铕-吡哌酸时间分辨荧光法检测DNA含量

在pH值为7.2的Tris-HCl缓冲溶液中,铕与吡哌酸反应形成配合物。该体系中加入鲱鱼精DNA分子作用后荧光强度显著增强,并且在一定浓度范围内,DNA浓度与其荧光强度呈良好的线性关系,据此建立了一种简单的测定DNA的时间分辨荧光分析新方法。考查了体系的时间分辨荧光光谱,通过与普通荧光光谱的对比突显了采用时间分辨荧光法的优势,并对反应条件进行了优化。该方法对DNA的检测限为0.03 mg.L-1(3σ),对浓度为4.0 mg.L-1的DNA进行11次平行测定,其相对标准偏差为0.3%。DNA的浓度在0.1～6.0 mg.L-1范围内与荧光强度呈良好的线性关系,线性方程为:ΔI=89.58c(mg.L-1)+0.920 5,线性相关系数r=0.999 6。此方法已应用于合成样品中DNA的测定,结果和加标回收率令人满意。

单值质控图在生乳钙含量时间分辨荧光法测定中的应用

目的研究单值质控图在生乳钙含量时间分辨荧光法快速测定中的应用,借助单值质控图表征合理地赋予被测量之间的分散性,了解测量结果所处的范围,分析影响测量结果的主要因素,从而减少测量的误差。方法利用纯牛奶核查样品(核查样品指质量控制测量中附有参考量值的物料,指定实验室检测样品的检测值),收集钙含量测定数据,分析和计算质量控制图参数,绘制质量控制图幵分析应用效果。结果单值质量控制图法实现了对生乳中钙含量测试结果控制,建立了一种预警响应机制。单值质量控制图法是实现问题快速查找的有效方法之一。结论单值质量控制图应用为实验室技术要素管理和考核评价提供依据。

洛美沙星的铕离子荧光探针时间分辨荧光法测定

采用时间分辨荧光法，以铕离子为荧光探针，依据Eu3＋La3＋-LMX—SDS稀土共发光体系，建立了测定洛美沙星（LMX）含量的新方法。研究了配合物的紫外及荧光光谱，分析了配合物的发光机理，考察了溶液pH值、缓冲溶液种类及反应试剂加入量对配合物荧光强度的影响。在优化的实验条件下，配合物荧光强度和洛美沙星浓度呈线性关系，相关系数为0．9990，线性范围为5．0×10-7-1．0×10～mol／L。方法的检出限为6．8×10mol／L，对5．0×10-6mol／L的洛美沙星溶液测定11次，RSD为0，6％。将该方法用于尿液中洛美沙星含量的测定，回收率为94％～104％。

时间分辨荧光法测定高放废液中的铀

采用时间分辨荧光法分析了高放废液中的铀含量。在2～3mol/L HNO3介质中,高放废液经30%TBP-加氢煤油(OK)萃取除去裂变产物和大量盐分后,用盐析剂4mol/L NaNO3-2mol/L HNO3洗涤有机相,最后用w=5%(NH4)2CO3溶液作为反萃剂反萃有机相中的铀,反萃水相在微量铀分析仪上测定铀含量。方法重加回收率为95%～101%,精密度低于2%。该方法已用于乏燃料后处理中间试验厂高放废液、中和池水样铀的测定,还有望用于含盐量高、组成复杂的其他样品(如环境样品等)铀含量的分析。

甲胎蛋白、癌胚抗原时间分辨荧光法与化学发光法比较

DTPA法制备了 Eu3+ 标单抗 ,采用夹心法建立了 AFP和 CEA IFMA。它们的灵敏度分别为 43 ng/L和 90 ng/L ;批内CV为 1.5 99%和 1.3 6% ;批间 CV为 7.13 9%和 2 .89% ;平均回收率为 10 3 .98%和 92 .78%。与 CL IA进行临床应用比较显示结果高度相关 ( AFP r=0 .90 40 ,CEA r=0 .970 5 )

时间分辨荧光法检测尿微量白蛋白方法学研究及应用

目的 :建立时间分辨荧光法 (TRFIA)测定尿微量白蛋白的方法。方法 :采用铕标记的纯化白蛋白与尿样中的白蛋白竞争结合抗血清的原理 ,在WALLAC VICTOR2 型时间分辨荧光仪上测定尿微量白蛋白。结果 :该法检出限为 2 9mg/L ,线性达 2 0 0mg/L ,批内变异系数为 4 4%～ 1 0 6% ,批间变异系数为 3 9%～ 1 0 3% ,平均回收率为 1 0 2 % (范围 97 2 %～ 1 0 8 6% ) ,与放射免疫法 (RIA)比较相关方程为YRIA=1 0 4X + 0 1 2 ,r =0 981 (n =40 )。结论 :TRFIA法简单易行 ,铕标记物无污染 ,稳定时间长 ( 4°C ,1 8mo) ,该法是临床测定尿微量白蛋白的一种有发展前途的方法。

