培养温度、时间对饲用凝结芽孢杆菌菌数的影响

研究采用平板计数法,评估了两个团体标准(T/YNBX 024—2021,简称“云南团标”;T/CSWSL 022—2020,简称“北京团标”)操作步骤中微生物的培养温度、培养时间对饲用凝结芽孢杆菌制剂的菌数检测结果的影响,旨在为确定饲用凝结芽孢杆菌制剂菌数检测的培养温度和时间提供参考。结果显示:无论采用云南团标、还是北京团标,在40℃/24 h“低温、短时”培养条件下,平板上无菌落生长,无菌数检出数据;50℃/24 h“高温、短时”培养的检出菌数显著高于40℃/48 h“低温、长时”(P<0.05),且50℃/24 h“高温、短时”与50℃/48 h“高温、长时”的检出菌数一致。本研究证明,平板计数法检测饲用凝结芽孢杆菌菌数受培养温度和时间影响,以培养温度为50℃、培养时间为24~48 h为宜。

190例念珠菌血症患者血培养报阳时间回顾性分析

目的研究念珠菌血症血培养报阳时间(time to positivity,TTP)对念珠菌菌种鉴别的价值。方法收集南京鼓楼医院2018年1月至2023年3月罹患念珠菌血症患者190例,回顾性分析患者基本信息及分离真菌菌种分布;对不同念珠菌的TTP进行统计学分析,并对热带念珠菌和光滑念珠菌的TTP进行受试者曲线分析。结果190例念珠菌血症患者中60岁以上占62.11%,男性占比高于女性,患者主要分布在重症监护室、心胸外科、普通外科、急诊。190份血液样本共检出白念珠菌79株、热带念珠菌37株、近平滑念珠菌34株、光滑念珠菌26株和其他念珠菌14株。各真菌TTP分别为白念珠菌(35.02±15.92)h、热带念珠菌(17.97±6.09)h、近平滑念珠菌(31.06±10.68)h、光滑念珠菌(56.70±24.92)h;其中,热带念珠菌的TTP<其他念珠菌,差异具有统计学意义(P<0.05);光滑念珠菌的TTP>其他念珠菌,差异具有统计学意义(P<0.0001)。受试者工作曲线显示,热带念珠菌曲线下面积0.9007,95%置信区间(0.8502~0.9513),cut-off值≤23.76 h时的灵敏度为94.59%,特异度为82.35%,阴性预测值和阳性预测值分别为98.44%和56.45%;光滑念珠菌曲线下面积0.8131,95%置信区间(0.7184~0.9078),cut-off值≥46.27 h时的灵敏度为61.54%,特异度为91.46%,阴性预测值和阳性预测值分别为93.75%和53.32%。结论念珠菌血症患者中热带念珠菌TTP<其他念珠菌,光滑念珠菌TTP>其他念珠菌,有助于热带念珠菌、光滑念珠菌与其他念珠菌的早期鉴别。

玻璃化冷冻囊胚复苏后不同体外培养时间对临床妊娠结局的影响

目的 探讨玻璃化冷冻的扩张期囊胚解冻复苏后不同的培养时间对临床妊娠结局的影响。方法 回顾性分析我院2021年1月1日至2022年12月31日期间通过玻璃化冷冻的D5及D6囊胚移植周期临床资料,共1 867周期。根据囊胚复苏后体外培养时间将其分为A组(<2 h,n=958)和B组(2~4 h,n=909),再根据移植囊胚的数目分为两个亚组,移植1枚囊胚定义为A1组(n=843)和B1组(n=798),移植2枚囊胚定义为A2组(n=115)和B2组(n=111)。比较各组HCG阳性率、临床妊娠率、胚胎着床率、多胎率、早期流产率及最终活产率之间的差异。结果 患者的平均年龄、不孕年限、内膜厚度以及基础激素水平等在A1和B1组、A2和B2组之间均无显著差异(P>0.05)。妊娠结局方面,移植1枚囊胚的两组(A1和B1)间HCG阳性率、临床妊娠率、胚胎着床率、多胎率、早期流产率、异位妊娠率和活产率比较均无显著差异(P>0.05);移植2枚囊胚的两组(A2和B2)比较,A2组的HCG阳性率显著高于B2组(91.30%vs. 79.28%,P<0.05),A2组临床妊娠率(81.74%vs. 71.17%)、胚胎着床率(61.30%vs. 54.05%)、活产率(67.83%vs. 63.06%)也均高于B2组,但差异无统计学意义(P>0.05)。Logistic分析结果表明,移植2枚冻融囊胚时体外培养时间<2 h是HCG阳性率的独立影响因素[OR=2.210,95%CI(1.028,4.752),P=0.042]。结论 双囊胚移植周期解冻后应尽量在2 h内移植,以便获得更好临床结局;单囊胚移植者解冻后在4 h内移植临床妊娠结局并无明显差异。

