.0.714(95%CI:0.624~0.804)]。GEP-NENs患者随访时间为2~125个月,中位生存时间(OS)为48.0个月(37.6~58.4个月),其中血清SCML2低表达患者中位OS为89.0个月(29.2~148.8个月),高于血清SCML2高表达患者中位OS为42.0个月(28.2~55.9个月),差异有统计学差异(χ^2=9.442,P=0.002)。结论血清SCML2在GEP-NENs患者中的表达量明显升高,与病理类型、病理分级、浸润深度、TNM分期、预后不良有关。

荧光技术在高通量药物筛选中的应用

目的高通量筛选是现代发现药物先导化合物的主要手段之一。荧光技术在高通量药物筛选中被广泛使用,本文对荧光技术在高通量药物筛选中的研究进展进行综述。方法查阅近年国内外文献,对7种荧光检测技术的原理及其在高通量药物筛选中的应用情况进行归纳总结,包括荧光强度分析法、荧光偏振检测法、荧光共振能量转移检测法、均相时间分辨荧光检测法、荧光关联光谱、荧光成像分析、荧光报告系统。结果与结论现在已经建成多种高通量药物筛选模型,利用荧光检测技术进行高通量药物筛选具有广阔的应用前景。

血清高尔基体糖蛋白-73检测对肝癌的诊断价值

目的研究血清高尔基体糖蛋白-73(GP-73)对肝癌的诊断价值。方法时间分辨荧光免疫检测法(TR-FIA)检测79例肝癌、47例肝硬化、30例慢性肝炎及28名正常人血清中GP-73浓度,分析GP-73阳性率与肝癌大小及门脉转移的关系;同步比较GP-73浓度与γ-谷氨酰转移酶同工酶Ⅱ(GGT-Ⅱ)、甲胎蛋白(AFP)诊断肝癌的灵敏度及特异度,探讨三者对肝癌的联合诊断价值。结果肝癌组血清GP-73浓度明显高于肝硬化组、慢性肝炎组及正常对照组(均P<0.05)。根据ROC曲线,当界值为78.1 ng/L时,曲线下面积为0.814,GP-73对肝癌诊断敏感度及特异度分别为73.4%和79.0%。肝癌患者GP-73阳性率与肿瘤大小及有无门脉转移无相关性;血清GP-73、GGT-Ⅱ及AFP之间无相关性,联合检测三项指标可将诊断敏感度提高至96.3%。结论联合检测GP-73、GGT-Ⅱ和AFP可提高肝癌定性诊断水平。

移液器容量准确性判别新方法介绍

移液器是利用空气排代原理设计的量出式加样器,它是临床实验室定性与定量分析的常用工具。其容量的准确性直接关系到实验结果的正确性、可靠性与可重复性[1]。据报道新购置的移液器失准率为1.56%,使用1万次以下的失准率为4%,1万～5万次失准率为8.82%,