时间分辨荧光法测定人血清中的癌胚抗原（CEA）

本文提出了测定人血清中癌胚抗原的时间分辨荧光分析方法。此方法是以镧系元素为标记物，标记抗原或抗体，用时间分辨技术测量荧光，同时利用波长和时间两种分辨，有效排除了非特异荧光，提出了分析的敏度。而标记方便，标记物稳定，有较好的准确度和精确度更说明了其方法的优越性。因而具有较好的临床应用前景。

时间分辨荧光法检测宫颈脱落细胞p16^(INK4a)蛋白用于宫颈肿瘤筛查

目的应用时间分辨荧光法(TRFIA)检测宫颈脱落细胞p16^(INK4a)蛋白,将其应用于宫颈肿瘤筛查。方法搜集2015年1月-2016年5在荆门市第一人民医院病理科进行宫颈组织学活检并进行过TCT和/或DNA倍体分析检测标本,宫颈脱落细胞离心甩片进行TCT检测,Feulgen染色行DNA倍体分析,TRFIA方法检测p16^(INK4a)蛋白。结果 694例标本中组织病理学诊断宫颈炎性病变501例,宫颈肿瘤性病变193例,包括低级别上皮内病变(LSIL)83例、高级别上皮内病变89例(HSIL)、鳞状细胞癌(SCC)21例。TCT检测筛查宫颈肿瘤敏感性为76.68%,特异性为87.03%;DNA倍体分析检测敏感性84.97%(优于TCT,χ2=4.280,P=0.039),特异性73.45%(低于TCT,χ~2=29.105,P<0.001)。TRFIA检测p16^(INK4a)筛查宫颈肿瘤敏感性为86.01%,与DNA倍体分析相似(χ~2=0.084,0=0.773),优于TCT检测(χ~2=5.532,P=0.019),且特异性达92.42%,亦优于TCT检测(χ~2=7.889,P=0.005)。结论时间分辨法检测宫颈脱落细胞p16^(INK4a)蛋白用于宫颈肿瘤筛查,敏感性及特异性均较好。如果试剂盒商品化,还具有操作简便、成本低廉、能用仪器自动化检测并给出客观判读结果的优点。

时间分辨紫外脉冲荧光法测定锆矿中的铀

基于前人研究工作,开展时间分辨紫外脉冲荧光法测定天然伴生放射性锆矿样品中铀含量的方法研究。与电感耦合等离子体质谱法相比,该法正确度好、精密度高、抗干扰能力强、适应性强。实验表明体系酸碱度影响荧光强度显著,但当pH值在6.85～9.10范围时,荧光强度较高且相对稳定。对31种阳离子干扰进行实验,结果表明Sn、Cr、Sb、Tl、Rh、Mn、Ag、Bi等阳离子可使荧光强度显著降低;溶液中Zr元素质量浓度低于200μg·mL^(-1)时,对荧光强度影响不明显,Zr元素质量浓度为200～500μg·mL^(-1)时,荧光强度随Zr元素质量浓度的增加而逐渐减弱。采用过氧化钠碱熔-硝酸提取天然伴生放射性锆矿样品,样品能够消解完全。采用标准加入法,用紫外脉冲荧光法测定铀含量,检出限为0.05μg·g^(-1),测定范围为0.15～4500μg·g^(-1);铀含量在40～735μg·g^(-1)时,RSD为2.1%～7.7%;铀含量为288μg·g^(-1)的锆矿样品,正确度为5.2%。

WALLAC-VICTOR^2型时间分辨荧光仪性能评价

时间分辨荧光法(TRFIA)是以稀土元素(钐Sm、铕Eu等)标记抗原、抗体、核酸探针和活细胞等为特征的超灵敏检测技术,它克服了酶标记物的不稳定、化学发光标记仅能一次发光及一般荧光标记受环境干扰的难点,使非特异性信号降低到可以忽略的程度,达到了极高的信噪比,从而显著地超过放射性同位素所能达到的测定灵敏度.本科室从芬兰EG＆G公司引进WALLAC—VICTOR^2型时间分辨荧光仪,为了解其性能和可信度,我们参考有关仪器评价内容和要求的文献进行仪器评价,结果表明,该仪器的精密度、准确性较好,线性范围宽,不受溶血、RF因子的干扰,现报告如下.