不同基质和培养时间对球孢白僵菌孢子耐逆性研究

球孢白僵菌孢子是应用最广泛的真菌杀虫剂关键因子,为了解不同培养基和培养时间对球孢白僵菌孢子抗逆能力的影响,从采集自全国不同温区30株球孢白僵菌菌株中筛选出5株生长快、产孢量大的菌株——RCEF5609、RCEF5746、RCEF5688、RCEF6200和RCEF6857。采用营养丰富度不同的常用培养基(PDA、SDAY和MEA)和不同培养时间两个方面研究菌株耐热和抗紫外性,并分析相关基因转录水平上的变化。结果表明,菌株RCEF6200和RCEF5688分生孢子发芽率最高,抗逆性最强,RCEF5609孢子萌发率最低,抗逆性最弱;营养贫瘠的PDA较营养丰富的SDAY和MEA产生的孢子更有利于耐热和抗紫外,培养7 d的分生孢子抗逆性更强。进一步分析抗逆性最强的菌株RCEF6200和抗逆性最弱的菌株RCEF5609抗逆基因转录水平,结果显示,菌株RCEF6200和RCEF5609逆境胁迫后与对照组相比,在PDA培养基上和7 d的培养条件下,较其他处理中耐热性和抗紫外线相关基因表达水平呈不同程度增加,可见抗逆相关基因转录分析结果进一步验证上述结果。研究为生产抗逆性强的球孢白僵菌菌剂提供一定理论基础。

灰树花菌丝体不同培养时期代谢组学分析

为了解不同生长时期灰树花(Grifola frondosa)菌丝体的代谢产物差异及其通路,该研究采用HPLC-MS/MS分析方法对培养10、20、30 d的灰树花菌丝体进行分析。结果表明:(1)共42类584种代谢物被鉴定出,其中159种、47种和165种代谢物在对照组(10 d vs 20 d、20 d vs 30 d、10 d vs 30 d)中表现出不同的积累模式,不同培养时间的代谢物成分差异显著。(2)培养10 d产生较多与促进菌丝体生长和氧化供能有关的物质,培养20 d产生或积累了多种对人体有益的次生代谢物,如橄榄苦甙、甘胆酸、N-甲基酪胺、Alprazolam,培养30 d菌丝体中含有多种与产生香气有关的物质。(3)KEGG代谢通路富集分析,10 d vs 20 d比较组、20 d vs 30 d比较组和10 d vs 30 d比较组分别富集到163条、81条、137条代谢通路,氨基酸代谢在菌丝体不同培养时间中的影响最大。该研究初步探索了灰树花菌丝体的差异代谢物及代谢通路,并发现不同培养时间灰树花菌丝体代谢产物具有明显的差异,以及菌丝体中部分成分含量与培养时间有关,对灰树花菌丝体的质量控制和机理研究具有一定的参考价值。