时间分辨荧光分析中的铕和钐

时间分辨荧光分析中的铕和钐ＴｏｍＳｔａｈｌｂｅｒｇＥｅｖａＭａｒｋｅｉａＨｅｉｋｋｉＭｉｋｏｌａＰｈｉｌｉｐＭｏｔｔｒａｍＩｌｋｋａＨｅｍｍｉｌａ（ＷａｌｌａｃＯｙ，Ｔｕｘｋｕ，Ｆｉｎｌａｎｄ）时间分辨荧光在常规免疫诊断工作中的实力，比如ＤＥＬＦＩＡ...

基于时间分辨荧光纳米颗粒的磁分离均相免疫分析方法

目的建立一种基于时间分辨荧光纳米颗粒的磁分离均相免疫分析方法并用于检测降钙素原(PCT)重组抗原。方法以PCT单克隆抗体偶联铕离子荧光微球为检测抗体,另一株PCT单克隆抗体偶联生物素作为固相抗体,建立一种通过表面修饰有链霉亲和素的磁珠分离铕离子荧光微球-检测抗体-降钙素原-固相抗体-生物素复合物的均相免疫分析方法。用该法检测PCT重组抗原,通过Sigma Plot分析该法的最低检测限。结果 PCT重组抗原的标准曲线匹配二次函数,函数方程为Y=19170.12+75493.74X-26.00X2(r=0.9986),PCT重组抗原检测灵敏度为0.04 ng/ml。结论铕离子荧光微球可作为标记物应用于磁分离均相免疫分析方法,并在PCT重组抗原检测中获得较高的检测灵敏度。

Eu标记RT-PCR检测丙型肝炎病毒RNA

目的 采用一种新的铕螯合物BHHCT ,制备高灵敏度荧光标记物 ,建立检测丙型肝炎病毒 (HCV)RNA的方法。方法 采用柱层析纯化的方法抽提血清中HCVRNA。以 5′端带有生物素的引物进行RT PCRTth酶一步法扩增 ,通过固定于微孔板上的捕获探针与带有生物素的PCR扩增产物杂交后 ,利用标记有铕的链霉亲合素与生物素的特异性结合 ,将铕连接到待测核酸上 ,在特定波长的激发光激发下发出荧光 ,进行检测。结果 铕标记检测法与酶标法的变异系数、敏感性、特异性分别为10 .43%、10 0 %,10 0 %与 16 .2 5 %,94%,10 0 %。结论 Eu标记RT PCRTth酶一步法检测HCVRNA ,具有敏感、特异、快速、重复性好、不受环境因素影响和无溴乙锭污染等优点 ,可望取代酶标法及电泳法。

不同方法检测乙型肝炎血清学标志物的结果比较

目的 探讨不同方法在乙型肝炎血清学标志物临床检测中的应用价值。方法 用 3种试剂 [酶免法(EIA)、时间分辨荧光法 (TrF)、微粒子酶免疫分析 (MEIA) ]对乙型肝炎初诊疑似患者血清进行 5项标志物检测。结果 TrF试剂检测HBsAg、抗HBs、HBeAg、抗HBe的相对灵敏度、相对特异性和总符合率均优于EIA试剂 ;TrF试剂的最低可检测稀释度与MEIA试剂基本相同。结论 与EIA试剂相比 ,TrF试剂在乙型肝炎 5项血清学指标临床检测中具有相对灵敏度、相对特异性和检测灵敏度较高的优势。

不同型号仪器产前筛查hAFP、游离hCGβ测定结果的可比性研究

目的了解不同型号仪器产前筛查人血清甲胎蛋白（hAFP）、游离人绒毛膜促性腺素B（hCGβ）测定结果的可比性。方法随机抽取妊娠15—20周妇女血清标本84例，各分成2份，一份用Auto DELFIA 1235型自动时间分辨荧光分析仪（简称全自动仪）进行检测，并以此仪器为参考仪器；另一份用WALLAC VICTOR2TM D1420型半自动时间分辨荧光分析仪（简称半自动仪）进行检测，并比较2台仪器测定结果的差异及唐氏综合征（Down’S）和神经管缺陷（NTD）高风险检出情况。结果84例血清标本经全自动仪和半自动仪检测，hAFP结果分别为45．73±18．26（41．76～49．69）U／mL和46．74±19．17（42．58～50．90）U／mL；游离hCGβ的结果分别为15．62±11．54（13．12—18．12）ng／mL和14．38±11．13（11．97～16．80）ng／mL。2种不同型号仪器产前筛查结果间差异有统计学意义（P〈0．01）；2台仪器检测结果的相关系数（r）均〉0．975（P〈0．001）。2台仪器分别检测84例血清标本，均检出Down’S高风险2例和NTD高风险1例，2台仪器检测结果差异无统计学意义（P=1．000）。结论半自动仪用于产前筛查时，筛查结果符合临床要求，但与全自动仪相比还存在一定的系统误差（SE），需要加强对各种影响因素的控制。

3种方法检测HBsAg弱阳性结果比较

目的了解时间分辨荧光(TRFIA)法、酶联免疫吸附试验(ELISA)法及胶体金免疫层析试验(GICA)等检测乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)弱阳性标本结果的差异。方法用TRFIA法检测HBsAg为弱阳性的血清标本100份和阴性血清标本101份,分别用ELISA及GICA方法检测HBsAg含量,对检测结果进行比较分析。结果TRFIA法HBsAg弱阳性标本100份中,ELISA法检测阳性97例,符合率97.0%,特异性96.0%;GICA法检测阳性83例,阳性符合率83.0%,特异性95.0%。ELISA法与TRFIA法检测阳性率间差异无统计学意义(P>0.05),但GICA检测阳性率分别低于ELISA法及TRFIA法(P<0.05)。结论ELISA法检测低浓度HBsAg标本灵敏度与TRFIA法相似,但GICA法灵敏度低于TRFIA法及ELISA法,GICA法检测存在一定的漏检率。

HIV-1整合酶抑制剂体外筛选方法研究进展

整合酶是HIV基因表达和复制所必需的酶,而且宿主细胞内不存在该酶的类似物。因此,HIV-1整合酶已成为设计、筛选抗HIV药物的理想靶点。迄今为止,Raltegravir仍是唯一上市的HIV整合酶抑制剂,而且临床上也已经出现耐药问题。研发新一代整合酶抑制剂非常必要。高通量、高灵敏度、简单易行的筛选方法是研究开发新一代HIV-1整合酶抑制剂的关键。目前,HIV-1整合酶抑制剂筛选方法有多种,各有优缺点,该文将对文献报道的整合酶抑制剂体外筛选方法的最新进展做一介绍。

42979例新生儿促甲状腺素筛查结果分析

目的 :通过新生儿促甲状腺素 (TSH)检测 ,了解浙江省先天性甲状腺功能减低症 (CH)的发病情况。方法 :采新生儿足跟末梢血滴入美国产 S& S 90 3滤纸中 ,应用时间分辨荧光分析技术 (DELFIA) ,以铕标记的 TSH试剂盒进行检测。结果 :在 4 2 979例新生儿中检出 TSH增高的可疑人数 112例 ,经血清 T3、T4、TSH检测确诊为 CH2 9例 ,确诊治疗最早时间为 13d,最晚为 5 9d,平均确诊治疗时间为 (2 7.9± 9.2 ) d。结论 :浙江省新生儿 CH发病率不低 ,开展对新生儿 TSH筛查 ,将有利于优生优育工作的开展和人口素质的提高。

三种方法检测胃蛋白酶原Ⅰ的比较及临床应用

目的探讨时间分辨荧光法（TRFIA）、化学发光免疫分析法（cuA）和酶联免疫吸附法（ELISA）检测胃蛋白酶原Ⅰ（PGI）的相关性，及其临床实用性。方法在TRFIA法检测的临床标本中随机选择88份，分别用CLIA法和ELISA法再次检测PGI，分析三种方法检测结果的相关性；对体检人群、消化科门诊患者和住院患者进行回顾性分析，验证TR—FIA法检测PGI对胃病筛查的可行性。结果TRFIA法（Y）与CLIA法（X），ELISA法（X）PGI检测结果均呈显著正相关（r分别为0．9928和0．9950，P〈0．05），三种方法检测结果的相对偏差（SE％）均〈10％；体检人群、消化科门诊患者、消化科住院患者的血清PGI水平分别为156．0±63．8ng／m1，197．8±113．8ng／ml，269．5±156．5ng／ml，三者差异具有统计学显著性意义（P〈0．05）。结论TRFIA法检测PGI结果可靠、操作方便。

HBV-M定量与HBV-DNA检测的相关性研究

目的:探讨HBV-M定量与HBV-DNA检测的相关性。方法:采用时间分辨荧光定量法(TRFIA)和荧光定量PCR(FQ-PCR)法对360例疑似乙肝患者进行HBV-DNA和HBV-M定量检测。结果:HBeAg(+)组患者血清HBVDNA检出率为95.17%,平均拷贝数为106.53±1.45/ml,HBeAg(-)组患者血清HBV-DNA检出率为53.49%,平均拷贝数为104.52±1.60/ml,HBeAg(+)组的HBV-DNA阳性率,拷贝数明显高于HBeAg(-)组(P<0.05,P<0.01)。HBsAg(-)组患者仍有HBV-DNA阳性者。结论:单凭血清学标志物模式难以判断HBV的复制程度及传染性强弱,定量检测HBV-DNA能真实反映HBV复制情况,对乙型肝炎的诊断及防治提供客观依据。