血培养报阳时间对于血流感染病原菌检测的临床意义

目的:探讨血培养报阳时间(TTP)对于血流感染病原菌检测的临床意义。方法:回顾性分析盱眙县人民医院2020年5月至2021年12月成人血培养阳性瓶的TTP,分别按照需氧瓶、厌氧瓶检出的革兰阴性杆菌、革兰阳性球菌分组,进行组内总体菌种TTP的统计学比较及组内两两菌种的TTP比较。结果:需氧瓶检出的革兰阴性杆菌中大肠埃希菌的TTP10.32(7.68,13.44)h小于非发酵革兰阴性杆菌的TTP15.84(12.18,20.58)h,差异有统计学意义(P<0.05);厌氧瓶检出的革兰阴性杆菌包括大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌肺炎亚种、其他肠杆菌细菌的TTP分别为9.84(7.20,13.20)h、11.00(8.04,15.72)h、10.80(7.44,18.96)h,三者比较差异无统计学意义(P>0.05);需氧瓶检出的革兰阳性球菌的TTP中,金黄色葡萄球菌11.76(4.56,16.32)h小于凝固酶阴性葡萄球菌属22.44(19.38,28.38)h,金黄色葡萄球菌11.76(4.56,16.32)h小于微球菌属(48.05±30.57)h,链球菌属(14.60±4.54)h小于微球菌属(48.05±30.57)h,差异有统计学意义(P<0.05);厌氧瓶检出的革兰阳性球菌的TTP中,金黄色葡萄球菌13.44(9.12,18.36)h小于凝固酶阴性葡萄球菌属26.16(20.16,37.20)h,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:血培养阳性瓶的TTP结合血涂片革兰染色形态结果对初步判定血培养检出菌的种类具有辅助意义。

广叶绣球菌低分子质量多糖的液体发酵培养条件及提取工艺优化

广叶绣球菌(Sparassis latifolia)为名贵的食药用菌,多糖为其重要活性成分,低分子质量多糖在抗氧化、抗肿瘤等方面功效突出。为提高液体发酵广叶绣球菌菌丝体及胞内低分子质量多糖产量,增大提取效率,该文采用单因素法及响应面法分别对其培养条件及提取工艺进行优化。单因素优化验证结果显示,液体发酵培养基碳源为15 g/L可溶性淀粉,氮源为8 g/L牛肉膏,pH值为5,发酵17 d时,广叶绣球菌XQJ-1的菌丝体干重为(6.03±0.25)g/L,胞内多糖达到(433.25±37.46)mg/L,处于较高的优化水平;响应面法对XQJ-1胞内多糖的提取优化表明,提取次数2次,提取时间2.4 h,液料比31:1(mL:g),温度89℃时,胞内多糖得率为(8.82±0.15)%,达到较高的提取效率。为广叶绣球菌及低分子质量多糖的进一步开发利用提供参考。

碳、氮源浓度和培养时间对裂殖壶菌生长和脂肪酸组成的影响

对细胞干重的测定和应用气相色谱仪测定了不同碳、氮源浓度和不同培养时间下裂殖壶菌（Schizochytrium limacinum）0UC88的生长和脂肪酸的组成。结果表明，在含有9％的葡萄糖和6％的豆粕水解物的培养基中，细胞生物量达到最高，为25．92g/L；在含有6％的葡萄糖和2％的豆粕水解物的培养基中，细胞总脂含量以及总脂中的DHA含量均达到最高，分别为50．56％和35．83％。另外，不同生长时期内裂殖壶菌的总脂含量和脂肪酸组成不同。在培养到第4～5天，细胞的生物量、总脂以及DHA产量均最高。

人卵裂期胚胎玻璃化冻融体外培养时间对妊娠结局的影响

目的研究人卵裂期胚胎玻璃化冻融体外培养时间对妊娠结局的影响。方法对我中心进行的解冻胚胎数不超过3枚,解冻胚胎全部存活并全部移植的274例患者分为当日移植组(A组)和次日移植组(B组),比较组间临床妊娠率、种植率和流产率。结果胚胎龄为第2天(D2)的共163个周期,其中A组130个周期,临床妊娠率、种植率和流产率分别为:23.08%、11.71%和6.67%,B组33个周期,临床妊娠率、种植率和流产率分别为:27.27%、11.84%和11.11%;胚胎龄为第3天(D3)的共111个周期,其中A组94个周期,临床妊娠率、种植率和流产率分别为:36.17%、19.35%和8.82%,B组17个周期,临床妊娠率、种植率和流产率分别为:35.29%、20.45%和16.67%。D2和D3胚胎当日移植组和次日移植组之间的临床妊娠率、种植率和流产率均无统计学差异。结论延长体外培养时间不显著影响玻璃化冻融卵裂期胚胎的发育潜能,可根据需要灵活安排玻璃化冷冻胚胎的解冻时间。

淹水培养时间对水稻土中Fe(Ⅲ)异化还原能力的影响

为了模拟水稻土淹水过程,探讨不同淹水培养时间水稻土中铁还原微生物群落利用不同碳源的活性变化特征,以接种不同淹水时期的浙江水稻土浸提液作为微生物群落来源,以人工合成的Fe(OH)3为惟一的电子受体,不同碳源作为惟一电子供体,在30℃恒温条件下厌氧培养,定期测定Fe(Ⅱ)含量和pH值变化,采用Logistic模型进行动力学分析。研究结果表明,葡萄糖作为电子供体时,不同淹水时期的微生物群落总体上对Fe(OH)3还原反应有较快的响应;丙酮酸盐作为碳源时,铁还原反应启动的时间整体迟于葡萄糖,Fe(Ⅱ)累积量在反应30d才表现出显著累积并逐渐趋于稳定;淹水20d的微生物群落能最先利用乳酸盐还原Fe(Ⅲ),反应15 d的Fe(Ⅱ)累积量达到601.60 mg.L-1;淹水30 d的铁还原微生物群落对乙酸盐的利用能力增强,最大Fe(Ⅱ)累计量升高到538.47 mg.L-1,Fe(Ⅲ)还原率达到75.81%。不同淹水时期利用各种碳源的体系pH表现为葡萄糖从中性下降至酸性,丙酮酸盐和乳酸盐中性偏酸,乙酸盐的pH略微偏碱,不同淹水时期出现的水稻土微生物群落结构不同是导致Fe(OH)3还原能力不同的主要原因。不同的碳源利用可以指示不同的铁还原微生物群落变化:淹水培养早期的铁还原微生物群落对葡萄糖和丙酮酸盐的利用较为迅速和显著,同一时期出现的微生物群落不能以乙酸盐作为电子供体;淹水培养后期的铁还原微生物群落以乳酸盐和乙酸盐为优势碳源来还原Fe(OH)3。

空气含菌量与培养时间的关系

空气采样样本，通过培养不同时间的观察表明，培养２４小时，时间过短，细菌生长的菌落数仅达最终菌量的７０．７３％，培养７２小时，时间过长，大部分样本菌落数不再增加；培养４８小时，细菌菌落数可达最终菌量的９６．０２％，基本代表了空气中细菌的含量。

不同培养时间与培养基pH值对体外实验中喹诺酮类抗解脲脲支原体药物敏感性的影响

目的研究不同培养时间及培养基pH值对左氧氟沙星、司帕沙星及加替沙星在体外抗解脲脲支原体（Uu）MIC的影响。方法用微量液体倍比稀释法,测定了35株临床Uu对3种药物在pH值6.0、6.5、7.0的培养基中,分别培养24、36、48、60 h时的MIC并统计分析。结果60 h的MIC与48 h相同,pH值〉6.5时,Uu对加替沙星100.0%敏感;司帕沙星耐药率较高;在不同pH值时,培养时间由24 h延长到36 h及48 h,左氧氟沙星、司帕沙星及加替沙星的MIC分别可增加1-32、1-8及1-16倍（各组P〈0.05）,耐药率也逐渐升高;pH值由6.0升高到6.5及7.0时,在不同培养时间,司帕沙星及加替沙星的MIC均可降低1-8倍（各组P〈0.05）,耐药率均逐渐降低;而左氧氟沙星的MIC50、MIC90及耐药率均升高。结论体外实验中,司帕沙星及加替沙星的MIC随培养时间延长而升高,随培养基pH值升高而降低;左氧氟沙星的MIC随培养时间延长及pH值升高而升高;加替沙星有良好的抗Uu活性;培养48 h可以作为测定MIC的终点时间。

培养时间对黑木耳酯酶同工酶谱的影响

为准确地将酯酶同工酶技术应用于食用菌菌株鉴别和遗传育种研究以及进行快速的菌种区分、鉴定,本试验对10个黑木耳菌株不同培养时期的胞内酯酶(EST)同工酶谱进行了研究,并对菌株间亲和性试验结果进行分析。结果表明:同一培养时期的各菌株间同工酶谱存在明显差异,不同培养时期同一菌株同工酶谱也存在一定的差异。培养20d诱导的同工酶谱可有效区分、鉴定各菌株。聚类分析结果表明:培养20d的酶谱聚类分析结果与亲和性试验结果相一致。

尿素浓度、培养时间和温度对3种土壤尿素水解过程的影响

采用较宽幅度尿素浓度、不同温度和不同培养时间对潮土、灰钙土和黄棕壤中尿素水解过程进行了研究。结果表明 ,尿素水解速率深受土壤类型、尿素浓度、温度和培养时间的影响。在 2 5～ 45℃范围内 ,当土壤溶液中尿素浓度大于3 6 6 1mol/L以上时 ,灰钙土的尿素水解速率剧烈下降 ,培养时间越长 ,降幅越大。潮土在尿素浓度大于 5 0 0 8mol/L时也有类似现象。潮土和黄棕壤中存在高亲和性和低亲和性尿素水解反应 ,而灰钙土仅表现出低亲和性反应。土壤脲酶对尿素的亲和系数和尿素水解反应的最大初速度的大小受土壤类型。

不同培养液及不同培养时间对犬卵母细胞体外成熟的影响

试验采集犬卵巢,用切割法回收卵泡中的卵母细胞,选取胞质均匀、2层或2层以上颗粒细胞、直径≥110μm的卵母细胞移入不同的培养液中:(A)M199+10%FBS+0.5μg/mL FSH+10 IU/mL hCG,(B)M199+0.1%PVA进行体外成熟培养。在培养不同时间(0,48,72 h)用1%醋酸地衣红染色,在显微镜下观察卵母细胞核成熟情况,探索适宜犬卵母细胞体外成熟的培养体系。结果表明:卵母细胞在A液中培养48 h MII期比例(7.84%)高于B液中的比例(P<0.01);在培养72 h MII期比例也是A液中(8.00%)高于B液,虽然二者差异不显著(P>0.05),但72 h卵母细胞退化比例高于48 h(P<0.01)。因此培养液中添加FBS,FSH和hCG有利于犬卵母细胞体外成熟,且在此培养液中培养48 h为最佳成熟时间。

光照和培养时间对紫球藻细胞脂肪酸含量的影响

紫球藻中高不饱和脂肪酸含量丰富 ,AA与 EPA二者之和可达总脂肪酸的 46.6。不同生长时期的紫球藻脂肪酸组成不同。光强不仅影响藻体中类脂的含量 ,而且影响着各种脂肪酸在总脂肪酸中的比例。

辅助孵化与培养时间对冻融胚胎移植结局的影响

目的分析胚胎冻融后体外培养时间以及采用激光辅助孵化(AH)技术对临床妊娠率的影响。方法126名患者,130个冻融胚胎移植周期,按照是否实施AH技术分为AH组和非AH组,又按胚胎解冻后的不同培养时间进一步将两者分为2h(A/A’组)、1d(B/B’组)及2d组(C/C’组)。冻融胚胎采用慢速冷冻-快速解冻方法。冻融后的胚胎均置囊胚培养液培养2h、1d或2d,自1.48μm双极二氧化碳激光系统(ZILOS-tk)安装后的冻融胚胎均施行AH技术。结果AH组培养2h、1d、2d三组临床妊娠率之间有显著性差异(P<0.05);在培养1d与2d组中,实施AH与非AH组的临床妊娠率之间亦有显著性差异(P<0.05)。结论应用激光AH技术以及胚胎冻融后培养至桑椹胚或囊胚时行胚胎移植均显著提高冻融胚胎移植的临床妊娠率。

蔗糖浓度及ICSI前培养时间对人卵母细胞慢速冷冻影响的初步研究

目的:研究2种蔗糖浓度对人类卵母细胞冻融结果的影响。方法:采用慢冻-快融程序化冷冻方法冻融不同时期的人卵母细胞,根据冷冻液中蔗糖浓度不同分为二组(A组:0.2mol/L蔗糖组;B组:0.3mol/L蔗糖组),比较其复苏后存活情况。B组复苏后成熟卵母细胞培养不同的时间行单精子卵胞浆内注射(ICSI),分析培养时间对卵母细胞受精和发育结果的影响。结果:相对于A组的冷冻方法,B组明显提高了未成熟卵母细胞和成熟卵母细胞的存活率(72.0% vs 54.4%,68.8% vs 44.4%),二组卵母细胞复苏后形态异常率无明显差异;复苏后存活的成熟卵母细胞ICSI前培养3-4h后受精率、优质胚胎率、囊胚形成率明显高于培养1h、2h和5h。结论:适当提高蔗糖浓度更有利于各时期卵母细胞的冻存,复苏的成熟卵母细胞培养3-4h有助于卵母细胞结构的恢复,提高正常受精率和后期发育潜能。

螺旋藻脂肪酸随培养时间、温度和营养盐变化的研究

研究了螺旋藻脂肪酸随培养时间(生长周期、昼夜)、温度和营养盐(氮、磷、碳和铁)的变化.结果表明在螺旋藻的生长周期内,其体内脂肪酸随培养时间而变化,呈现出多样性的趋势,随温度的变化亦是如此.不论用Zarrouk配方或MSS-1配方培养的螺旋藻,其体内均富含C18∶4,C18∶2和一定量的γ-亚麻酸(C18∶3).用Zarrouk配方淡水培养时,体内总不饱和脂肪酸含量在4～13d内最高为4 5%～5 2%(以干重表示),7d后产生γ-亚麻酸;用MSS-1配方海水培养,其体内总不饱和脂肪酸含量在2～7d内最高为4 4%～6 6%,仅第10～13天含C18∶3.在一个日变化中螺旋藻体内总不饱和脂肪酸和C18高度不饱和脂肪酸含量早上08:00最高,1d的变化幅度为51%～57%.螺旋藻在30℃培养,其体内脂肪酸组成最丰富,γ-亚麻酸含量最高;在20～30℃随着温度升高,总不饱和脂肪酸增加21%,C18高度不饱和脂肪酸下降8%;在35℃总不饱和脂肪酸和C18高度不饱和脂肪酸均下降,幅度为65%～70%.此外,营养盐氮、碳和氮、铁分别是总不饱和脂肪酸和C18高度不饱和脂肪酸的主要影响因子.

微生物生态研究中Biolog Eco微平板培养时间对分析结果的影响

Biolog Eco微平板法已广泛用于环境微生物研究,能很好地反映不同环境下微生物群落差异性特征,而分析结果可能会受Eco微平板培养时间的影响,据此,本研究从AWCD值、微生物群落多样性指数、碳源代谢强度及代谢方式和PCA分析等角度,探讨了Biolog Eco微平板培养时间对分析结果的影响特征.研究表明:Biolog Eco微平板培养时间处于AWCD曲线"拐点"前与"拐点"后对分析结果影响显著(p<0.05),且"拐点"前各培养时间段微生物群落特征的分析结果明显不同,但培养时间处于AWCD曲线"拐点"处及其后各培养时间段的分析结果基本一致,且培养时间对分析结果的影响很小或可忽略不计,可能会较客观地反映环境微生物群落特点及不同样品间的差异性.因此,采用Biolog Eco微平板分析环境微生物群落特征时,建议微平板选择240h培养并连续读数,再根据240h的AWCD曲线"拐点"进行数据合理地选取和分析,得出的结论相对可能会与实际环境情况更为接近.